Применение растительных ферментированных пищевых волокон и короткоцепочечных жирных кислот с целью устранения побочных эффектов нестероидных противовоспалительных препаратов

В настоящее время в РФ для применения животным доступно несколько препаратов из группы НПВП. Побочные действия и осложнения от применения нестероидных противовоспалительных препаратов (НПВП)

общеизвестны: снижение свертываемости крови, нарушение фильтрационной функции почек, гастриты, язвы желудка и кишечника, желудочные и кишечные кровотечения. Нередки случаи гибели животных из-за некорректного применения данных препаратов (особенно диклофенака, индометацина и кеторолака) [1, 4]. Поэтому разработка способов предотвращения побочных эффектов при приеме НПВП в ветеринарной практике, основанная на подробном изучении патогенеза НПВП-гастропатии, весьма актуальна и обоснована.

Цель исследования. На оригинальной модели химического гастрита подобрать оптимальный режим применения и оценить эффективность использования ферментированных пищевых волокон и короткоцепочечных жирных кислот в составе БАД «Рекицен-РД с фруктоолигосахаридами» для профилактики развития НПВП-гастропатии.

Методика исследования. Неинбредные белые крысы были взяты в эксперимент в количестве 120 животных. НПВП-гастропатию моделировали по оригинальной методике («Способ моделирования гастропатии», положительное решение от 04.02.2011г. о выдаче патента на изобретение по заявке № 2009145268/14 от 12.11.2009). В соответствии с задачей исследования сформированы следующие экспериментальные группы:

• 1    – контрольная группа – интактные животные, n=15;

• 2    – животные, получавшие в течение 21 дня per os смесь 5% раствора аскорбиновой кислоты с нестероидным противовоспалительным препаратом Найз® и последующую экспериментальную терапию БАД «Рекицен-РД® с фруктоолигосахаридами» в течение 28 дней, n=15;

• 3    – животные, получавшие в течение 21 дня per os смесь 5% раствора аскорбиновой кислоты с нестероидным противовоспалительным препаратом Найз® и последующую экспериментальную терапию препаратом Омез® в сочетании с БАД «Рекицен-РД® с фруктоолигосахаридами» в течение 28 дней, n=15;

• 4    – животные, получавшие в течение 21 дня per os смесь 5% раствора аскорбиновой кислоты с нестероидным противовоспалительным препаратом Кетофен и последующую экспериментальную терапию препаратом Омез® в течение 28 дней, n=15;

• 5    – животные, получавшие в течение 21 дня per os смесь 5% раствора аскорбиновой кислоты с нестероидным противовоспалительным препаратом Кетофен и последующую экспериментальную терапию препаратом Фамотидин в течение 28 дней, n=15;

• 6    - животные, получавшие в течение 21 дня per os смесь 5% раствора аскорбиновой кислоты с препаратом Кетофен и последующую экспериментальную терапию БАД «Рекицен-РД® с фруктоолигосахаридами» в течение 28 дней, n=15;

• 7    - животные, получавшие в течение 21 дня per os смесь 5% раствора

аскорбиновой кислоты с препаратом Кетофен и последующую экспериментальную терапию препаратом Омез® в сочетании с БАД «Рекицен-РД® с фруктоолигосахаридами» в течение 28 дней, n=15;

• 8    - животные, получавшие в течение 21 дня per os смесь 5% раствора аскорбиновой кислоты с препаратом Кетофен и последующую экспериментальную терапию препаратом Омез® в сочетании с БАД «Рекицен-РД® с фруктоолигосахаридами» в течение 7 дней, а затем – только БАД в течение 21 дня, n=15.

Экспериментальные исследования выполнены в соответствии с «Правилами проведения работ с использованием экспериментальных животных» (Приложение к приказу Министерства здравоохранения СССР от 12.08.1977 г. N 755) и «Европейской конвенцией о защите позвоночных животных, используемых для экспериментов или в иных научных целях» от 18 марта 1986 г. в Центральной научно-исследовательской лаборатории ГОУ ВПО «Пермская государственная медицинская академия имени академика Е.А. Вагнера Росздрава».

Забор гистологического материала осуществляли на 22-й день эксперимента. Желудок забирали целиком, выдерживали в изотоническом растворе NaCl в течение 30 минут, затем фиксировали в 10% забуференном по Лилли формалине (рН-7,2) в расправленном состоянии и наколотым на пробку. Для проведения гистологического исследования забирали образцы в пищеводном, кардиальном, фундальном и пилорическом отделах. Гистологические препараты готовили по стандартным методикам с заливкой в гистамикс, окрашивали гематоксилином, эозином и пикрофуксином по ван Гизону.

