Разработка ПЦР тест-системы для индикации нетуберкулезных микобактерий в биологических образцах и окружающей среде

Микобактерии, не входящие в туберкулезный комплекс, нетуберкулезные микобактерии (НТМБ), широко распространены в экологических резервуарах, у различных видов домашних и диких животных, в почве и других объектах внешней среды. Установлено значительное влияние НТМБ в проявлении неспецифических реакций на ППД-туберкулин у крупного рогатого скота, что приводит к необоснованному убою реагирующих животных, дополнительным затратам на дифференциальную диагностику, потере приплода и продукции животных, а также к огромным расходам на ветеринарно-санитарные мероприятия. В связи с этим создание тест-системы для скрининга объектов окружающей среды, контаминированных НТМБ, и выявления животных-бактерионосителей является актуальным. При разработке тест-системы применены современные молекулярнобиологические методы, с помощью которых были определены, сконструированы и синтезированы видоспецифичные для наиболее распространенных НТМБ пары праймеров и зонды. Для постановки ПЦР РВ оптимизированы температурный режим и соотношения компонентов реакционной смеси. Разработанная тест-система проверена по параметрам специфичности и чувствительности с использованием ДНК референтных штаммов M. avium, M. paratuberculosis, M. fortuitum, M. intracellulare, M. smegmatis, M. scrofulaceum и M. kansasii. Результаты исследований по конструированию тест-системы легли в основу проекта инструкции по ее применению для выявления ДНК НТМБ в биологических материалах и объектах окружающей среды методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) с гибридизационно-флуоресцентной детекцией в режиме «реального времени» «НТМБ ПЦР-РВ».