Результаты доклинического испытания вакцины ассоциированной против парагриппа-3 инфекционного ринотрахеита, вирусной диареи, рота- и коронавирусной инфекций крупного рогатого скота

Автор: Спиридонов Г.Н., Макаев Х.Н., Гумеров В.Г., Евстифеев В.В., Махмутов А.Ф., Каримуллина И.Г.

Журнал: Ученые записки Казанской государственной академии ветеринарной медицины им. Н.Э. Баумана @uchenye-zapiski-ksavm

Статья в выпуске: 4 т.244, 2020 года.

Бесплатный доступ

Приведены результаты доклинических исследований лекарственного препарата для ветеринарного применения «Вакцина, ассоциированная против парагриппа-3, инфекционного ринотрахеита, вирусной диареи, рота- и коронавирусной инфекций крупного рогатого скота инактивированная эмульсионная». Вакцина изготовлена из концентрированных антигенов вирусов парагриппа-3 (штамм «ПТК-45/86»), инфекционного ринотрахеита (штамм «ТК-А (ВИЭВ-В2), вирусной диареи (штамм «ВК-1»), ротавируса крупного рогатого скота (штамм 2-«КЛ-2») и коронавируса крупного рогатого скота (штамм «РМ»), инактивированных формалином (0,2 % к объему), эмульгированных в равном соотношении с масляным адъювантом (15 % ланолина, 85 % ПЭС-3). Изучены внешний вид, полнота инактивации, стерильность, безвредность, антигенная активность вакцины, переносимость здоровыми животными двукратного введения вакцины в повышенных дозах. Установлено, что вакцина стерильна, безвредна для животных. Обладает высокой антигенной активностью. Двукратное подкожное введение вакцины в дозе 1 см3 у кроликов индуцировало образование специфических антител в сыворотке крови в титрах к вирусу ПГ-3 266,6±65,3 в РТГА, вирусу ИРТ -42,6±13,0 в РВН, вирусу ВД - 26,6±6,53 в РВН, ротавирусу - 853,3±209,0 в ИФА, коронавирусу - 213,3±52,2 в РТГА. Животные хорошо переносили введение вакцины в повышенных дозах. После двукратного введения вакцины в дозе, превышающей профилактическую в 3 раза, у животных не отмечали отклонение в физиологических показателях организма. По результатам исследований будут проведены производственные испытания вакцины на ограниченном поголовье крупного рогатого скота.

Еще

Парагрипп-3, инфекционный ринотрахеит, вирусная диарея, ротавирусная, коронавирусная инфекция, телята, вакцина, профилактика

Короткий адрес: https://sciup.org/142226062

IDR: 142226062   |   DOI: 10.31588/2413-4201-1883-244-4-183-187

Текст научной статьи Результаты доклинического испытания вакцины ассоциированной против парагриппа-3 инфекционного ринотрахеита, вирусной диареи, рота- и коронавирусной инфекций крупного рогатого скота

Κeywords : parainfluenza virus 3, infectious rhinotracheitis, viral diarrhea, rotavirus, coronavirus infection, calves, vaccine, prevention

Респираторно-кишечные инфекции молодняка крупного рогатого скота широко распространены как в небольших, так и в крупных животноводческих комплексах по производству молока. Они наносят хозяйствам огромный экономический ущерб [2, 3, 5, 7]. Основными возбудителями этих инфекций являются вирусы парагриппа-3 (ПГ-3), вирусной диареи – болезни слизистых оболочек (ВД-БС), герпесвирус типа 1, респираторно-синцитиальный вирус, рота-, коронавирусы, которые преимущественно вызывают смешанную инфекцию, протекающую с клиникой диареи, бронхопневмонии, обезвоживания и интоксикации всего организма [1, 4, 6].

В отделе биобезопасности ФГБНУ «ФЦТРБ-ВНИВИ» разработана инактивированная эмульсионная ассоциированная вакцина против парагриппа-3, инфекционного ринотрахеита, вирусной диареи, рота-и коронавирусной инфекций крупного рогатого скота.

Цель настоящих исследования – доклиническое исследование вакцины в лабораторных условиях.

