Результаты испытания «Набора препаратов для диагностики хламидиоза свиней методом иммуноферментного анализа»

Среди поголовья свиней в Российской Федерации хламидиоз имеет значительное распространение. Однако, ввиду отсутствия четкого симптомокомплекса, часто латентного течения и сложности диагностики, а также отсутствия должного внимания ветеринарных специалистов к этой проблеме хламидиоз зачастую остается нераспознанным, а переболевание животных ведет к серьезным убыткам, которые нередко списываются на сопутствующие инфекции.

Ущерб при хламидиозе свиней складывается из потерь абортов, мертворождений и рождения слабых нежизнеспособных поросят. Хламидии являются этиологическим фактором пневмоний, полиартритов, конъюнктивитов, энцефаломиэлитов, уретритов и других болезней, которые могут охватывать от 7 до 15, а иногда до 80% животных [1,7,8].

Наиболее доступным средством проведения серологического мониторинга хозяйств на хламидиоз в ветеринарии, на сегодняшний день, является реакция связывания комплемента (РСК) с группоспецифическим хламидийным антигеном. К сожалению, этот метод имеет ряд недостатков, связанных с низкой чувствительностью, длительностью получения ответа и т.п. [2,6].

Наиболее перспективным диагностическим тестом является иммуноферментный анализ (ИФА). По чувствительности иммуноферментный анализ в 5-10 раз, а по специфичности в 2-3 раза превосходит РСК [3,5,9].

Исходя из этого, ранее были проведены исследования по разработке специфического хламидийного антигена для ИФА [4] и на его основе создан «Набор препаратов для диагностики хламидиоза КРС методом ИФА», который был испытан в лабораторных и производственных условиях.

Материал и методы. Для исследований использовали 995 проб сывороток крови свиней из 30 не благополучных по хламидиозу хозяйств РТ и других регионов РФ.

ИФА ставили в непрямом варианте, согласно «Инструкции по применению набора препаратов для диагностики хламидиоза свиней методом иммуноферментного анализа (ИФА)», утвержденной для производственных испытаний.

Учет результатов реакции проводили инструментально на спектрофотометре модели Bio-RadModel 680,при длине волны 490. Для оценки результата вычисляли критический уровень(ОП крит.), который определяется как значение оптической плотности отрицательного контроля (ОП отр.) умноженное на 2:

ОП крит.= ОП отр. х 2

Результат считали положительным, если значение оптической плотности данного образца выше критического уровня (ОП исп. > ОП крит.).

Если оптическая плотность испытуемой пробы меньше или равна оптической плотности отрицательного контроля (ОП исп. ≤ ОП отриц.), то результат считали отрицательным.

Если же оптическая плотность испытуемого образца больше оптической плотности отрицательного контроля и меньше или равна ОП крит. (ОП крит. ≥ ОП исп. > ОП отр.), то результат реакции считается сомнительным.

Параллельно все сыворотки крови исследовали в РСК, используя «Набор антигенов и сывороток для серологической диагностики хламидиоза сельскохозяйственных животных» (№ РОСС RU. ФВ01. Н21898) производства ФГУ «ФЦТРБ-ВНИВИ» (г. Казань). Результаты оценивали визуально, по феномену гемолиза эритроцитов. Полное отсутствие гемолиза эритроцитов оценивали как положительную реакцию (4 креста), а полный гемолиз соответственно как отрицательную реакцию.

Результаты исследований. Испытания экспериментальных серий «Набора препаратов для диагностики хламидиоза свиней методом иммуноферментного анализа» проводили в 2 этапа: в лабораторных и «производственных» условиях.

На первоначальном этапе, в лабораторных условиях, в РСК и ИФА с применением разработанного набора исследованию было подвергнуто 6 неблагополучных хозяйств РТ и других регионов России. Всего было исследовано 174 проб сывороток крови свиней. Все пробы параллельно исследовались в РСК. При этом в РСК положительно реагировало 35 проб, что составило 20%, а в ИФА 78 (44%), что больше в 2,2 раза. Титры специфических антител в РСК колебались в пределах 1:5 - 1:20, что соответствует иммунному фону неблагополучных по хламидиозу хозяйств. В ИФА этот показатель колебался в пределах 1:100 – 1:800.

Производственные испытания проводились на базе ФГУ «Татарская межрегиональная ветеринарная лаборатория» (г.Казань).

С применением экспериментальных серий «Наборов препаратов для диагностики хламидиоза свиней методом иммуноферментного анализа» было исследовано 821 проба сывороток крови свиней из 24 не благополучных по хламидиозу хозяйств РТ и других регионов РФ. Параллельно все сыворотки крови были исследованы в РСК. Результаты этих исследований обобщены в таблице.

Таблица - Результаты сравнительного исследования сывороток крови свиней в РСК и ИФА

Наименование метода исследования	Кол-во исследованных проб	Реагировало положительно
		Кол-во	%
РСК	821	119	14
ИФА		239	29

В ИФА было выявлено в 2 раза больше положительных результатов, чем в РСК.