Для выявления пролиферативной активности в слизистой оболочке желудка (СОЖ) использовали моноклональные антитела к регуляторному протеину Ki-67 (Rabbit Monoclonal Antibody to Human Ki-67), для идентификации муцина – моноклональные антитела к муцину 5АС (Monoclonal Mouse Antibody to Mucin 5AC / Gastric Mucin, Clone 45M1, Isotype IgG1, kappa), для идентификации клеток, находящихся в состоянии апоптоза - по уровню экспрессии проапоптотического белка Fas ligand (Polyclonal Rabbit Antibody to Fas Ligand), а также полный диагностический набор компании Diagnostic BioSystems (USA), предназначенный для проведения экспериментальных исследований.

Оценка интенсивности пероксидазной метки и определение индекса пролиферации на основе экспрессии регуляторного протеина Ki-67 проводились полуколичественным методом – учитывалось число позитивных на 100 учтенных ядер (при учете 500-1000 клеток) [3]. Гибель клеток в форме апоптоза в покровно-ямочном эпителии СОЖ определяли по индексу апоптоза (IАПТ) по формуле: IАПТ (%) = N (число апоптозных клеток, позитивных к Fas Ligand)/N1 (общее число клеток)×100 [2].

Результаты исследований подвергнуты статистической обработке с применением программного пакета Biostat.

Результаты исследований. Ни в одной из групп во время эксперимента не зафиксировано гибели животных. При проведении гистологических исследований СОЖ животных с НПВП-гастропатией, получавших комплекс пищевых волокон и короткоцепочечных жирных кислот БАД «Рекицен-РД® с фруктоолигосахаридами», дистрофические изменения эпителиоцитов отмечались лишь в 20% случаев (n=3) у животных, получавших Кетофен, и у 13,33% животных(n=2), получавших Найз, но сохранялись сосудистые расстройства и утолщение собственной и мышечной пластинок СОЖ. Количество париетальных клеток в фундальных железах желудка оставалось увеличенным, но изменения по сравнению с контрольной группой были недостоверны. В фундальных железах желудка выявлялось увеличенное по сравнению с контролем количество ЕС-клеток (табл.). При использовании диеты, обогащенной пищевыми волокнами и короткоцепочечными жирными кислотами, мы наблюдали восстановление у животных с НПВП-гастропатией нормального зонального распределения муцинов. При применении у животных с НПВП-гастропатией Рекицена-РД количество G-клеток, так же как и энтерохромаффинных ЕС-клеток, оставалось увеличенным, хотя некоторая тенденция к уменьшению их количества все же наблюдалось. IАПТ в эпителии СОЖ у животных данной экспериментальной группы составил 5,88 ± 0,67, ИП = 14,28 ± 2,35.

При совместном использовании Омеза и Рекицена-РД у животных с НПВП-гастропатией применяли 2 схемы: схема №1: сочетанное применение Омез® и БАД «Рекицен-РД® с фруктоолигосахаридами» в течение 21 дня; схема №2: одновременно в течение 7 дней Омез и Рекицен-РД, после чего продолжали давать животным только Рекицен-РД в течение еще 14 дней. Гистологическое исследование СОЖ животных, получавших комбинированную терапию, выявило эпителий типичного строения, без патологических изменений. Сосудистых расстройств и дистрофических изменений не обнаружено. Количество париетальных клеток в фундальных железах желудка в группе, получавшей схему №2, не было увеличенным по сравнению с контролем, а в группе, получавшей схему №1, их количество, так же, как и в группе, получавшей только Омез, было уменьшено по сравнению с интактными животными. У животных, получавших схему №1, выявлялось статистически значимое увеличение по сравнению с контролем количества ЕС-клеток, у животных, получавших схему №2 - не отличалось от контроля. При использовании диеты, обогащенной пищевыми волокнами и короткоцепочечными жирными кислотами в сочетании с Омепразолом, мы наблюдали восстановление у животных с НПВП-гастропатией нормального зонального распределения муцинов. У животных, получавших схему №1, количество G-клеток, так же как и энтерохромаффинных ЕС-клеток, оставалось увеличенным по сравнению с интактными животными (p<0,05); IАПТ - 8,15 ± 0,33, ИП – 21,32 ± 1,47; у получавших схему №2 количество G-клеток не отличалось от количества таковых в группе контроля. IАПТ - 4,82 ± 0,53, ИП - 12,33 ± 1,42.

