Противовоспалительноe действиe разных форм извлечений БАВ из листьев облепихи и смородины в эксперименте

Современные изменения в пищевых привычках и растущая осведомленность о здоровье привели к значительным изменениям в сфере питания и потребления продуктов. Это побуждает потребителей включать функциональные продукты в качестве важной части своего рациона. Функциональные продукты, которые определяются как продукты, обеспечивающие физиологические преимущества, выходящие за рамки базового питания, являются одним из факторов активного подхода к укреплению здоровья. Они используют потенциал биологически активных соединений для улучшения общего состояния организма и профилактики заболеваний. В связи с этим возникает необходимость в разнообразии рациона за счет включения функциональных продуктов, что способствует повышению качества питания и улучшению здоровья [1 - 3].

Такими изделиями могут выступать пищевые продукты, обогащенные фенольными соединениями, которые обладают выраженными антиоксидантными, противовоспалительными и другими биологически активными свойствами. Фенольные соединения, являющиеся обширным классом вторичных метаболитов растений, играют ключевую роль в защите организма от окислительного стресса, воспаления и других патологических процессов. Их структурное разнообразие и высокая биологическая активность делают их перспективными объектами для изучения фармакологических свойств, особенно в контексте противовоспалительного действия. Способность фенольных соединений модулировать ключевые молекулярные пути воспаления открывает широкие возможности для их использования в разработке новых лекарственных средств, биологически активных добавок и функциональных продуктов питания. Однако для полного понимания их механизмов действия и потенциального применения необходимы дальнейшие исследования in vivo и клинические испытания [4 - 8].

Черная смородина имеет давние традиции безопасного применения, а также тщательно исследуется на предмет ее значительного воздействия на здоровье. Ограниченное количество исследований было посвящено дополнительным терапевтическим свойствам черной смородины, таким как: васкулопротекторное действие, гипохолестеринемический эффект, окисления жиров, регуляция функций мозга, модуляция кишечной микробиоты, снижение постпран-диального уровня сахара в крови. Эти эффекты дополняют уже хорошо изученные свойства черной смородины, включая противовоспалительную и нейропротекторную активность, противоопухолевое и антиоксидантное действие. Результаты показывают, что полифенолы проявляют антиоксидантную активность, которая снижает вероятность развития различных неинфекционных хронических заболеваний (хронические воспалительные заболевания, атеросклероз, сахарный диабет 2-го типа, нейродегенеративные расстройства и некоторые виды рака) [9 - 11].

Облепиха относится к семейству Elaeagnaceae и широко распространена в таких регионах, как Китай, Монголия, Россия и Северная Европа. Это растение известно своими лечебными и питательными свойствами и активно используется в производстве функциональных продуктов питания и фармацевтических препаратов, включая пюре, соки, чаи и масла. Однако, несмотря на активное изучение и применение плодов облепихи, листья этого растения часто остаются недооцененными и рассматриваются как побочные продукты или отходы. В то же время листья облепихи богаты флавоноидами и полифенолами, которые обладают антиоксидантными и кардиопротекторными свойствами. Таким образом, разработка методов извлечения и использования биологически активных компонентов из листьев облепихи не только повышает экономическую ценность этого растения, но и создает новые возможности для увеличения стоимости сельскохозяйственных побочных продуктов [12].

Цель исследования: изучение противовоспалительной активности сухих экстрактов из листьев черной смородины и облепихи крушиновидной, а также их отваров в сравнении с отваром ромашки на модели формалинового отека у крыс линии Wistar .

Материалы и методы исследования

Листья черной смородины были собраны (2023 - 2024) в конце фазы плодоношения с экземпляров, выращенных на открытом грунте в климатических условиях Иволгинского района Республики Бурятия. Листья облепихи крушиновидной были собраны (2023 - 2024) в с. Ацула Селенгинского района Бурятии в фазе массового созревания плодов – 3-й фенологической фазе. Образцы листьев смородины и облепихи были высушены при температуре 25±3 ° С без доступа солнечного света [13].

Из данного растительного сырья на базе кафедры «Технологические машины и оборудование. Агроинженерия» ВСГУТУ были получены сухие экстракты из листьев смородины и облепихи с применением вакуумно-импульсных режимов экстрагирования при температуре 35 - 40 ° С [14].

