Показатели повреждения нейтрофилов (ППН-тест) у собак и кошек зараженных микобактериями туберкулеза бычьего вида

Показатели повреждения нейтрофилов ( ППН - тест ) основан на определении изменений в структуре ядра и в цитоплазме нейтрофилов , возникающих под воздействием специфического аллергена – туберкулина . Метод был предложен А . А . Фрадкиным (1985) для диагностики туберкулеза у людей . Данный метод в ветеринарной практике использован для диагностики туберкулеза и дифференциации неспецифических туберкулиновых реакций у крупного рогатого скота Н . М . Смирновым (2004) и Ф . Р . Латыповым (2007).

Нами изучена возможность и эффективность применения показателей применения нейтрофилов ( ППН - тест ) при диагностике туберкулеза собак и кошек .

Материал и методы . В опыте использовали 12 собак разных пород и 9 кошек . Их разделили на 3 группы собак по 4 животных кошек по 3, из которых первые две группы опытные а 3 служила контролем .

Перед заражением собаки и кошки были исследованы на туберкулез путем внутрикожного введения 0,1 мл туберкулина для млекопитающих . Учет реакции осуществлялся через 48 часов . Реакция на туберкулин у всех животных была отрицательная . Кровь у животных для постановки ППН брали до и через 30-60 дней после заражения микобактериями туберкулеза из краевой ушной вены в стерильные мини пробирки с добавлением антикогулянта (5% - цитрата натрия из расчета (9:1). Затем в лунки стерильного планшета добавляем по 40 мкл цитрированной крови и в эти же лунки приливали соответствующие аллергены . В качестве специфического аллергена использовали очищенный ППД туберкулин для млекопитающих . Для контроля специфичности аллергического состояния организма путем повреждения нейтрофилов применяли бруцеллезный антиген для РА , РСК , РДСК и стерильный физиологический раствор . Показатели повреждения нейтрофилов до заражения животных туберкулезом приведены в таблице 1.

Собак и кошек опытных групп заразили микобактериями туберкулеза bovis, которая вводилась животным первой группы внутривенно из расчета 0,15 мкг на 1 кг живой массы тела в 1 мл физраствора , животным второй группы подкожно из расчета 0,60 мг на 1 кг живой массы тела . Животные 3 группы служили контролем .

Результаты исследований .

• 1.    Показатели повреждения нейтрофилов ( тест ППН ) у собак до и через 30

• 2.    Показатели повреждения нейтрофилов ( ППН - тест ) у кошек до и после заражения микобактериями туберкулеза бычьего вида

  Вид и группа животных	ППД - туберкулин для млекопитающих	Бруцеллезный антиген	Физиологический раствор
  До заражения ( М ± т ) Р 0,05
  Кошки 1	3,2± 1,2	3,3± 3,1	2,8± 0,9
  2	2,8± 0,1	4,4± 2,1	2,5± 1,1
  3 контроль	3,2± 0,3	3,6± 0,3	3,4± 0,3
  Через 30 суток после заражения
  Кошки 1	38,2± 2,2	4,3± 0,5	4,2± 0,3
  2	34,3 ±1,1	2,8± 0,3	3,8 ±0,5
  3 контроль	3,9± 0,7	3,1± 0,2	3,4± 0,2
  Через 60 суток после заражения
  Кошки 1	42± 2,2	2,1± 0,3	3,7± 0,6
  2	4,6± 1,3	4,2 ±0,5	2,3± 0,8
  3 контроль	4,2± 0,4	4,6 ±0,3	2,1± 0,6

60 дней после заражения микобактериями туберкулеза бычьего вида

Из таблицы видно , что ППН – тест у всех собак до заражения их микобактериями туберкулеза бычьего вида колебался от 1,3± 0,4 до 2,4± 0,2 %. Спустя 30 суток после заражения в опытных группах собак показатели ППН при инкубировании со специфическим аллергеном ППд - туберкулином составили в первой группе 36,6 ±1,0, во второй группе 30,2± 2,0%, а в группах , где использовали в качестве аллергена бруцеллезный антиген , а также физиологический раствор показатели повреждения нейтрофилов не превышали 3,7± 0,5%.