Материал и методы исследований. Работа проведена в условиях лабораторий вирусологии и бактерийных болезней ФГБНУ «ФЦТРБ-ВНИВИ». Для доклинических испытаний были представлены 3 экспериментальные серии вакцины ассоциированной против парагриппа-3, инфекционного ринотрахеита, вирусной диареи, рота- и коронавирусной инфекций крупного рогатого скота, изготовленные из концентрированных антигенов вирусов парагриппа-3 (штамм «ПТК-45/86»), инфекционного ринотрахеита (штамм «ТК-А (ВИЭВ)-В2»), вирусной диареи (штамм «ВК-1»), ротавируса крупного рогатого скота (штамм 2-«КЛ-2») и коронавируса крупного рогатого скота (штамм «РМ»), инактивированных формалином (0,2 % к объему), эмульгированных в равном соотношении с масляным адъювантом (15 % ланолина, 85 % ПЭС-3).

По внешнему виду вакцина представляет собой эмульсию розовато-белого цвета. При длительном хранении допускается незначительное расслоение эмульсии, восстанавливающееся при взбалтывании.

Вакцина расфасована по 50,0 и 100,0 см3 в стеклянные флаконы соответствующей вместимости, укупоренные резиновыми пробками, укрепленными алюминиевыми колпачками.

Срок годности вакцины 12 месяцев с даты выпуска, при соблюдении условий хранения и транспортирования.

Виды исследований: физикохимические, микробиологические, серологические, клинические.

В процессе доклинического испытания вакцины использованы подопытные животные: белые мыши, массой 15-16 г – 60 голов; кролики, массой 2,5-3,0 кг – 9 голов; телята 30-45 дневного возраста – 15

голов.

Определение антигенной активности вакцины проводили с использованием следующего оборудования: термостат электрический суховоздушный ТС-1/80 СПУ; холодильник фармацевтический «ПОЗИС», ХФ-250-3; рН-метр – рН-150МИ; спектрофотометр длиной волны 490 нм Multiscan GO; дозаторы пипеточные: одноканальный и многоканальный «Блек», ЗАО «Термо Фишер Сайентифик»; дистиллированная вода ГОСТ 6709-72, рН 7,2-7,4; нaбор для диагноcтики коронавируcного энтeрита крупнοгo рοгатoго скотa методoм гемaгглютинации (ВИЭВ им. Я.Р. Коваленко); набор для диагностики парагриппа-3 крупного рогатого скота (Курская биофабрика – фирма «БИОК»); перевиваемая культура клеток трахеи эмбриона коровы линия TR; перевиваемая культура клеток эмбриона коровы линия MDBK.

Результаты исследований. Для определения внешнего вида, цвета, наличия посторонней примеси, плесени, трещин стекла каждый флакон с вакциной просматривали визуально. Вакцина представляет собой эмульсию розовато-белого цвета. Не содержит посторонних примесей, плесени, не наблюдается трещин флаконов. Все флаконы плотно укупорены, правильно этикетированы.

Определение полноты инактивации и стерильности вакцины проводили согласно ГОСТа 28085-2013.

Оборудование и реактивы: термостаты электрические суховоздушные ТС-1/80 СПУ, обеспечивающие температуру нагрева (37±1) оС и (22,5±2,5) оС; стерилизатор паровой вертикальный автоматический СПВА-75-1-НН; бокс микробиологической безопасности Класс II (Тип В-2) БМБ-II «Ламинар-С» -1,2 (231120); микроскоп биологический Микромед-2 (2-20); рН метр рН-150МИ; питательный бульон для культивирования микроорганизмов сухой (ГРМ-бульон) ТУ 9398-021-78095326-2006; питательный агар для культивирования микроорганизмов сухой (ГРМ-агар) ТУ 9398-020-78095326-

2006; питательная среда № 2 ГРМ (САБУРО) ТУ 9398-002-78095326-2006.

Для проверки на стерильность из 6 флаконов каждой серии вакцины делали посевы по 0,2 см3 на жидкие питательные среды: МПБ и МППБ (среда Китта-Тароцци) и твердые питательные среды: Сабуро и МПА. На посев использовали по три пробирки и две чашки с питательной средой. На среду Китта-Тароцци делали высевы в две пробирки и два флакона.

