Роль тучных клеток в прогрессировании контрактуры Дюпюитрена

Контрактура Дюпюитрена (ладонный фасциальный фиброматоз) относится к фибропролиферативным заболеваниям, которое поражает не только ладонный апоневроз, но и все виды соединительных тканей ладони [1]. Формирование фиброматозных узлов и хорд [2] вызывает ограничение разгибательных движений, а затем и стойкие сгибательные контрактуры суставов пальцев, затрудняющие тонкую работу и социальную активность пациентов [3].

На протяжении сотен лет заболевание хорошо знакомо хирургам, предложены многочисленные методики его лечения, каждая из которых имеет сильные и слабые стороны [4, 5]. Однако не решены

проблемы рецидивов [6, 7] и прогнозирования течения заболевания у разных категорий пациентов [8] с целью адекватного выбора стратегии лечения. Несмотря на многочисленные исследования генетической предрасположенности [9, 10] и эпигенетических факторов [11, 12], этиопатогенез фиброматоза раскрыт не в полной мере вплоть до настоящего времени [13].

На сегодняшний день общепризнана концепция фасциального фиброматоза как миофибробластного заболевания [14, 15], но миофибробласты не являются специфичными для него [16]. Хотя инициирующий фактор наблюдающейся при фиброматозе аномальной

пролиферации фибробластов и их трансдифференцировки в миофибробласты неизвестен, современные исследования сосредоточены на TGF- β , IL-1 β и VEGF как потенциальных терапевтических мишенях в лечении болезни Дюпюитрена [17, 18]. Признавая ведущую роль TGF- β , другие авторы продемонстрировали усиленную пролиферацию миофибробластов в культурах тканей от пациентов с болезнью Дюпюитрена, стимулированную секрецией тучными клетками фактора IL-13 [19]. Между тем сведения о содержании тучных клеток в ладонной фасции пациентов с контрактурой Дюпюитрена скудны и противоречивы. При сравнении 10 тканевых образцов ладонной фасции от пациентов с идиопатическим карпальным синдромом с 20 аналогичными образцами от пациентов с контрактурой Дю-

пюитрена установлено 12-кратное повышение численности тучных клеток в ладонной фасции при болезни Дюпюитрена [20]. Однако при исследовании операционного материала от 100 пациентов с болезнью Дюпюитрена тучные клетки были описаны как спорадически встречающиеся вблизи кровеносных сосудов [21]. При этом в доступной литературе мы не встретили данных о содержании и морфофункциональном статусе тучных клеток в патологически изменённой ладонной фасции пациентов в зависимости от степени контрактуры Дюпюитрена.

Цель – изучить изменения численности, локализации и дегрануляционной активности тучных клеток в ладонном апоневрозе при контрактуре Дюпюитрена разной степени выраженности.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Выполнено патогистологическое исследование операционного материала – ладонный апоневроз 52 пациентов (49 мужчин и 3 женщины) с контрактурой Дюпюитрена (возраст 35-78 лет, средний возраст – 59,12 ± 1,25 года).

Критерии включения – контрактура Дюпюитрена 1-2 степени (группа 1, n = 16) и 3-4 степени (группа 2, n = 36) по классификации R. Tubiana [22] с гистологически подтверждённым диагнозом фасциального фиброматоза. Критерии исключения – повреждения кисти, политравма в анамнезе.

Исследование выполнено в соответствии с этическими нормами Хельсинкской декларации (пересмотренной в октябре 2013 года), одобрено комитетом по этике (протокол № 4 (68) от 11.11.2020). От всех пациентов получено добровольное информированное согласие на публикацию результатов исследования без раскрытия личности.

Операционный материал – фрагменты патологически изменённого ладонного апоневроза фиксировали в смеси растворов глутарового альдегида и параформальдегида на фосфатном буфере с добавлением пикриновой кислоты, постфиксировали в 1 % растворе оксида осмия (VIII) и заливали в аралдит, полутонкие срезы изготавливали на ультратоме "Nova" LKB (Швеция). Учитывая полианионные свойства молекулы гепарина связываться с катионными красителями, для визуализации тучных клеток полутонкие срезы окрашивали полихромным красителем – метиленовым синим и ос-

новным фуксином [23]. Светооптическое исследование и оцифровку микропрепаратов осуществляли с помощью микроскопа «AxioScope.A1» и цифровой камеры «AxioCam» (Carl Zeiss MicroImaging GmbH, Германия). Количественные данные получены с использованием программного обеспечения «Zenblue» (Carl Zeiss MicroImaging GmbH, Германия). В полноцветных изображениях полутонких срезов при увеличении 1000× определяли численную плотность тучных клеток (N) в поле зрения и их площадь (S, мкм2), анализировали в среднем 20 полей зрения от каждого случая. Дегрануляцию (секреторную активность) тучных клеток определяли полуколичественным методом, предложенным Д.П. Линднер с соавторами (1980), путем расчета индекса дегрануляции (ИДГ):

ИДГ = A × 0 + Б × 1 + В × 2 + Г × 3/n , где А – неактивные клетки; Б – слабо дегранулирующие клетки; В – клетки с умеренной дегрануляцией; Г – клетки с сильной дегрануляцией; n – общее число клеток [24].

Статистическую обработку данных выполняли в компьютерной программе Attestat, версия 9.3.1 (сертификат о регистрации в Роспатенте № 2002611109). Количественные данные представляли в виде медиан и квартилей (Me (Р25-Р75)), так как для некоторых выборок гипотеза о нормальности была отклонена. Для проверки статистических гипотез о различиях при попарном сравнении групп между собой применяли критерий Манна – Уитни.

