Разработка и валидация методики количественного определения субстанции 3-[2-(4-фенил-1-пиперазино)-2-оксоэтил]-хиназолин-4(3Н)-она методом потенциометрического титрования в неводной среде
Автор: Гендугов Т.А., Гпушко А.А., Озеров А.А., Щербакова Л.И.
Журнал: Волгоградский научно-медицинский журнал @bulletin-volgmed
Рубрика: Обзорные статьи
Статья в выпуске: 4 (64), 2019 года.
Бесплатный доступ
Исследована возможность использования потенциометрического титрования в неводной среде для количественного определения субстанции 3-[2-(4-фенил-1-пиперазино)-2-оксоэтил]хиназолин-4(3Н)-она. Разработана методика количественного определения и проведена ее валидационная оценка по параметрам линейности, прецизионности и правильности.
Хиназолин-4(3н)-он, количественное определение, титрование, потенциометрия, валидация
Короткий адрес: https://sciup.org/142224355
IDR: 142224355
Текст научной статьи Разработка и валидация методики количественного определения субстанции 3-[2-(4-фенил-1-пиперазино)-2-оксоэтил]-хиназолин-4(3Н)-она методом потенциометрического титрования в неводной среде
В настоящее время депрессия – наиболее распространённое психическое расстройство, от нее страдают более 300 миллионов человек всех возрастных групп [3]. Согласно прогнозам Всемирной организации здравоохранения, к 2025–2030 гг. смертность от депрессий выйдет на 1-е место в мире [6]. Такая тенденция подтверждает актуальность разработки новых биологически активных соединений психотропного действия, обладающих высоким терапевтическим потенциалом и меньшим числом побочных эффектов.
Новое биологически активное соединение – 3-[2-(4-фенил-1-пиперазино)-2-оксоэтил]хиназолин-4(3 Н )-он (лабораторный шифр: VMA-10-21), синтезированное и изученное в ВолгГМУ, доказало свою эффективность в качестве антидепрес-сантного и анксиолитического средства [4].
Разработка методик количественного анализа является одним из важнейших этапов при создании нормативной документации для новых лекарственных веществ. При этом титриметрические методы являются наиболее доступными и в то же время точными методами определения содержания веществ. Для количе- ственного определения слабых кислот и оснований, плохо растворимых в воде, традиционно используется метод кислотно-основного титрования в неводной среде.
ЦЕЛЬ РАБОТЫ
Разработка и валидация методики количественного определения субстанции VMA-10-21 методом титрования в неводной среде.
МЕТОДИКА ИССЛЕДОВАНИЯ
Объект исследования – 5 серий субстанции 3-[2-(4-фенил-1-пиперазино)-2-оксоэтил]хиназолин-4(3 Н )-она структурной формулы:


Ранее нами были изучены физико-химические свойства и спектральные характеристики VMA-10-21 с использованием ИК-спектроскопии [1]. Чистота полученных образцов подтверждена методами ЯМР 1Н [4] и ВЭЖХ: содержание субстанции составило 99,78 %, общее содержание двух различных примесей – 0,22 %.
С целью изучения возможности образования солей соединением VMA-10-21 в программе ORCA 4.1 методом теории функционала плотности (UB3LYP) с применением базиса 6-311G* [5] был осуществлен расчет распределения электронной плотности, зарядов и оптимальной геометрии молекулы. Потерю в массе при высушивании проводили согласно ОФС.1.2.1.0010.15 ГФ XIV изд. Результаты потери в массе при высушивании (В) составили 0,28 % и учитывались в дальнейшем при расчете содержания вещества.
Все использованные растворы соответствовали требованиям ГФ XIV издания [2]. Поправочный коэффициент хлорной кислоты составил 0,99, титр – 17,42 мг/мл. Контрольный опыт проводили с использованием двух разных навесок исследуемого вещества.
