Роль полиморфных вариантов HLA-DRB1* в развитии врожденных пороков сердца

ВПС являются наиболее распространенными среди всех врожденных дефектов и аномалий развития плода и новорожденного, а также одной из главных причин инвалидизации и смертности в детском возрасте [1]. ВПС относят к многофакторным заболеваниям, на развитие которых оказывают влияние как экзогенные, так и эндогенные факторы. Изучение составляющих данного заболевания является актуальным направлением медицины и биологии.

Известно, что реализация внутриутробного развития плода проходит за счет адекватной иммуно-нейроэндокринной перестройки матери [2], поэтому важно отметить роль генов главного комплекса гистосовместимости человека (major histocompatibility complex – MHC), белковые продукты которых играют важную роль в иммунной системе как матери, так и ребенка.

Известно, что в локусе MHC II класса находятся гены иммунного ответа, которые определяют характер, силу и качество иммунного реагирования на все антигены экзо-и эндогенного происхождения. Молекулы MHC представлены на клеточной мембране лейкоцитов, и у человека MHC обозначается как HLA – human leukocyte antigen [3]. Основной функцией данных структур является участие в иммунных реакциях: распознавание чужеродного антигена, представление его иммунокомпетентным клеткам, а также участие в формировании антиген-специфичес-кой иммуносупрессии. HLA появляется на клетках плода и плаценты в ранние сроки эмбриогенеза. Показано, что формирование и вынашивание беременности рестрик-тировано распознаванием материнским иммунным микроокружением аллоантигенов MHC (наследуемых от отца) на оплодотворенном яйце и эмбрионе [4]. Помимо всего этого, HLA комплекс отвечает за поддержание генетического разнообразия человека как в перинатальном, так и в постнатальном периоде. Система HLA имеет несколько локусов, определяющих предрасположенность или устойчивость к той или иной патологии. Основные маркеры расположены в локусе HLA-DR, который имеет

463 аллельных варианта [5]. HLA-DRB1 – ген, кодирующий молекулы HLA, располагается на коротком плече 6-й хромосомы в положении 21.3 и обладает высокой по-лиморфностью. На сегодняшний день описано 14 групп аллелей HLA-DRB1, ассоциированных с некоторыми аутоиммунными заболеваниями, а также с репродуктивными нарушениями как у женщин, так и у мужчин [6, 7]. Помимо этого данные гены также принимают участие в патогенезе заболеваний.

На сегодняшний день нет данных о вкладе гена HLA-DRB1* в развитие ВПС, но есть небольшое количество исследований, посвященных изучению участия данного гена в патогенезе других заболеваний. Таким образом, лификатора DT-96 (ДНК–технология, Россия) в соответствии с протоколом производителя. Контроль качества генотипирования проводили посредством повторного генотипирования 10% образцов. Статистическую обработку данных проводили при помощи пакета программ STATISTICA 10.0. Анализ гендерно-возрастных характеристик проводили при помощи описательных статистик [медиана (25 и 75 процентили)]. Равновесие Харди-Вайнберга определяли при помощи критерия хи-квадрат Пирсона. Для оценки риска вычисляли относительный риск (RR) и 95%-й доверительный интервал (CI) для RR. Различия считали статистически значимыми при p<0,05.

можно сделать вывод о том, что изучение влияния HLA-DRB1 * на риск развития ВПС является актуальным, поскольку нет единого мнения о влиянии того или иного фактора на возникновение ВПС.

Цель исследования: определение роли полиморфных вариантов HLA-DRB1* в развитии ВПС.

Материал и методы

Исследование проводили на базе ФГБНУ “Научно-исследовательский институт комплексных проблем сердечнососудистых заболеваний” (Кемерово), оно было одобрено локально-этическим комитетом НИИ. Все участники эксперимента подписали информированное согласие на участие. В исследуемую группу были включены 97 женщин и 59 мужчин, имеющих детей с ВПС. Контрольную группу составили 54 женщины и 98 мужчин, которые имели детей без ВПС и были сопоставимы с опытной группой по возрасту. Средний возраст женщин опытной и контрольной групп составил 26 (18–48) [Ме (25–75% процентили)] лет и 23 (17–35) года соответственно, мужчин – 27 (19–53) и 25 (18–40) лет соответственно. Пять миллилитров цельной периферической венозной крови собирали в пробирку с ЭДТА. Геномную ДНК выделяли из цельной крови методом фенол-хлороформной экстракции по протоколу.

