Реакция регионарных лимфатических узлов при проведении цистостомии у кроликов

В настоящее время заболевания нижних отделов мочевыводящих путей у мелких домашних животных занимают ведущее место среди незаразных болезней. В последние годы наблюдается тенденция роста количества больных уролитиазом животных [3]. Исследование увеличенных лимфатических узлов всегда таило большие трудности для морфологов [2].

Заболевание мочекаменной болезнью занимает одно из ведущих мест. Поэтому необходимо разрабатывать новые методики лечения, которые зарекомендуют себя как эффективные и менее травматичные при применении их в ветеринарной практике, чем ныне существующие.

Наиболее часто заболевание отмечается у кошек, проживающих в квартире, где они имеют высоко концентратный тип кормления, недостаточность водопоя, моциона, а также нерегулярность или отсутствие реализации половых функций. Известно, что среди клинических случаев патологий мочевыводящих путей мочекаменная болезнь обнаруживается в 7,7-11 % случаев.

Согласно данным исследования, среди кошек с патологиями мочевыводящих путей, мочекаменная болезнь была обнаружена в 15-23 % клинических случаев [6]. У кошек с признаками обструктивной уропатии этиологическим фактором в 59 % случаев являлась уретральная пробка, сформировавшаяся из песка и фибрина, в 12 % причиной развития болезни были уролиты.

Также существуют исследования, показывающие, что пропорциональная смертность у кошек, страдающих уролитиазом, выше, чем у людей и собак.

Любые экспериментальные и клинические данные требуют секционного подтверждения. Наиболее востребованной является животная модель – «кролик». Не имея базовых параметров по нормальной морфологии и физиологии иммунной системы кроликов, нельзя использовать их для моделирования и изучения механизма развития болезней различной этиологии животных и человека.

Цель исследований: дать морфофункциональную оценку состояния регионарных лимфатических узлов при проведении цистостомии у кроликов.

Для достижения цели были поставлены следующие задачи:

• 1.    Изучить динамику морфологического состава крови у экспериментальных кроликов при проведении цистостомии на 30-е сутки эксперимента.

• 2.    Оценить влияние оперативного вмешательства и нахождение катетера в полости мочевого пузыря на состояние мезентериальных лимфатических узлов.

Материал и методы исследований. Объектом исследования послужили 5 кроликов в возрасте 6 месяцев, живой массой 3000-3500 г., самцы, породы Советская шиншилла, полученных из питомника лабораторных животных г. Уфа. Для проведения экспериментального исследования был получен документ

Выписка из протокола № 9 Локальный Этический Комитет федерального государственного бюджетного образовательного учреждения высшего образования «Казанский государственный медицинский университет [5]. Все исследования проводили в центре экспериментальной хирургии КГАВМ.

Методы исследования:

• -    Клинические исследования. Проводили всем животным по общепринятой методике, оценивали состояние слизистых оболочек, выполняли пальпацию мочевого пузыря, определяли температуру, пульс, дыхание. При проведении предоперационного УЗИ исследования у всех 5 кроликов было обнаружено большое количество взвеси, представляющее собой кристаллы солей и клетки эпителия мочевого пузыря. Кролики являются хорошей моделью для проведения цистостомии.

• -    Гематологические исследования. У кроликов кровь брали на 1-е, и 30-е сутки из ушной вены, после оперативного вмешательства. Исследования проводили в лаборатории Веттест.

• -    Морфологические исследования. Фиксацию лимфатических узлов осуществляли в 10 % нейтральном формалине по Лилли или жидкости Карнуа. Согласно общепринятой методике, после соответствующей проводки по спиртам возрастающей концентрации, следовала обработка в ксилоле и заливка в парафин. На микротоме Leica SM 2000R изготавливали парафиновые срезы толщиной 4-5 мкм. Полученные препараты окрашивали гематоксилином и эозином, по Ван-Гизону и пиронином по Браше. Иммунно-морфологические реакции в структурных и клеточных элементах оценивали согласно алгоритму, разработанному для исследования реактивных гиперплазий лимфатических узлов [1]. Микроскопическое исследование проводили с использованием микроскопа «Carl Zeiss Axioscope».

Было изучено состояние наружных паховых и внутренних подвздошных лимфатических узлов кролика, полученные на 30 сутки после эксперимента. В качестве контроля послужили лимфатические узлы здоровых животных тех же регионов.

• -    Статистическая обработка проводилась с использованием пакета программ SPSS (ver. 18.0). Нормальность распределения данных оценивалась с помощью критерия Колмогорова-Смирнова. Сравнение показателей до и после операции проводилось с использованием парного критерия Стьюдента. Отличия полагались статистически значимыми при Р<0,05. Данные представлены в виде M±m, где M – среднее арифметическое значение, m – стандартная ошибка среднего.