Валидацию разработанной методики проводили по показателям прецизионности, линейности и правильности. Для оценки прецизионности методики проводили девять параллельных определений с точной навеской субстанции (около 0,1 г). Линейность методики определяли путем статистической обработки результатов количественного определения на семи уровнях навески исследуемого вещества в диапазоне 70–130 %, за 100 % принимали 0,15 г. Правильность методики оценивали по критерию открываемости для девяти навесок субстанции на трех уровнях: 1:0,5; 1:1; 1:2 от верхнего предела линейности методики. Полученные данные обрабатывали согласно ОФС.1.1.0013.15 «Статистическая обработка результатов эксперимента» [2].
Содержание испытуемого вещества в % (Х) определяли по формуле:
_ (V-V o) *K*T*100 *100
Х = (а-а о )*1000*(100-В) , где
-
V – объем хлорной кислоты, мл;
V o – объем титранта, израсходованный на титрование в контрольном опыте;
-
Т – титр хлорной кислоты, мг/мл;
-
К – поправочный коэффициент;
-
а – навеска, г;
-
а о – навеска в контрольном опыте, г;
В – потеря в массе при высушивании, %.
Фактор эквивалентности (f) рассчитывали по формуле:
а*1000 f = , где
K*C*V*М
М-молярная масса исследуемой субстанции, г/моль.
РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
Поскольку соединение VMA-10-21 является слабым основанием, нами были использованы методики с применением уксусной и муравьиной кислоты, а также их смесей – растворителей, у которых способность к отдаче протона значительно превышает способность к его присоединению.
Методика: около 0,1 г субстанции (точная навеска) растворяют в 30 мл ледяной уксусной кислоты. Полученный раствор титруют 0,1 М раствором хлорной кислоты, перемешивая после каждого добавления. Конец титрования фиксируют потенциометрически. Параллельно проводят контрольный опыт. Среднее значение рКа, определенное для образцов 5 серий субстанции VMA-10-21, составило 4,77, что свидетельствует о слабых основных свойствах. Это подтверждает целесообразность разработки методики методом ацидиметрии в неводной среде. Следует отметить, что использование муравьиной кислоты, а также смеси ее с уксусной кислотой (в соотношении 1:1) показало отсутствие скачка титрования и, соответственно, невозможность их применения для количественного определения субстанции VMA-10-21.
Для органолептического установления точки эквивалентности использовали индикатор кристаллический фиолетовый. В процессе титрования титруемый раствор из первоначального цвета – сине-фиолетового, переходил в фиолетовый, далее – в голубой, зеленый и желтый с образованием осадка. Однако указанные переходы окраски не соответствовали точке эквивалентности, поэтому нами рекомендуется потенциометрический способ определения точки эквивалентности (рис. 1).
Исходя из полученных данных, был рассчитан фактор эквивалентности f = 0,5005, подтверждающий, что одна молекула субстанции VMA-10-21 взаимодействует с двумя молекулами хлорной кислоты. Опираясь на результаты расчетов зарядов в ORCA 4.1 (рис. 2), мы предполагаем протонирование атома азота хи-назолинового ядра в положении N1 и атома азота в пиперазиновом цикле, соединенного с фенильным заместителем. По данным расчетов, другие атомы азота (N3 и вторичный амидный) не участвуют в протонировании из-за электронных эффектов расположенных рядом карбонильных групп.
Полученные результаты по оценке прецизионности методики представлены в табл. 1.

Рис. 1. Дифференциальная кривая титрования субстанции VMA-10-21 в ледяной уксусной кислоте

Рис. 2. Результаты расчета зарядов молекулы VMA-10-21
Таблица 1
Результаты параметров прецизионности методики
Навеска (взято), г |
Объем титранта, мл |
Найдено, г |
Найдено, % |
Метрологические характеристики |
0,1053 |
6,00 |
0,1037 |
98,48 |
X = 99,82 S = 0,8921 s~ A = 0,2974 RSD = 0,8938% |
0,1020 |
5,85 |
0,10111 |
99,13 |
|
0,1011 |
5,89 |
0,10180 |
100,69 |
|
0,1056 |
6,05 |
0,1046 |
99,02 |
|
0,1039 |
6,06 |
0,1047 |
100,81 |
|
0,1040 |
6,00 |
0,1037 |
99,71 |
|
0,1037 |
6,04 |
0,1044 |
100,67 |
|
0,1005 |
5,77 |
0,0997 |
99,23 |
|
0,1010 |
5,88 |
0,1016 |
100,62 |
Относительное стандартное отклонение (RSD) при анализе субстанций не должно превышать 1 % [2]. Представленные результаты соответствуют данному требованию, что дока- зывает валидность методики по показателю прецизионности. График, полученный в ходе оценки методики параметрам линейности, представлен на рис. 3.