Определяли частоту встречаемости 14 аллелей гена HLA-DRB1 ( HLA-DRB1*01; HLA-DRB1*03; HLA-DRB1*04; HLA-DRB1*07; HLA-DRB1*08; HLA-DRB1*09; HLA-DRB1*10; HLA-DRB1*11; HLA-DRB1*12; HLA-DRB1*13; HLA-DRB1*14; HLA-DRB1*15; HLA-DRB1*16; HLA-DRB1*17 ).

Генотипирование проводили методом полимеразно-цепной реакции с учетом результатов в режиме реального времени наборами компании “ДНК–технология”, при помощи детектирующего амп-

Таблица 1

Сравнительная характеристика частот распределения аллелей HLA-DRB1 у женщин

Примечание: n – количество аллелей, p – уровень значимости, RR – относительный риск.

Результаты и обсуждение

В результате исследования установлено, что у женщин, имеющих детей с ВПС, в генотипе значимо чаще встречались аллели HLA-DRB1*03 (р=0,0069) и HLA-DRB1*11 (р=0,0036) гена HLA-DRB1 по сравнению с женщинами контрольной группы (табл. 1). Величина относительного риска (RR) аллелей HLA-DRB1*11 и HLA-DRB1*03 составила 4,31 и 5,56 соответственно. Полученные результаты свидетельствуют о том, что данные аллели ассоциированы с повышенным риском развития ВПС.

Напротив, аллель HLA-DRB1*12 имел значение RR, равное 0,28, что говорит о протективной роли данного аллеля в отношении данной патологии.

При анализе аллелей у мужчин было показано, что значимо чаще встречались только два аллеля из всех представленных, а именно : HLA-DRB1*03 (р=0,0001) и HLA-DRB1*07 (р=0,0006), таблица 2. Показатели относительного риска (RR) у данных аллелей были равны 38,03 и 4,53 соответственно, что указывает на предрасполагающую роль этих аллелей в развитии ВПС.

Полученные в нашем исследовании данные о взаимосвязи аллелей HLA-DRB1 c формированием ВПС не имеют аналогов в современной научной литературе. В предыдущих исследованиях [8, 9] было показано, что аллель HLA-DRB1*03 ассоциирован с аутоиммунными заболеваниями, такими как рассеянный склероз (OR=2,8; Pcor=0,0029) [10], системная красная волчанка, сахарный диабет и тиреоидит Хашимото [11]. Ряд авторов [12] показали, что аллель HLA-DRB1*11 был ассоциирован с тиреоидитом Хашимото и ювенильным ревматоидным артритом. На сегодняшний день есть данные о том, что аллель HLA-DRB1*07 вносит вклад в развитие сахарного диабета I типа и болезни Грейвса [13].

При этом отдельные авторы показывают как положительную (RR=9,2), так и отрицательную (RR=0,9) связь аллелей HLA-DRB1*04 и HLA-DRB1*01 с сахарным диабетом I типа, спонтанными абортами и привычным невынашиванием [5, 14]. Другие исследователи доказывают ассоциации аллеля HLA-DRB1*15 с развитием рассеянного склероза, злокачественной анемии и системной красной волчанки [15, 16].

Ограничение исследования. Данное исследование включает ограниченную выборку женщин и мужчин, как имеющих детей с ВПС, так и контрольной группы. Полученные в пилотном исследовании результаты не могут с высокой степенью достоверности быть перенесены на всю популяцию в целом. Тем не менее, полученные данные, подтвержденные статистическими методами, являются социально значимыми для региона, что определяет необходимость расширения контрольной и опытной групп.