Пробирки и флаконы с посевами на всех средах, кроме среды Сабуро, выдерживали в термостате при температуре (37±1) °С, на среде Сабуро – при температуре (22,5±2,5) °С, в течение 7 суток. По истечении указанного срока делали пересев, за исключением посевов на МПА. Пересевали пробы на те же питательные среды и в тех же объемах, что и при посеве. Вторичные посевы выдерживали 7 суток.

В течение срока наблюдения ни в одной из засеянных пробирок роста бактерий и грибов не наблюдали, т.е. вакцина стерильна. Определение безвредности вакцины проводили по ГОСТ 31926-2013. Сущность метода заключается в определении реакции белых мышей на введение тест-дозы вакцины. Для проверки на безвредность были сформированы опытные и контрольные группы клинически здоровых животных, прошедших карантин.

Животные и материалы: белые мыши массой 15-16 г – 60 голов; шприцы инъекционные однократного применения с иглой по ГОСТ ISO 7886-1-2011; спирт этиловый по ГОСТ 18300-87.

Безвредность каждой из трех серий вакцины определяли на 20 белых мышах, разделенных на 2 группы – контрольную и опытную по 10 голов в каждой. С этой целью вакцину тщательно взбалтывали, прогревали в термостате при температуре 3738 оС и вводили внутрибрюшинно 10 белым мышам в дозе 0,5 см3. 10 мышей оставались в контроле, им вакцину не вводили. Наблюдение за животными проводили в течение 10 суток.

В течение срока наблюдения после введения препарата все белые мыши опытных и контрольных групп оставались клинически здоровыми, они охотно принимали корм, активно передвигались, что указывает на безвредность вакцины.

Антигенную активность каждой серии вакцины определяли на 3 кроликах массой 2,5-3,0 кг, которым биопрепарат вводили подкожно в области спины в дозе 1,0 см3 двукратно с интервалом 14 дней. На 14 дней после первого и в те же сроки, после второго введения вакцины, у кроли- ков брали кровь и ее сыворотку исследовали на содержание специфических антител в РТГА с коронавирусным и парагриппоз-ным антигенами, в РВН с вирусами инфекционного ринотрахеита и вирусной диареи, в ИФА с ротавирусным антигеном, используя соответствующие наборы диа-гностикумов согласно наставлениям по их применению. Результаты исследований представлены в таблице 1.

Таблица 1 – Титры специфических антител у кроликов, вакцинированных вакциной, ассоциированной против парагриппа-3, инфекционного ринотрахеита, вирусной диареи, рота- и коронавирусной инфекций крупного рогатого скота

Наименование антигена

Метод исследования

Титры специфических антител к антигенам

14 дней после 1 вакцинации

14 дней после 2 вакцинации

Вирус парагриппа-3

РТГА

213,3±65,3

266,6±65,3

Вирус ИРТ

РВН

21,3±6,5

42,6±13,0

Вирус ВД

РВН

16,0±0,0

26,6±6,53

Ротавирус

ИФА

682,6±209,0

853,3±209,0

Коронавирус

РТГА

106,6±26,1

213,3±52,2

Из данных таблицы видно, что вакцина, ассоциированная против парагриппа-3, инфекционного ринотрахеита, вирусной диареи, рота- и коронавирусной инфекций крупного рогатого скота обладает достаточно высокой антигенной активностью. Титры специфических антител через 14 дней после второй вакцинации у кроликов составили к вирусу ПГ-3 266,6±65,3 в РТГА, вирусу ИРТ - 42,6±13,0 в РВН, вирусу ВД - 26,6±6,53 в РВН, ротавирусу -853,3±209,0 в ИФА, коронавирусу -213,3±52,2 в РТГА.

