Получение гипериммунной поливалентной сыворотки против острых респираторно-кишечных инфекций крупного рогатого скота

Нарушения технологии содержания животных в животноводстве в основном связаны со скученным содержанием поголовья, несоблюдением микроклиматических параметров, несбалансированным кормлением животных разных половозрастных групп. Следствием этого является снижение общей резистентности организма и подверженность к действию внешних неблагоприятных факторов. У ослабленных животных поствакцинальный иммунитет формируется на неудовлетворительном уровне. В результате повышается риск возникновения и распространения остропротекающих инфекций. Наиболее часто регистрируемые вирусные заболевания из группы респираторнокишечных инфекций – инфекционный ринотрахеит (ИРТ), вирусная диарея (ВД), респираторно-синцитиальная инфекция (РСИ), парагрипп-3 (ПГ-3). Зачастую данные вирусные инфекции протекают в ассоциированной форме с другими микроорганизмами, что затрудняет диагностику, осложняет течение заболевания и делает прогноз выздоровления не столь благоприятным [2,5]. В этих обстоятельствах снижение рентабельности предприятия будет складываться от уменьшения среднесуточных привесов, вынужденного убоя, падежа молодняка и увеличения расхода кормов и медикаментов [1, 3, 4, 5, 7].

Ветеринарные специалисты для борьбы с острыми инфекционными заболеваниями молодняка крупного рогатого скота применяют различные биопрепараты – вакцины, гипериммунные сыворотки, интерфероны. Основным звеном в проведении профилактических мероприятий является вакцинация всего восприимчивого поголовья с учетом конкретной эпизоотической обстановки. Немаловажную роль играет правильно разработанная схема вакцинации, от которой напрямую зависит напряженность иммунного ответа, формирование колострального иммунитета у молодняка [1, 2, 4, 6, 8].

Для проведения пассивной иммунизации на новорожденных телятах применяют поливалентную гипериммунную сыворотку, что существенно снижает риск их заболеваемости и последующего падежа. В настоящее время наиболее широко используют биопрепараты производства Армавирской биофабрики: гипериммунная сыворотка против пастереллеза, сальмонеллеза, эшерихиоза, инфекционного ринотрахеита, парагриппа-3, а также препарат «Иммуносерум», содержащий антитела против парагриппа-3, инфекционного ринотрахеита, вирусной диареи, рота-, корона- и аденовирусов [3, 4, 6, 7]. Недостатком этих препаратов можно считать отсутствие в их составе защитных антител против некоторых возбудителей острых инфекций, которые выявляются в отдельно взятых хозяйствах.

Целью наших исследований явилось получение опытной гипериммунной полиспецифической сыворотки против респираторно-кишечных инфекций крупного рогатого скота с использованием экспериментальной схемы иммунизации животных-продуцентов.

Материал и методы исследований. Работу выполняли на базе ОП УНПК «Ижагроплем», принадлежащего УдГАУ. Предприятие является благополучным по острым и хроническим инфекционным заболеваниям.

С целью получения гипериммунной сыворотки использовали волов– продуцентов живой массой 380-400 кг. Предварительно проводили исследование сыворотки крови для исключения инфекционных заболеваний. Для гипериммунизации отобранных животных использовали ассоциированную вакцину против ИРТ, ПГ-3, ВД (ВНИИЗЖ), а также моновалентные вакцины против колибактериоза, сальмонеллеза и пастереллеза производства Армавирской биофабрики. Препараты вводили 4-х кратно в нарастающих дозировках по 5, 10, 15 и 20 мл с интервалом по 7 дней подкожно в предлопаточную область и внутримышечно в область крупа с левой и правой сторон. Начиная со второй инъекции, параллельно вводили цианокобаламин по 1500 мкг внутримышечно для стимуляции гемопоэза. Общее клиническое состояние животных за весь период наблюдения оставалось без видимых изменений. До эксперимента, а также после каждого введения вакцинных антигенов на 7-ой день определяли динамику специфических антител в сыворотке крови к антигенам ИРТ, ВД в реакции непрямой гемагглютинации (РНГА), к ПГ-3 – в реакции торможения гемагглютинации (РТГА), используя диагностические наборы ООО «Агровет», г. Москва, к бактериальным антигенам – в реакции агглютинации (РА). Завершающее исследование сыворотки крови проводили через 21 день после 4-ой инъекции вакцин.