В ходе исследования противовоспалительной активности [15] сухого экстракта из листьев облепихи был проведен эксперимент на 48 крысах линии Wistar. Средняя масса животных составляла 146,0±5,8 г. Перед началом эксперимента все крысы содержались в стандартных условиях вивария, получали стандартный рацион и имели неограниченный доступ к воде. Использование животных в исследованиях соответствовало требованиям законодательства Российской Федерации, включая санитарные правила и нормы СанПиН 2.2.1.3218-14 и Сан-ПиН 1.2.3685-21, которые регулируют гуманное обращение с лабораторными животными и проведение экспериментов.

Исследуемые животные были разделены на 6 групп (по 8 особей мужского пола в каждой группе): I группа – контроль (животные, не получавшие лечения); II группа – препарат сравнения (отвар ромашки); III группа – отвар листьев смородины; IV группа – отвар листьев облепихи; V группа - водный раствор сухого экстракта из листьев смородины (в концентрации 100 мг/кг массы животного); VI группа – водный раствор сухого экстракта из листьев облепихи (в концентрации 100 мг/кг массы животного).

Отвар ромашки для введения экспериментальным животным готовили из цветков ромашки («ФармаЦвет» АО «Красногорсксредства») согласно инструкции по применению. Ромашка аптечная ( Matricaria chamomilla ) – одно из наиболее распространенных лекарственных растений, применяемых как в традиционной, так и в современной медицине. Благодаря своему уникальному химическому составу и многочисленным фармакологическим свойствам она активно используется для лечения и профилактики различных заболеваний, особенно связанных с воспалительными процессами. Ромашка обладает выраженными противовоспалительными, антиоксидантными и ранозаживляющими свойствами.

Для приготовления отваров смородины и облепихи, растительное сырье (3 г) заливали кипяченой водой комнатной температуры. Смесь нагревали на водяной бане в течение 15–

20 мин, избегая кипения, чтобы сохранить активные компоненты. После нагревания отвар настаивали под крышкой в течение 30 - 40 мин. Готовые отвары процеживали через марлю для удаления твердых частиц. Полученная жидкость должна быть прозрачной и без осадка. Отвары охлаждали до комнатной температуры перед использованием. Отвары хранили в холодильнике при температуре +4 ° C не более 24 ч, чтобы избежать потери активности компонентов.

У всех животных вызывали отек лапок. В качестве флогогена использовали 3%-ный водный раствор формалина, который вводился экспериментальным животным субплантарным введением в правую заднюю лапу в объеме 0,1 мл. Выраженность отека лапок исследуемых животных измеряли штангенциркулем в нулевой точке (до введения препарата), после 2 и 24 ч после введения формалина.

Выраженность отека лап рассчитывали по формуле (1) в процентах:

О = ^ X 100 % ,                         (1)

С )

где О – отек лапы экспериментальных животных, %; V n – объем лапы через n часов (n=2 или 24 ч), см³; V 0 – исходный объем лапы, см³.

Опытные животные получали изучаемые экспериментальные препараты ежедневно в течение 7 дней один раз в сутки утром натощак внутрижелудочно через зонд. Объем вводимых жидкостей составлял 1 мл на 100 г массы тела животного (10 мл/кг).

Экспериментальные исследования и опыты проводили в 3-кpатной повтоpноcти, полученные результаты обрабатывали c помощью программ Statistica 10.0 и Мicrosoft Excel.

Результаты исследования и их обсуждение

А.Г. Хантургаев (2023) с коллегами с кафедры «Технологические машины и оборудование. Агроинженерия» ВСГУТУ разработал и апробировал технологию получения сухих экстрактов из растительного сырья с применением вакуумно-импульсных режимов экстракции [14]. В таблице 1 представлены органолептические и физико-химические показатели сухих экстрактов из листьев облепихи и смородины.