Изучение переносимости здоровыми животными двукратного введения вакцины в повышенных дозах, проводили на 15 телятах 30-45-дневного возраста, разделенных на 3 группы по 5 голов в каждой. Телятам 1 опытной группы вакцину вводили внутримышечно двукратно с интервалом 14 дней в профилактической дозе – 1 см3. Животным 2 опытной группы вводили вакцину двукратно с интервалом 14 дней в дозе, превышающей дозу для этого возраста животных в 3 раза – 3 см3. Животным 3 контрольной группы вакцину не вводили. Наблюдение за животными ввели в течение 30 суток. Установили, что все телята опытных и контрольной групп в течение всего срока наблюдения оставались клинически здоровыми, они охотно принимали корм и воду, активно передвигались.

Результаты исследований указывают, что вакцина безвредна, животные хорошо переносят двукратное введение вакцины в дозе, превышающей профилактическую в 3 раза.

Результаты проведенных исследований позволяют приступить к испытанию вакцины на ограниченном поголовье крупного рогатого скота в производственных условиях.

Заключение. В результате доклинических исследований лекарственного препарата для ветеринарного применения «Вакцина, ассоциированная против парагриппа-3, инфекционного ринотрахеита, вирусной диареи, рота- и коронавирусной инфекций крупного рогатого скота инактивированная эмульсионная», изучен внешний вид, полнота инактивации, стерильность, безвредность, антигенная активность вакцины, переносимость здоровыми животными двукратного введения вакцины в повышенных дозах. Установлено, что вакцина стерильна, безвредна, обладает высокой антигенной активностью, хорошо переносится животными при введении в повышенных дозах.

РЕЗУЛЬТАТЫ ДОКЛИНИЧЕСКОГО ИСПЫТАНИЯ ВАКЦИНЫ АССОЦИИРОВАННОЙ ПРОТИВ ПАРАГРИППА-3, ИНФЕКЦИОННОГО РИНОТРАХЕИТА, ВИРУСНОЙ

Список литературы Результаты доклинического испытания вакцины ассоциированной против парагриппа-3 инфекционного ринотрахеита, вирусной диареи, рота- и коронавирусной инфекций крупного рогатого скота

  • Гумеров, В.Г. Эпизоотологический и серологический мониторинг смешанных респираторно-кишечных инфекций крупного рогатого скота / В.Г. Гумеров, В.В. Евстифеев, Х.Н. Макаев [и др.] // Ученые записки Казанской государственной академии ветеринарной медицины им. Н.Э. Баумана. - 2019. - Т. 237. - № 1. - С. 56-60.
  • Дегтярев, В.П. Неонатология и болезни новорожденных телят / В.П. Дегтярев, С.В. Федотов, Г.М. Удалов. - М.: Издательство "ИНФРА-М", 2016. - 158 с.
  • Закутский, Н.И. Опыт профилактики и борьбы с инфекционным ринотрахеитом (ИРТ) и парагриппом-3 (ПГ-3) крупного рогатого скота / Н.И. Закутский, B. И. Жестерев, Л.Д. Конакова [и др.] // Диагностика, профилактика и меры борьбы с особо опасными, экзотич. и зооантропоноз. болезнями животных. - Покров. - 2000. - C. 60-62.
  • Мищенко, В.А. Особенности респираторных инфекций телят / В.А. Мищенко, А.А. Гусев, Н.А. Яременко [и др.] // Ветеринария. - 2000. - № 9. - С. 5-6.
  • Соколова, Н.Л. Перспективы диагностики и специфической профилактики желудочно-кишечных болезней новорожденных животных / Н.Л. Соколова // Труды ВИЭВ. - Т. 75. - М.: Издательство "ВИЭВ", 2010. - С. 112-114.
  • Шахов, А.Г. Этиология и профилактика желудочно-кишечных и респираторных болезней телят и поросят / А.Г. Шахов / Актуальные проблемы болезней молодняка в современных условиях. Мат. науч.-произв. конф. - Воронеж. -2002. - С. 3-8.
  • Яхаев, И.М. Увеличение сохранности новорожденных телят / И.М. Яхаев, В.П. Дегтярев, А.Э. Гансе / Труды Федерального центра охраны здоровья животных. - Т. 16. М.: Издательство "ФГБНУ "Росинформагротех", 2018. - С. 169-179.
Еще
Статья научная