Результат исследований. Все кролики хорошо перенесли оперативное вмешательство. Двигательная активность и пищевая возбудимость восстанавливалась через 6-8 часов.

В первые сутки после операции общее состояние животных было удовлетворительным. Восстановился аппетит и прием воды.

На 3-й день состояние животных улучшалось. Температура тела составляла 38,0-38,5 °C. Спустя 7 дней общее состояние животных было удовлетворительным. Сохранялась двигательная активность. Болезненность при мочеиспускании отсутствовала. Температура тела составляла 37,5-38,0 °C.

Спустя 14 дней общее состояние кроликов оценивалось как удовлетворительное. Температура тела составляла 37,5-38°C. Катетер самопроизвольно выпадал. Операционная рана заживала по первичному натяжению.

В ходе исследований на 30-ые сутки после проведения цистостомии у кроликов было выявлено, что показатели СОЭ, концентрация гемоглобина, количественный и качественный состав лейкоцитов находились в пределах референсных значений. Данная картина позволяет сделать вывод об отсутствии воспалительного процесса в органах мочевыделительной системы на отдаленных сроках после оперативного вмешательства. На 30-е сутки наблюдалась достоверная разница между показателями эритроцитов с дооперационными значениями, однако и эти показатели находились в пределах референсных значений (Таблица 1).

Таблица 1 – Количественный состав крови экспериментальных кроликов (n=5)

Показатель	Референсные значения		Данные
	ед. изм.	норма	до операции	30 сутки после операции
СОЭ	мм/час	1-3	0,5±0,0	1,0±0,5
Гемоглобин	Г %	10,05-16,0	15,0±1,6	16,4±0,5
Лейкоциты	тыс./мкл	2,6-9,9	7,2±2,1	8,1±1,9
Эритроциты	млн./мкл	5,2-7,8	3,7±0,5	5,3±0,3 (Р=0,048)*
П	%		3,8±0,8	3,2±1,6
С	%		24,0±5,3	22,8±5,7
Мон	%	2-10	0,2±0,2	0,8±0,4
Л	%	25-85	64,2±7,5	69,2±6,7
Э	%	0-2	7,8±1,9	4,0±0,9
Б	%	0-4	0,0±0,0	0,0±0,0

* - Статистически достоверные отличия показателя до операции и на 30 сутки после операции

Морфологическая картина лимфатических узлов кролика в норме. Соединительнотканный остов лимфатического узла представлен капсульно-трабекулярным аппаратом и сетью ретикулиновых волокон, которые расположены во всех зонах узла (Рисунок 1).

Капсульно-трабекулярная основа состоит из коллагеновых, эластических и ретикулиновых волокон, а из клеточных элементов обнаруживаются фиброциты, фибробласты и единичные гладкомышечные клетки. Иногда капсульно-трабекулярная основа содержит участки жировой ткани. Соединительнотканный остов более выражен во внутренних подвздошных лимфатических узлах.

Рисунок 1 – Капсула лимфатического узла. Окраска по Ван Гизону. х 200.

Область, занимаемая кортикальной зоной, начинается сразу под субкапсулярным синусом и распространяется до паракортикальной зоны. Клеточный состав кортикальной зоны неоднороден и представлен практически всеми клеточными элементами, обнаруживаемыми в лимфоузле. Больше всего здесь средних и малых лимфоцитов, а также ретикулярных клеток. Содержание плазматических клеток в кортикальной зоне выше, чем в других структурных компонентах, за исключением мякотных тяжей, где также обнаруживается плазматизация. Между клеточными элементами кортикальной зоны часто обнаруживаются пучки коллагеновых волокон.

В кортикальной зоне находятся лимфоидные фолликулы, большая часть из которых без реактивных центров (первичные фолликулы) (Рисунок 2).

Рисунок 2

Первичный лимфоидный фолликул без реактивного центра. Окраска

гематоксилином и эозином. х 200.

Рисунок 3 – Мякотный тяж. Окраска гематоксилином и эозином. х 400.

Клеточный состав фолликулов, не имеющих реактивных центров, в основном представлен малыми лимфоцитами. По сравнению с другими зонами здесь выше процент бластных форм, больших лимфоцитов и митотически делящихся клеток. В лимфатических узлах обнаружились отдельные фолликулы с реактивными центрами (вторичные фолликулы). По сравнению с первичными фолликулами в них увеличилось число плазмобластов и больших лимфоцитов.

Под кортикальной областью находится паракортикальная зона, клеточный состав которой характеризуется повышенным процентным содержанием малых лимфоцитов и наличием посткапиллярных венул, через которые осуществляется рециркуляция лимфоцитов.

