Разработка технологии и фармакологические исследования нативного сока подорожника

В настоящее время акцент на лекарственные растительные объекты продолжает оставаться значительным. Исследований в отношении фитопрепаратов в различной степени очистки достаточно много [4, 6]. Для репаративного действия известны такие «классические» растения, как подорожник, шиповник и другие. Особенно в этом отношении интересен подорожник [1]. На основании литературных сведений по составу листьев подорожника и экспериментально подтвержденных данных мы провели разработку по получению сока подорожника большого. Учитывая необходимость повышения выхода биологически активных веществ, что имеет не только фармакотерапевтические, но и технолого-экономическое значение, нами использована ферментация.

Важным фактором, повышающим динамику извлечения сока, является степень измельчения листьев подорожника и продолжительность контакта ферментированного сока с исходным сырьем. Для каждого вида сырья устанавливали оптимальные степень и способ измельчения листьев подорожника, обеспечивающие наиболее полное и быстрое их истощение, позволяющее повысить суммарный выход экстрактивных веществ. Наибольшее количество экстрактивных веществ содержится в соке, полученном при выдерживании целых листьев в условиях холодильника (+5о - +8оС) в течение 10 дней, с последующим измельчением до 3-5 мм [5]. Увеличение сухого остатка при дальнейшем выдерживании листьев в холодильнике менее значительно. Измельченные листья подорожника помещали в термостат при температуре

Бадальян Залина Владимировна, старший преподаватель кафедры технологии лекарственных форм и организации фармацевтического дела

37оС. Продолжительность ферментативного процесса, протекающего при достигнутой температуре – 24 часа. Ферментацию прекращали, и смесь повторно измельчали до образования однородной массы, которую отжимали на прессе. К отжатому соку добавили 25 частей этилового спирта 90% при постоянном перемешивании. При работающей мешалке добавили 0,15% натрия метабисульфита, перемешивали до полного растворения. Затем отбирали пробу для определения содержания спирта, сухого остатка и биологически активных веществ. Полученный сок подорожника отстаивали в течение 7 суток. Отстоявшийся от сопутствующих веществ сок декантировали, фильтровали. В соответствии с традиционной технологией сока, модифицированная технология получения сока привела к увеличению выхода ферментированного сока на 4,9%, и при этом содержание экстрактивных веществ увеличивается в среднем на 13%.

Полученные соки: исходный и ферментированный оценивали по внешнему виду, сухому остатку, подлинности, количественному содержанию полисахаридов и органических кислот. Для количественного определения содержания полисахаридов использовали спектрофотометрическую методику. Данный способ основан на измерении оптической плотности продуктов взаимодействия моносахаридов, образовавшихся после гидролиза полисахаридов, с кислотой пикриновой в щелочной среде. В качестве стандартного образца использовали субстанцию глюкозы. В исходном соке подорожника большого содержится 1,89±0,072% суммы полисахаридов, а в ферментированном соке – 2,1±0,089% суммы полисахаридов. Валидационную оценку метода проводили по показателям на прецизионность и правильность. Правильность методик определяли методом добавок. Полученные данные представлены в табл. 1. Проведенные исследования позволили объективно оценивать количество полисахаридов в различных сериях сока подорожника.

Для количественного определения содер- 1,068 г/мл, а в ферментированном соке 1,299 г/100 жания органических кислот использовали методи- мл. Статистически обработанные результаты опре-ку ГФ ХІ издания [2]. Содержание органических деления органических кислот в соках подорожника кислот в исходном соке подорожника составило: представлены в табл. 2.

Таблица 1. Результаты определения прецизионности суммы полисахаридов в ферментированном соке подорожника

Таблица 2. Результаты количественного определения органических кислот в соке подорожника большого

Хроническое воспаление обуславливает необходимость длительного применения лекарственных средств, поэтому остается актуальной разработка противовоспалительных препаратов растительного происхождения, которые обладают менее выраженными побочными эффектами и большей широтой терапевтического действия, чем синтетические противовоспалительные средства. Учитывая, что подорожник находит достаточно широкое изучение в качестве средства лечения ран и воспаления, представляется целесообразным провести экспериментальное изучение ферментированного сока данного растения [3]. Противовоспалительную и ранозаживляющую активность изучали на лабораторных животных – крысах-самцах линии «Вистар», массой 200,0±10,0 г. В эксперименте использовали животных одной возрастной группы (6 месяцев). В каждой группе находилось по 8 животных. Статистическую обработку результатов проводили внутри серий по t-критерию Стьюдента (методом попарных сравнений), между сериями – по критерию инверсий Вилкоксона-Манна-Уитни с применением стандартного пакета программ «Statistika» Windows Microsoft Excel.

Для оценки антиэкссудативных свойств сока у крыс под хлоралгидратным наркозом (350 мг/кг) тщательно выстригали шерсть в области спины, а затем через разрез кожи в подкожной клетчатке формировали полость. В эту полость помещали предварительно простерилизованный ватный шарик массой 15 мг, после чего на рану накладывали 2 шва. На 8 сутки опыта имплантированный шарик с образовавшейся вокруг него грануляционной тканью извлекали, высушивали до постоянного веса при 55-60° С. Вес образовавшейся грануляционно-фиброзной ткани определяли по разнице между весом высушенной гранулемы и имплантированного ватного шарика. О процессах экссудации судили по разнице в весе свежепрепарирован-ной и высушенной гранулем.

Противовоспалительное действие исследовали на 3-х группах животных:

• 1    группа – животные контрольной группы (контроль 1), у которых моделировали воспаление, но лекарственное воздействие не осуществлялось (наносили физиологический раствор).

• 2    группа – животные контрольной группы (контроль 2), у которых моделировали воспаление и использовали сок подорожника ферментированный.

• 3    группа – животные, у которых моделировали воспаление и использовали сок подорожника (стандартный).

Ферментированный сок подорожника и препарат сравнения – официальный сок подорожника наносили местно два раза в день на поврежденную поверхность кожи из расчета 0,5 мл на 1 см2. В контрольной группе животных раны обрабатывались изотоническим раствором натрий хлорида.

Экспериментально установлено, что курсовое применение ферментированного сока подорожника эффективно ограничивает (относительно контрольной группы животных) экссудативную фазу воспаления (на 50,4%). Данные представлены в табл. 3.

Таблица 3. Противовоспалительная активность сока подорожника

Примечание: в скобках указаны изменения в % относительно животных контрольной группы № 1

Ферментированный сок подорожника по своим противовоспалительным свойствам превосходит препарат сравнения – сок подорожника (официальный), который ограничивал экссудативную фазу воспаления на 39,6% относительно животных без лечения (контроль № 1).

Выводы: разработана технология получения ферментированного сока подорожника, проведена его стандартизация по содержанию полисахаридов и органических кислот. Экспериментально установлено, что ферментированный сок подорожника при местном применении оказывает выраженное влияние на экссудативный процесс воспаления, а также способствует активации процессов кожной регенерации.