Полиморфизм гена CCR5 среди образцов общественного банка пуповинной крови ООО Покровский банк стволовых клеток

CCR5. Мутантная аллель гена CCR5 несет деле-цию в 32 пары нуклеотидов, которая приводит к экспрессии нефункционального рецептора что в свою очередь препятствует проникновению ВИЧ в клетку. Вследствие этого носители мутации CCR5delta32 в гомозиготном состоянии обладают практически полной резистентностью к инфицированию ВИЧ. Особое внимание к данной мутации привлек случай трансплантации гемопоэтических стволовых клеток (ТГСК) костного мозга ВИЧ инфицированному реципиенту с острым миелоидным лейкозом в 2007 году в Германии. После трансплантации ВИЧ не обнаруживался в организме реципиента. Оказалось,что донор стволовых клеток пуповинной крови нес в гомозиготном состоянии аллель с мутацией CCR5delta32. В 2019 году опубликованы данные о двух новых случаях излечения ВИЧ-инфекции в результате ТГСК от доноров с мутацией CCR5delta32

Всероссийская научно-практическая конференция с международным участием «АКТУАЛЬНЫЕ ВОПРОСЫ ГЕМАТОЛОГИИ И ТРАНСФУЗИОЛОГИИ»

Санкт-Петербург 30-31 мая 2019 г.

в гомозиготном состоянии. Данные клинические случаи свидетельствуют в пользу перспективности применения стволовых клеток пуповинной крови с мутацией CCR5delta32 для терапии ВИЧ-инфекции. Таким образом, особую ценность имеет информация о полиморфизме образцов пуповинной крови по гену CCR5 в общественном банке стволовых клеток.

Цель исследования . Генотипирование образцов пуповинной крови общественного банка ООО «Покровский Банк стволовых клеток» для идентификации образцов,в генотипе которых содержится мутация CCR5delta32 в гомозиготном состоянии.

Материалы и методы . Материалом для данного исследования послужили 245 образцов пуповинной крови, полученных ООО «ПБСК» с 2015 по 2019 год. Также в работе приводятся данные И. А. Пирожкова по образцам, полученным за период с 2009-по 2014 год. Выделение ДНК из 5 мкл крови производили с помощью ионообменной смолы Chelex 5 %. Полученные образцы ДНК были амплифицированы в ходе

ПЦР со специфичными праймерами к гену CCR5. ПЦР-продукты были визуализированы в 8 % полиакриламидном геле.

Результаты . Генотипировано 245 образцов стволовых клеток пуповинной крови. Частота мутантной аллели CCR5delta32 соответствует уже известным данным о ее распределении в популяции Северо-Западного региона.

Выводы . Получены новые данные о распределении генотипов CCR5 в Северо-Западном регионе Российской Федерaции. Метод выделения ДНК из крови с помощью ионообменной смолы Chelex не требует больших трудозатрат имеет низкую стоимость по сравнению с другими методами выделения ДНК и позволяет обработать большое количество образцов за короткие сроки. Разработанная методика по определению полиморфизма CCR5delta32 методом ПЦР может быть использована в клинической практике для оценки предрасположенности человека к ВИЧ-инфекции, а также для прогнозирования динамики развития СПИД у ВИЧ-инфицированных.