Следует отметить, что в сравнительных опытах результаты ИФА показали хорошую корреляцию с данными базовой реакции – РСК, хотя она и не была полной. Расхождения в результатах ИФА и РСК, по-видимому, связаны с разными классами иммуноглобулинов (антител), выявляемых этими реакциями, а также с наличием «неполных» антител в сыворотках крови свиней, которые в РСК не выявляются.

Также, очень важно подчеркнуть, что интенсивность проявления титров антител в серологических тестах напрямую зависела от интенсивности проявления клинических признаков заболевания у животных в неблагополучных хозяйствах, т.е. в хозяйствах, где течение хламидиоза носило острый характер, процент серопозитивности животных был значительно выше, чем в хозяйствах с латентной стадией течения хламидийной инфекции. В ряде случаев результаты серологических исследований подтверждены прямой РИФ другими методами.

Заключение. Результаты испытания «Набора препаратов для диагностики хламидиоза свинейметодом иммуноферментного анализа» в условиях научно-исследовательской и производственных ветеринарных лабораторий доказали специфичность и высокую активность компонентов разработанной тест-системы, что позволяют рекомендовать её для ретроспективной диагностики хламидиоза свиней.

ЛИТЕРАТУРА: 1. Бортничук, В.А. Хламидиоз свиней / В.А. Бортничук. - Киев: «Урожай», 1991. - 191 с. 2. Домейка, М.А. Некоторые методические особенности проведения иммуноферментного анализа для изучения хламидиозов КРС / М.А. Домейка, В.П. Ришкявичене, В.И. Люткивячене // Тезисы докладов научно-практической конференции – «Ферментативные препараты в ветеринарии и животноводстве». Каунас, 28-29 сентября 1989. -С. 32-33. 3. Евстифеев, В.В. Изучение набора диагностикумов для иммуноферментного анализа при хламидиозе свиней / В.В. Евстифеев, Ф.М. Хусаинов, Л.А. Барбарова // Материалы международной научно-практической конференции, посвященной 80-летию ФГУП «Щелковский биокомбинат» - «Ветеринарная биотехнология настоящее и будущее» 20-23 сентября, 2004. - С. 189-191. 4 . Евстифеев, В.В., Хусаинов Ф.М., Барбарова Л.А., Равилов А.З. Усовершенствование комплементсвязывающего антигена для диагностики хламидиоза животных // Материалы международной научно-практической конференции, посвященной 80-летию ФГУП «Щелковский биокомбинат» - «Ветеринарная биотехнология настоящее и будущее» 20-23 сентября, 2004. - С. 187-188. 5 . Коллинз, У.П. Новые методы иммуноанализа У.П. Коллинз – Москва: «Мир», 1991. - С. 117-121. 6 . Хамадеев, Р.Х. Хламидиозы: совершенствование диагностики, мер борьбы и специфической профилактики / Р.Х. Хамадеев, Ф.М. Хусаинов, В.В. Евстифеев, Л.А. Барбарова, А.З. Равилов // Материалы международной научно-практической конференции – «Актуальные проблемы ветеринарной медицины» Т. I, 2526 сентября, 2003. - С 188-192. 7 . Хамадеев, Р.Х. Хламидиозы рогатого скота и свиней: автореф. дис. … докт. вет. наук: 16.00.03 / ХамадеевРифнурХазиевич - Казань, 1991. - 40 с. 8 . Щербань, Г.П. Хламидиоз свиней. Хламидиоз сельскохозяйственных животных / Г.П. Щербань. - М.: Колос, 1984. - 54 с. 9 . Donn, А., Jones G.E., Ruiu A., Ladu M., Machell J., Stancanelli A. Serological diagnosis of chlamydial abortion in sheep and goat: comparison of the complement fixation test and enzyme-linked immunosorbent assay employing solubilised proteins as antigen // Veterinary microbiology an infectional journal 1997. - P.27-36.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИСПЫТАНИЯ «НАБОРА ПРЕПАРАТОВ ДЛЯ ДИАГНОСТИКИ ХЛАМИДИОЗА СВИНЕЙ МЕТОДОМ ИММУНОФЕРМЕНТНОГО АНАЛИЗА»

Евстифеев В.В Резюме

В статье изложены результаты испытания «Набора препаратов для диагностики хламидиоза свиней методом иммуноферментного анализа» в условиях научноисследовательской и производственных ветеринарных лабораторий. Приведены результаты сравнительных исследований в РСК и ИФА 995 проб сывороток крови свиней из 30 неблагополучных по хламидиозу хозяйств РФ.

Установлено, что компоненты испытанной тест-системы обладают специфичностью, высокой активностью и позволяют эффективно проводить диагностические исследования поголовья свиней на хламидиоз.