Таблица 1

Органолептические и физико-химические показатели сухих экстрактов из листьев облепихи и смородины

Показатель	Сухой экстракт листьев облепихи	Сухой экстракт листьев смородины
Аромат	естественный, травянистый, ярко выраженный, характерный для листьев облепихи, без посторонних ароматов	свежий, травянистый, с легкими фруктовыми нотами, характерный для листьев смородины, без посторонних ароматов
Цвет	красновато-бурый	темно-зеленый с коричневатым оттенком
Внешний вид	сыпучий, однородный мелкодисперсный порошок	сыпучий, однородный мелкодисперсный порошок
Влажность, %	8,75 ± 0,06	7,90 ± 0,05
Растворимость в воде при 20 ° C	полностью растворим	полностью растворим

Проведенный анализ сухих экстрактов листьев облепихи и смородины позволил определить их органолептические и физико-химические характеристики, которые имеют важное значение для оценки качества и потенциального применения данных экстрактов.

Сухой экстракт листьев облепихи, как видно из таблицы 1, обладал естественным, травянистым ароматом с ярко выраженными нотами, характерными для листьев облепихи. Посторонние запахи отсутствовали, что свидетельствовало о высоком качестве сырья и соблюдении технологических условий при производстве экстракта. Экстракт листьев смородины отличался свежим травянистым ароматом с легкими фруктовыми оттенками, характерными для смородины. Отсутствие посторонних запахов подтверждало чистоту и натуральность продукта. Экстракт листьев облепихи имел красновато-бурый оттенок, что может быть обусловлено наличием природных пигментов, таких как каротиноиды и флавоноиды. Экстракт листьев смородины характеризовался темно-зеленым цветом с коричневатым оттенком, что возможно связано с высоким содержанием хлорофилла и других растительных пигментов. Оба экстракта были представлены в виде сыпучего, однородного мелкодисперсного порошка. Такая форма обеспечивала удобство использования и хранения, а также способствовала быстрому растворению в воде. Оба экстракта полностью растворялись в воде при температуре 20±2 ° C, что делало их удобными для применения в различных формах, включая водные растворы.

Особый интерес представлял цвет экстрактов, который был обусловлен наличием природных пигментов (хлорофилл, каротиноидов, флавоноидов). Эти соединения не только определили внешний вид экстрактов, но и обладали биологической активностью, включая антиоксидантные и противовоспалительные свойства. В эксперименте на модели формалинового отека у животных изучалось влияние отвара ромашки, отвара листьев облепихи и экстракта из листьев облепихи на уменьшение объема отека лапы по сравнению с контрольной группой. Результаты представлены в виде изменения объема лапы через 2 и 24 ч после введения формалина, а также рассчитана эффективность каждого средства в процентах относительно контрольной группы. Данные о действии отвара облепихи и сухого экстракта из листьев облепихи представлены в таблице 2.

Таблица 2

Показатели объема лап у животных, принимавших отвар и экстракт из листьев облепихи на фоне формалинового отека

Показатель	Контрольная группа	Отвар ромашки	Отвар листьев облепихи	Cухой экстракт из листьев облепихи
3 Объем лапы, исходной, V 0, см	0,58±0,08	0,74± 0,06	0,64±0,08	0,815±0,105
3 Объем лапы через 2 ч, V 2 , см	0,68±0,07	0,86±0,11	0,73±0,02	0,817±0,110
3 Объем лапы через 24 ч, V 24 , см	0,88±0,12	0,93±0,12	0,79±0,13	0,891±0,011
Выраженность отека (2 ч), %	+17,2	+16,2	+14,1	+0,2*
Выраженность отека (24 ч), %	+51,7	+25,6*	+23,4*	+9,3*
Эффективность (разница с контролем, 2 ч), %	—	1	3,1	16,7
Эффективность (разница с крнтролем, 24 ч), %	—	26,1	28,3	42,4

Примечание. * - достоверное отклонение значения по сравнению со значением контрольной группы (p<0,05).

Как видно из данных таблицы 2, через 2 ч во всех группах наблюдалось увеличение объема лапы, что свидетельствовало о развитии отека. Однако в группе с экстрактом листьев облепихи выраженность отека была минимальной (0,2 %), что может указывать на начальное противовоспалительное действие. В группах (животные получали отвар ромашки, отвар облепихи), объем отека был немного ниже, чем в контрольной группе, но разница не является статистически значимой (в пределах погрешности). Отвары ромашки и листьев облепихи показали схожую разницу с исходным объемом лапы крыс в уменьшении отека (16,2 и 14,1 % соответственно). Через 24 ч эффективность отвара листьев облепихи (28,3 %) и отвара ромашки (26,1 %) была ниже, чем у экстракта листьев облепихи (42,4 %).