РЕЗУЛЬТАТЫ

При светооптическом исследовании полутонких срезов тучные клетки в обеих группах наблюдались преимущественно в рыхлой соединительной ткани вблизи сосудов, а также нервных фасцикул прилежащей к ладонной фасции фиброзно изменённой гиподермы (рис. 1 и 2, а, б).

В группе 2 чаще, чем в группе 1 регистрировали расположение тучных клеток вдали от кровеносных

сосудов в межклеточном веществе среди контрактиль-но изменённых коллагеновых волокон плотной соединительной ткани (рис. 2, в и г).

Гистоморфометрическое исследование (табл. 1) выявило, что в группе 2 по сравнению с группой 1 увеличены медиана численной плотности тучных клеток на 33,79 %, медиана площади тучных клеток – на 48,40 % и индекс дегрануляции тучных клеток – на 94,68 %.

Рис. 1. Фрагменты полутонких срезов тканевых образцов от пациентов с 1-2 степенью контрактуры Дюпюитрена. Локализация тучных клеток в рыхлой соединительной ткани вблизи сосудов. Окраска метиленовый синий – основной фуксин. Увеличение – ×1000

Рис. 2. Фрагменты полутонких срезов тканевых образцов от пациентов с 3-4 степенью контрактуры Дюпюитрена. Расположение тучных клеток в рыхлой соединительной ткани вблизи сосудов и нервных фасцикул (а, б), среди контрактильно изменённых коллагеновых волокон плотной соединительной ткани (в, г). Окраска метиленовый синий – основной фуксин. Увеличение – ×1000

Таблица 1

Морфометрические характеристики тучных клеток в ладонном апоневрозе при контрактуре Дюпюитрена

Параметр	Группа 1 (n = 16)                 Группа 2 (n = 36)		U, р
	Me (Р25-Р75)
Численная плотность (N, mm-2)	1,45 (1,25-2,16)	1,95 (1,5-2,57)	U = 386,5; p = 0,05
Площадь (S, мкм2)	28,16 (19,57-35,52)	41,79 (31,28-50,94)	U = 456; p = 8 × 10-4
Индекс дегрануляции (ИДГ)	0,94 (0,63-1,16)	1,83 (1,64-2,15)	U = 571,5; p = 1 × 10-8

Примечание: Me – медиана; Р25-Р75 – процентили; U – значения критерия Манна – Уитни, различия значимы при р ≤ 0,05.

ДИСКУССИЯ

Многочисленные исследования на животных и людях показали, что тучные клетки промотируют формирование рубцов; в фетальных тканях численность и активация тучных клеток снижена – соответственно раны заживают без образования рубца [25, 26]. При моделировании посттравматических контрактур у экспериментальных животных установлено значительное повышение содержания миофибробластов, тучных клеток и нейропептидов в суставной капсуле [27]. Подобно заживлению кожных ран, такие заболевания соединительной ткани, как болезнь Дюпюитрена или болезнь Пейрони, могут быть затронуты воспалением [28, 29], однако вклад тучных клеток в процесс дегенерации соединительной ткани при этих заболеваниях практически не изучен.

T.E. Schubert с соавторами [20] обнаружили 12-кратное увеличение количества тучных клеток при контрактуре Дюпюитрена по сравнению с нормальной тканью фасции, отмечена их ассоциация со спраутин-гом ноцицептивных волокон, однако C. Mayerl et al. в материале от 100 пациентов [21] выявили спорадические тучные клетки вблизи кровеносных сосудов.

В нашем исследовании впервые на достаточном клиническом материале установлены существенные качественные и количественные отличия тучных клеток в зависимости от степени контрактуры Дюпюитрена. Типичная локализация тучных клеток вблизи кровеносных сосудов отражает их участие в регуляции сосудистого гомеостаза и ангиогенеза в норме [30] и определяет вазогенные факторы патогенеза ладонного фасциального фиброматоза [31]. Для пациентов с тяжёлой (3-4) степенью контрактуры Дюпюитрена помимо паравазального расположения тучных клеток

характерна их локализация вдали от нервов гиподермы и кровеносных сосудов в межклеточном веществе плотной соединительной ткани среди контрактильно изменённых коллагеновых волокон, что указывает на их участие в ремоделировании внеклеточного матрикса, при этом численная плотность, площадь и индекс дегрануляции тучных клеток значительно повышены по сравнению с аналогичными гистоморфометриче-скими параметрами группы пациентов с 1-2 степенью контрактуры. Таким образом, наряду с изменением типичной локализации тучных клеток у пациентов с контрактурами тяжёлой степени получены объективные доказательства увеличения их численности, активации и дегрануляции.

Известно, что активация и дегрануляция тучных клеток промотирует экспериментальный почечный фиброз [32], клинически выявлена корреляция численности тучных клеток с выраженностью лёгочного фиброза [33], установлена их роль в патогенезе фиброза печени [34].

Доклинические исследования выявили благоприятное дозозависимое влияние стабилизатора мембран тучных клеток кетотифена на выраженность фиброза суставной капсулы и биомеханические параметры посттравматической контрактуры, опосредование снижением содержания миофибробластов, тучных клеток и P-реактивных нервных волокон в суставной капсуле [35, 36]. Поскольку данный препарат более 40 лет применяется в лечении аллергических заболеваний, перспективны клинические исследования его влияния на течение контрактуры Дюпюитрена у пациентов с сопутствующими аллергическими заболеваниями.

ВЫВОДЫ

Полученные результаты свидетельствуют о роли пюитрена и расширяют представления о потенциаль-тучных клеток в прогрессировании контрактуры Дю- ных терапевтических мишенях.