Коэффициент корреляции r составил 0,999, что соответствует требованиям ОФС 1.1.0012.15 «Валидация аналитических методик» [2] и под- тверждает пригодность методики по показателю линейность. В табл. 2 представлены результаты определения правильности методики.

Рис. 3. График линейной зависимости предлагаемой методики
Результаты определения параметров правильности методики
Таблица 2
Уровень |
Взято, г |
Объем тит-ран-та, мл |
Найдено, г |
Открыва-емость (R), % |
Метрологические характеристики |
1 (1:0,5) |
0,1212 |
7,08 |
0,122369 |
100,9649149 |
R = 100,60 % S = 0,8963 RSD = ±0,8910 % |
0,1203 |
7,02 |
0,121332 |
100,8582273 |
||
0,1215 |
6,99 |
0,120814 |
99,43533552 |
||
2 (1:1) |
0,0900 |
5,22 |
0,090222 |
100,2461816 |
|
0,0912 |
5,23 |
0,090394 |
99,11666851 |
||
0,0917 |
5,38 |
0,092987 |
101,4034628 |
||
3 (1:2) |
0,0602 |
3,52 |
0,060839 |
101,0615647 |
|
0,0609 |
3,59 |
0,062049 |
101,886584 |
||
0,0611 |
3,55 |
0,061358 |
100,4215657 |
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
Разработана и валидирована титриметрическая методика количественного определения субстанции 3-[2-(4-фенил-1-пиперазино)-2-оксоэтил] хиназолин-4(3 Н )-он в неводной среде.
-
1. Гендугов, Т. А. // Евраз. союз ученых. – 2019. – № 11–2 (68). – С. 46–47.
-
2. Государственная Фармакопея Российской Федерации. Изд. XIV. Т. 1. – М., 2018. [Электронный ресурс]. – Режим доступа: http://feml.scsml.rssi.ru/feml .
-
3. Личко, А. Е. Подростковая психиатрия / А. Е. Личко. – М. : Медицина, 1985. – 416 с.
-
4. Пат. России № 2507199.
-
5. Neese, F. // Comp. Mol. Sci. – 2018. – Vol. 1. – № 8. – e1327.
-
6. Wittchen Н., Jacobi F., Rehm J. // Eur. Neuropsycho-pharmacol. – 2011. – Vol. 21, № 9. – P. 655–679.
Список литературы Разработка и валидация методики количественного определения субстанции 3-[2-(4-фенил-1-пиперазино)-2-оксоэтил]-хиназолин-4(3Н)-она методом потенциометрического титрования в неводной среде
- Гендугов, Т. А. // Евраз. союз ученых. - 2019. -№ 11-2 (68). - С. 46-47.
- Государственная Фармакопея Российской Федерации. Изд. XIV. Т. 1. - М., 2018. [Электронный ресурс]. - Режим доступа: http://feml.scsml.rssi.ru/feml.
- Личко, А. Е. Подростковая психиатрия / А. Е. Личко. - М.: Медицина, 1985. - 416 с.
- Пат. России № 2507199.
- Neese, F. // Comp. Mol. Sci. - 2018. - Vol. 1. -№ 8. - e1327.
- Wittchen Н., Jacobi F., Rehm J. // Eur. Neuropsycho-pharmacol. - 2011. - Vol. 21, № 9. - P. 655-679.