В группе (животные получали сухой экстракт из листьев облепихи) увеличение объема лапы было минимальным по сравнению с другими группами. Это может свидетельствовать о начальном противовоспалительном действии экстракта листьев облепихи. Сухой экстракт листьев облепихи продемонстрировал начальное противовоспалительное действие, что выразилось в минимальном увеличении объема лапы. Это может быть связано с высокой концентрацией биологически активных компонентов в экстракте. Для подтверждения этих результатов и уточнения механизмов действия необходимы дополнительные исследования, включая изучение влияния экстракта на конкретные маркеры воспаления и проведение экспериментов на разных моделях воспаления.

В таблице 3 представлены данные противовоспалительного действия отваров из листьев смородины и сухого экстракта из листьев смородины в сравнение с отваром ромашки.

Таблица 3

Показатели объема лап у животных, принимавших отвар и экстракт из листьев смородины на фоне формалинового отека

Показатель	Контрольная группа	Отвар ромашки	Отвар листьев смородины	Экстракт из листьев смородины
Объем лапы, исходной, V 0 , см3	0,58±0,08	0,74 ± 0,06	0,65±0,19	0,70±0,47
Объем лапы через 2 ч, V 2 , см3	0,68±0,07	0,86±0,11	0,75±0,08	0,74±0,06
Объем лапы через 24 ч, V 24 , см3	0,88±0,12	0,93±0,12	0,82±0,03	0,84±0,02
Выраженность отека (2 ч), %	+17,2	+16,2	+15,3	+5,7*
Выраженность отека (24 ч), %	+51,7	+25,6*	+26,1*	+20,0*
Разница с исходным V 0 (2 ч), %	-	1	1,9	11,8
Разница с исходным V 0 (24 ч), %	-	26,1	25,6	31,7

Примечание. ^* - достоверное отклонение значения по сравнению со значением контрольной группы (p≤0,05).

Из представленных данных таблицы 3 видно, что через 2 ч во всех группах наблюдается увеличение объема лапы, свидетельствующее о развитии отека. Наиболее выраженное увеличение было в контрольной группе (17,2 %), тогда как экстракт листьев смородины показал наименьшее увеличение (5,7 %). Через 2 ч отвары ромашки и листьев смородины показали схожую выраженность отека (16,2 и 15,3 % соответственно), тогда как экстракт листьев смородины был более эффективным (11,8 %).

Через 24 ч объем лапы в контрольной группе продолжал увеличиваться, достигая 51,7 %. Эффективность отвара листьев смородины (26,1 %) и настоя ромашки (25,6 %) была ниже, чем у экстракта листьев смородины (31,7 %). Эти данные показывают, что через 24 ч экстракт листьев смородины демонстрирует наибольшую эффективность в уменьшении отека по сравнению с контролем.

Заключение

Все исследуемые растительные объекты (отвар ромашки, отвар и экстракт листьев облепихи, отвар и экстракт листьев смородины) продемонстрировали противовоспалительное действие на модели формалинового отека у животных. Отвары (ромашки, листьев облепихи и смородины) показали схожую эффективность в уменьшении отека через 2 и 24 ч. При этом сухие экстракты оказались эффективнее отваров в подавлении воспаления у экспериментальных животных, что, возможно, обусловлено более высокой концентрацией действующих веществ. По органолептическим показателям (аромат, цвет, внешний вид) экстракты соответствовали характерным параметрам для данного типа растительного сырья. Низкое содержание влаги в экстрактах обеспечивает их стабильность и длительный срок хранения, а хорошая растворимость в воде расширяет возможности их применения в фармацевтической, пищевой и косметической промышленности.

Таким образом, сухие экстракты листьев облепихи и смородины обладают потенциалом для применения в качестве противовоспалительных средств.

Работа выполнена в рамках гранта «Молодые ученые ВСГУТУ-2024» и в рамках программы «Приоритет 2036 № 075-15-2025-049».