После подтверждения результатов анализа крови осуществляли тотальный забор крови в условиях убойного пункта, используя полый нож, с соблюдением правил асептики и антисептики. Кровь собирали в стерильную емкость объемом 10 л через силиконовый шланг. Сыворотку отделяли методом отстаивания с последующим осветлением путем центрифугирования при 6000 об/мин в течение 5 минут на центрифуге марки ОС–6М. Фильтрование осуществляли через мембранный фильтр с диаметром пор 0,22 нм («Технофильтр»). Консервирование сыворотки проводили добавлением 5 %-го раствора фенола до конечной концентрации в общем объеме 0,5 %. Стерильность готового препарата проверяли путем высева в пробирки с МПА, МПБ и МППБ под вазелиновым маслом, инкубировали при + 37 0С в течение 7 суток. Также производили высев в чашки Петри с питательной средой Сабуро с последующей выдержкой при комнатной температуре +22 0С в течение 7 суток. Стерильность препарата оценивали по отсутствию роста микроорганизмов на питательных средах.

Безвредность и ареактогенность сыворотки определяли на 5-ти белых мышах массой 16-18 г путем подкожного введения в дозе 0,5 мл. Срок наблюдения продолжался в течение 10 суток. Отклонений в общем клиническом состоянии мышей и местной реакции на месте введения препарата не отмечалось, кроме незначительной припухлости, которая проходила на 3-4-ые сутки. Протективную эффективность гипериммунной сыворотки на данном этапе исследований не проверяли.

Для статистической обработки результатов исследований использовали программу Office Microsoft Excel 2013.

Результат исследований.

Результаты анализа сывороток крови у животных-продуцентов представлены в таблицах 1 и 2.

В соответствии с данными таблицы 1 нарастание титров антител после 1-ой иммунизации было незначительным, после 2-ой иммунизации увеличение составило к антигену ВД – в 2,5 раза, к ИРТ – в 3,5 раза, к ПГ – в 3,2 раза относительно уровня 1-ой иммунизации. После 3-ей иммунизации показатели увеличились соответственно: в

4,0 (ВД), 5,7 (ИРТ) и 4,0 (ПГ-3) раза к уровню 2-ой иммунизации. После четвертого введения вакцинных антигенов темпы роста антител составили всего к ВД – 1,2 раза, к ИРТ – 1,6 раза, к ПГ – 2,0 раза по сравнению с уровнем 3-ей иммунизации.

Таблица 1 – Динамика антител в сыворотках крови к вирусным антигенам (n=3)

Р<0,05

Таблица 2 - Титры антител в сыворотках крови к бактериальным антигенам (n=3)

Р<0,05

Результаты, приведенные в таблице 2, свидетельствуют, что после 2-ой иммунизации произошел значительный рост антител к E. сoli – в 3,2 раза, к Past. Multocida – в 2,5 раза, к Salm. dublin – в 2,0 раза к уровню 1-го введения вакцинных антигенов. После 3-ей иммунизации показатели увеличились в 4,0 (E. coli); 3,2 (Past.multocida) и 2,5 (Salm. dublin) раза, относительно предыдущего уровня. Прирост антител после 4-ой иммунизации отмечен в меньшей степени, соответственно в 2,0; 1,2 и 2,0 раза.

Максимальный рост уровня специфических антител к вирусным и бактериальным антигенам установлен после 3-ей иммунизации, данное обстоятельство послужило основанием для завершения процесса гипериммунизации животных-продуцентов после четвертого этапа.

Заключение. Таким образом, в результате 4-х кратной иммунизации животных-продуцентов вакцинными антигенами по разработанной схеме получена опытная гипериммунная полиспецифическая сыворотка против ВД,

ИРТ, ПГ-3, колибактериоза, пастереллеза и сальмонеллеза крупного рогатого скота с содержанием высоких титров антител. Сыворотка является стерильной и безвредной, что позволяет использовать ее для профилактики и лечения выше указанных заболеваний, которые довольно часто встречаются среди молодняка крупного рогатого скота.

Резюме

Целью наших исследований явилась апробация экспериментальной схемы гипериммунизации животных-продуцентов с последующим определением титров антител в сыворотке крови. Результаты исследований показали, что полученная гипериммунная сыворотка от животных-продуцентов, с применением рыночных вакцин против ИРТ, ПГ-3, ВД, колибактериоза, сальмонеллеза, пастереллеза содержит достаточно высокий титр антител, позволяющий использовать данный препарат для пассивной профилактики и лечения указанных заболеваний, которые довольно часто встречаются у молодняка крупного рогатого скота.