Результаты исследования рубцового содержимого овец и крупного скота для выяснения носительства Fusobacterium necrophorum

Некробактериоз – инфекционная болезнь многих видов домашних и диких млекопитающих животных , а так же птиц , характеризующаяся гнойно - некротическими поражениями кожи , слизистой оболочки , внутренних органов и конечностей . Как правило , некробактериоз носит хронический характер , спорадически обостряясь при ослаблении общей резистентности организма животных .

Этиология некробактериоза до настоящего времени остается предметом дискуссий . По данным многих отечественных и зарубежных исследователей существенная роль в возникновении некробактериоза отводится Fusobacterium necrophorum и Dichelobacter nodosus - анаэробным токсинообразующим микроорганизмам , обитающимся в рубцовом содержимом жвачных животных .

В литературных данных Fusobacterium necrophorum - во внешную среду выделяется со слюной , жвачкой , мочой и фекалиями больных . Заражение – происходит по типу раневой инфекции через поврежденную кожу или слизистые оболочки .

Возникновение некробактериоза связано с значительным ослаблением резистентности организма животных , погрешностей в содержании и кормлении животных . При нарушении рациона кормления pH рубцового содержимого и количество в нем ацетата падает с одновременным увеличением содержанием лактата и пропионата . Это провоцирует кислотное повреждение защитного слоя стенки рубца , а микротравмы , наносимые частицами корма , обуславливают колонизацию слизистой преджелудка интенсивно размножающиимся фузобактериями . При проникновение их через слизистую в кровь происходит формирование резервуара фузобактерий в печени и последующее распространенние процесса по организму .

В зависимости от состояния животного , вирулентности возбудителя и сопутствующей микрофлоры гнойно некротические очаги возникают во внутренних органах и коже .

Целью наших исследований являлось изучить содержимое рубца здоровых и с клиническим проявлением некробактериоза с признаками поражения конечностей жвачных животных для установления носительства Fusobacterium necrophorum.

Материалы и методы. Для эксперементов с целью определения наличия Fusobacterium necrophorum в рубцовом содержимом были отобраны по 5голов клинически здоровых овец и коров от которых взяли по 5 проб с каждой, и 15 голов коров с средней степенью проявления некробактериоза. Диагноз подтвержден выделением Fusobacterium necrophorum с пораженной конечности. От каждого животного брали по 3 пробы рубцового содержимого при помощи зонда. Для того чтобы не было затруднений при взятии желудочного содержимого у овец им предварительно выпаивали по 500 мл физиологического раствора. Содержимое рубца брали в стерильную посуду. Полученный материал осаждали путем центрифугирования 3000 оборотов – 5 минут и забирали надосадочную жидкость. Для посевов использовали среду Кита- Тароцци, МПА, МПБ, глюкозно-крояной агар и теоглюколевую среду. Предварительно из надосадочной жидкости делали мазки, которые окрашивали по Грамму и микроскопировали. Посевы выдерживали в анаэростате в течение 24-72 часов. В последующем из чашек Петри и среды Китта – Тароцци готовили мазки и окрашивали по Грамму.

Параллельно овцам ставили ПЦР - с целью выявления ДНК Fusobacterium necrophorum.

Результаты исследования . После посева содержимого рубца овец и коров на среде Китта – Тароцци через 24-48 ч регистрировали появление мути и хлопьевидного осадка на дне пробирки . При микроскопии мазков из посевом рубцового содержимого овец обнаружили наличие кластридий , стафилококков , диплококков и разных видов не идентифицированных палочек .

При пересеве на плотные питательные среды наблюдали рост аналогичных бактерий .

При пересеве выросших в среде Китта - Тароцци на теоглюколевую среду и в течение 24 часовой экспозиции газообразование не наблюдалось . Исследованием содержимого рубца овец ПЦР анализом наличия бактерий Fusobacterium necrophorum также не обнаружено .

В последующих экспериментах провели бактериологическое исследования содержимого рубца клинически здоровых коров и коров с клиническими проявлением некробактериоза средней степени поражения .

Посевом проб рубцового содержимого здоровых коров в среду Кита - Тароцци , теоглюколевую среду , кровяной МПА с добавлением 0,5% глюкозы и ПЦР – анализом бактерии Fusobacterium necrophorum не обнаруживали .

При исследовании рубцового содержимого коров с клиническим проявлением некробактериоза в 2- х пробах из 15- ти бактериологическим исследованием и постановкой ПЦР обнаружен возбудитель некробактериоза , дающий положительную биопробу на кроликах и белых мышах ( рис 1 и 2).

При микроскопии мазков ( рис -1) из этих проб обнаруживали тонкие нити и клубочки из этих нитей . При подкожном введении в область основания ушной раковины кроликам суспензии бактерий выращенных в среде Кита – Тароцци на 4-6 сутки образовался воспалительный очаг с некрозом тканей . При посеве из очага воспаления на среду Кита - Тароцци получена чистая культура Fusobacterium necrophorum.

• 1.    F.necrophorum в рубцовом содержимом у коров

  

• 2.    Результаты исследования ПЦР

1     2    3    4      5      6     7    8     9    10 11 1 2 13    14 15

• 1.    К - отрицательный контроль ПЦР

• 2.    3-5 – Образцы , в которых обнаружена ДНК –F.necroforum

• 3.    2,4,6- по 15 – образцы , в которых ДНК - F.necroforum не обнаружена .

Заключение . Анализ результатов проведенных исследований свидетельствует , что в рубцовом содержимом клинических здоровых животных бактерий Fusobacterium necrophorum бактериологическим методом и ПЦР – анализом не обнаружены . При клиническом проявлении некробактериоза с признаками поражения дистальной части конечностей возбудитель обнаруживается в очаге поражения конечностей и в рубцовом содержимом , что свидетельствует о генерилизации инфицированного процесса в организме больных животных .

ЛИТЕРАТУРА : 1. Самоловов , А . А . Некробактериоз животных . / А . А . Самоловов //- Новосибирск 1993. – С .56-58. 2. Инфекционные болезни животных // Справочник . -1987. – с 183-185. 3. Лопатин , С . В .

Оптимизация системы контроля эпизоотического процесса некробактериоза крупного рогатого скота / С . В . Лопатин // Автореферат . Новосибирск , 2006. -20 с .

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ РУБЦОВОГО СОДЕРЖИМОГО ОВЕЦ И КРУПНОГО СКОТА ДЛЯ ВЫЯСНЕНИЯ НОСИТЕЛЬСТВА FUSOBACTERIUM NECROPHORUM

Потехина Р . М ., Макаев Х . Н ., Фаизов Т . Х ., Мухамметшин Н . А .

Резюме

Происследовали рубцовое содержимое здоровых и с клиническим проявлением некробактериоза с признаками поражения конечностей жвачных животных для установления носительства Fusobacterium necrophorum.

PAUNCH CONTENT INVESTIGATION RESULTS IN SHEEP AND CATTLE FOR STUDING FUSOBACTERIUM NECROPHORUM CARRIERS

Potehina R.M., Makayev Kh.N., Faizov T.H., Mukhammetshin N.A.