Спустя 60 суток после заражения при инкубации с ППД туберкулином % повреждения нейтрофилов увеличился . В первой группе он вырос до 51± 2,8%, во второй группе 53± 2,6%. Процент повреждения нейтрофилов с бруцеллезным антигеном и физраствором не превышал 4,6± 0,6%, что свидетельствует о специфичности тест – ППН с туберкулином . Высокий процент повреждения нейтрофилов при инкубации крови с ППД – туберкулином отмечалось у животных , зараженных микобактериями туберкулеза независимо от метода заражения их . Тогда как , у контрольных животных , исследованных в эти же сроки , показатель повреждения нейтрофилов не превышал 3,6± 0,7 %.

Как видно из таблицы № 2 у всех кошек до заражения микобактериями туберкулеза , показатели повреждения нейтрофилов колебались от 3,2± 1,2 до 4,4± 2,0%. Спустя 30 суток после заражения ППН – тест составил : в первой группе кошек 38,2± 2,2, во второй группе 34,3 ±1,1 при контроле 3,9± 0,7%. При инкубации с бруцеллезным антигеном и физраствором показатели повреждения нейтрофилов не превышали 4,3± 0,5%.

Через 60 суток после заражения процент поврежденных нейтрофилов с ППД – туберкулином составил в первой группе 42,2± 2,2; во второй группе 46± 1,3%, при контроле 4,2± 0,4%. При инкубации с бруцеллезным антигеном и физраствором показатели ППН также не превышали 4,2± 0,5 %.

В результате проведенных исследовании установили , что у зараженных туберкулезом собак и кошек , наиболее значительные изменения , повреждения нейтрофилов отмечаются при инкубации крови с ППД туберкулином . С гетерогенными аллергенами показатели повреждения нейтрофилов ( ППН ) у зараженных туберкулезом собак и кошек варьировали в незначительных пределах от 4,2± 0,4 до 2,8± 0,3 %.

Выводы : 1. У зараженных туберкулезом собак и кошек при инкубировании крови только со специфичным аллергеном удается получить положительный результат теста – ППН . 2. Показатели повреждения нейтрофилов ( тест – ППН ) является специфичным и как дополнительный метод вполне может быть использован для диагностики туберкулеза собак и кошек .

ЛИТЕРАТУРА : 1. Кудрявцева А . А . « Исследование крови в ветеринарной диагностике » ( А . А . Кудрявцева ) Часть 1.- М .: Государственное издательство с / х литературы , 1952.- с .291-325. 2. Латыпов Ф . Ф . « Показатели повреждения нейтрофилов ( ППН ) при экспериментальном туберкулезе свинок ». 3. Материалы Всероссийской конференции молодых ученых , посвященной 450 летию вхождения Удмуртии в состав России . г . Ижевск , 2006, с . 61-64. 4. Латыпов Ф . Ф . « Изучение теста ППН для диагностики и дифференциальной диагностики туберкулеза крупного рогатого скота в неблагополучных по туберкулезу хозяйствах » ( Ф . Р . Латыпов , М . А . Сафин ). Ученые записки КГАВМ , том 188, Казань , 2006. с . 145-150. 5. Фрадкин В . А . « Диагностика аллергии реакциями нейтрофилов крови » ( В . А . Фрадкин – М .: медицина , 1985. с . -176.

ПОКАЗАТЕЛИ ПОВРЕЖДЕНИЯ НЕЙТРОФИЛОВ ( ППН - ТЕСТ ) У СОБАК И КОШЕК ЗАРАЖЕННЫХ МИКОБАКТЕРИЯМИ ТУБЕРКУЛЕЗА БЫЧЬЕГО ВИДА

Сафина Ч . М .

Резюме

Показатели повреждения нейтрофилов ( тест - ППН ) являются специфичными , может быть рекомендован для использования в диагностике туберкулеза собак и кошек .

NEUTROPHILE DAMAGE INDICES ( PPN-TEST) IN DOGS AND CATS INFECTED WITH BOVINE TUBERCULOSIS MICOBACTERIA

Safina Ch.M.