Количество аргентаффинных ЕС-клеток и количество G-клеток, вырабатывающих гастрин, в эпителии СОЖ экспериментальных животных (на тестовой площади 0,042 мм2)

Экспериментальная группа	Количество аргентаффинных ЕС-клеток, M±m	Количество G-клеток, M±m
Интактные животные	0,64±0,075	8,945±1,003
Моделирование НПВП-гастропатии, Найз, большая доза	3,31±0,126*	10,6±0,733*
Моделирование НПВП-гастропатии, Найз, малая доза	0,72±0,213	7,917±0,980
Моделирование НПВП-гастропатии, Кетофен, большая доза	5,68±0,542*	11,10±0,767*
Моделирование НПВП-гастропатии, Кетофен, малая доза	1,19±0,158*	6,4±0,991
Моделирование НПВП-гастропатии, Найз, экспериментальная терапия Омепразолом	2,95±0,043*	10,50±0,859*
Моделирование НПВП-гастропатии, Кетофен, экспериментальная терапия Омепразолом	4,48±0,225*	11,3±1,592*
Моделирование НПВП-гастропатии, Найз, экспериментальная терапия Фамотидином	2,95±0,012	9,10±1,312
Моделирование НПВП-гастропатии, Кетофен, экспериментальная терапия Фамотидином	2,56±0,043	10,4±1,213*
Моделирование НПВП-гастропатии, Найз, экспериментальная терапия БАД «Рекицен-РД® с фруктоолигосахаридами»	2,675±0,846*	9,24±1,399
Моделирование НПВП-гастропатии, Кетофен, экспериментальная терапия БАД «Рекицен-РД® с фруктоолигосахаридами»	1,98±0,877	10,2±1,009*

* p<0,05 по сравнению с интактными животными

Выводы. 1. Комплекс ферментированных пищевых волокон и короткоцепочечных жирных кислот «Рекицен-РД® с фруктоолигосахаридами» оказывает нормализующее влияние на процессы слизеобразования и защищает эпителиоциты СОЖ как от повреждающего действия самих НПВП, так и от повышенной активности кислотнопептического фактора, вызванной приемом НПВП, но не способствует уменьшению повышенной секреции соляной кислоты и повышенной секреции пищеварительных ферментов. 2. Схема с коротким курсом антисекреторных средств и последующий продолжительный прием БАД

«Рекицен-РД® с фруктоолигосахаридами» является оптимальной в плане профилактики гастродуоденальных осложнений при проведении противовоспалительной терапии.

ЛИТЕРАТУРА:  1. Дроздов В.Н. Гастропатии, вызванные нестероидными противовоспалительными препаратами:   патогенез, профилактика и лечение / В.Н. Дроздов // Consilium medicum. – 2005. – Т. 7. - № 1. 2. Осадчук М.А. Хронический гастрит с функциональной диспепсией: патогенетические особенности клинических проявлений / М.А. Осадчук, А.Л. Пахомова, И.М. Кветной // Рос. журн. гастроэнтерол., гепатол., колопроктол. – 2002. - № 5. – С. 35-39. 3. Петров С.В.,

Иммуногистохимическая диагностика опухолей человека: Руководство для врачей-морфологов / С.В. Петров, А.П. Киясов. – Казань, 1998. – 165 с. 4. Sharkey M. Wilmot Advice to Dog Owners Whose Pets Take NSAID / M. Sharkey, M. Brown, L. // FDA Veterinarian Newsletter. – 2006. – Vol. XXI, № I. – P. 1255-1258.

ПРИМЕНЕНИЕ РАСТИТЕЛЬНЫХ ФЕРМЕНТИРОВАННЫХ ПИЩЕВЫХ ВОЛОКОН И КОРОТКОЦЕПОЧЕЧНЫХ ЖИРНЫХ КИСЛОТ С ЦЕЛЬЮ УСТРАНЕНИЯ ПОБОЧНЫХ ЭФФЕКТОВ НЕСТЕРОИДНЫХ ПРОТИВОВОСПАЛИТЕЛЬНЫХ ПРЕПАРАТОВ

Самоделкин Е.И., Кульневская М.Н, Черанева М.В., Неклюдова В.В., Кузнецов В.Ф., Косарева П.В., Никитин С.В.

Резюме

На оригинальной модели НПВП-гастропатии у экспериментальных животных апробированы новые способы лечения Омезом® и Фамотидином® и профилактики НПВП-гастропатии комплексом ферментированных пищевых волокон и короткоцепочечных жирных кислот «Рекицен-РД® с фруктоолигосахаридами».

THE USE OF NATURAL ENZYME DIGESTIVE FIBERS AND SHORT-CHAIN ACIDSTO DECREASE NON-STEROID ANTI-INFLAMMATORY PREPARATION SIDE EFFECTS

Samodelkin E.I., Kulnevskaya M.N., Cheraneva M.V., Nekludova V.V., Kuznetsov V.F., Kosareva P.V., Nikitin S.V.