Мякотные тяжи, которые расположены преимущественно в мозговом веществе лимфатического узла, характеризуются полиморфностью клеточного состава, с преимущественным содержанием средних лимфоцитов, ретикулярных и плазматических клеток (Рисунок 3).

Под капсулой лимфатического узла определяется субкапсулярный синус, а в корковом и мозговом веществе – промежуточные синусы (Рисунок 4).

Рисунок 4 – Промежуточные синусы. Окраска гематоксилином и эозином. х 200.

Рисунок 5 – Ретикулярные клетки синуса. Окраска гематоксилином и эозином. х 400.

Среди ретикулярных клеток в синусах иногда обнаруживаются фибробластические элементы, окруженные коллагеновыми волокнами. В подвздошных лимфатических узлах синусы несколько шире, чем в паховых.

Кровеносное микроциркуляторное русло лимфатического узла представлено как крупными сосудами артериального и венозного типа, расположенными в области ворот узла, так и артериолами, венулами и капиллярами в кортикальной зоне и мякотных тяжах.

При микроскопическом исследовании наблюдаемые на 30-е сутки эксперимента, в лимфатических узлах наружных паховых и внутренних подвздошных лимфатических узлов кролика в целом стереотипны. Прежде всего, следует отметить отсутствие воспалительной реакции. Имеет место умеренная реактивная гиперплазия, более выраженная во внутренних подвздошных лимфатических узлах.

В соединительнотканном остове лимфатических узлов отмечается незначительное утолщение капсулы и увеличение числа трабекул.

В кортикальной зоне наблюдается плазматизация и гиперплазия лимфоидных фолликулов с появлением крупных реактивных центров (Рисунок 6).

Клеточный состав таких фолликулов отличается от здоровой группы. Здесь увеличено содержание плазмобластов, больших лимфоцитов, макрофагов и митотически делящихся клеток (Рисунок 7).

Рисунок 6 – Вторичный лимфоидный фолликул с реактивным центром. Окраска

гематоксилином и эозином. х 200.

Рисунок 7 – Деталь рис. 5. Клеточный состав реактивного центра. х 400.

Определенные изменения, по сравнению со здоровыми кроликами, наблюдаются в паракортикальной зоне лимфатических узлов. Указанная зона гиперплазирована, здесь происходит увеличение числа бластных форм и нарастает содержание макрофагов, которые характеризуются наличием фагоцитированных включений в цитоплазме.

Площадь мякотных тяжей несколько уменьшается за счет увеличения площади паракортикальной зоны и синусов. Морфологические изменения, наблюдаемые в мякотных тяжах, сходны с таковыми в кортикальной зоне.

Наблюдается плазмобласттрансформация и плазматизация (Рисунок 8), а также увеличивается содержание макрофагов.

Рисунок 8 – Плазматизация мякотных тяжей. Окраска по Браше. х 400

Рисунок 9 – Синусный гистиоцитоз. Окраска гематоксилином и эозином. х 200.

Синусы лимфатических узлов расширены и заполнены преимущественно плотно прилежащими друг к другу ретикулярными клетками, находящимися часто в состоянии фагоцитоза. Кроме того, здесь возросло содержание малых лимфоцитов, плазматических клеток и свободных макрофагов. Подобное состояние синусов определяется как

«синусный гистиоцитоз» (Рисунок 9).

В единичных случаях имеют место склеротические процессы или опустошение синусов и лимфостаз.

Некоторым изменениям подверглось кровеносное микроциркуляторное русло лимфатических узлов. Так, сосуды расширены и полнокровны (Рисунок 10).

Рисунок 10 – Расширение просвета и полнокровие сосудов. Окраска гематоксилином и эозином. х 200.

Имеет место выход эритроцитов за пределы сосудистого русла, которые обнаруживаются свободно лежащими в лимфоидной ткани.

Заключение. Исходя из всех полученных данных следует, что цистостомия безопасна, не вызывает осложнений в послеоперационном периоде.

По результатам исследования крови можно сделать заключение, что незначительные изменения показателей не претерпевают значимых изменений, а находятся в пределах референсных значений.

В исследованиях лимфатических узлов имело место умеренная реактивная гиперплазия. Также регистрировалось незначительное утолщение капсулы лимфатических узлов. На основании морфологических исследований оперативное вмешательство и нахождение катетера в полости мочевого пузыря не влияют на структурные изменения в лимфатических узлах. А выявленные реактивные изменения, являются ответом на оперативное вмешательство и хирургическую травму.

Резюме

Исследование проведено для оценки морфофункционального состояния регионарных лимфатических узлов после цистостомии, выполненной пяти кроликам. Кроме того, в послеоперационном периоде отслеживали изменения состава крови.