Содержание метаболитов оксида азота II (N0) в плазме крови у крыс в разные фазы полового цикла

Одним из значительных достижений ученых стало открытие биорсгулятор-ных свойств эндогенного оксида азота (II)NO. Оно явилось революцией в биологии и медицине, так как стало известно о совершенно новом типе передачи информации в организме, появилась возможность инновационного подхода в лечении огромного количества заболеваний человека и животных. Выяснилось, что оксид азота (II) является универсальным биологическим регулятором множества процессов в организме, влияя на тонус полых ор ганов брюшной полости, состояние бронхов и альвеол легких, реологические свойства крови, иммунные процессы, нервно-мытпечную передачу'. Оксид азота (II) проявляет противовоспалительную и антиопу-холевую активность, влияет на репродуктивную систему и высшую нервную деятельность человека, и животных. R. F. Furchgott и J. V. Zowadcki в 1980 году выяснили, что оксид азота (И) содержится практически во всех тканях живого организма. Его свойства в настоящее время продолжают активно изучаться и получен- ные сведения берутся на вооружение фармакологами и клиницистами различных специальностей. Также становится очевидным неоднозначность и разнонаправ-ленность влияния оксида азота (II). Эффект воздействия определяется концентра-цией оксида азота (II) [1,8,11]. Ненадлежащая регуляция уровня оксида азота (II) приводит к проявлению патологий, таких как нарушение функций сердечно-сосудистой системы, нейродегенерация, артрит, астма и септический шок и т. д.

Известно, что оксид азота (И) принимает участие в регуляции репродуктивной системы у самок и самцов. В гипофизе он активирует секрецию лютеинизирующего гормона [11]. В свою очередь половые гормоны, эстрогены и андрогены стимулируют продукцию оксида азота (II), а прогестерон через свои рецепторы снижает уровень экспрессии eNOS [9]. Оксид азота (II) также индуцирует овуляцию у крыс [13]. Ввиду его многогранной роли в регу ляции процессов размножения в организме он был назван половым газом [11].

Исходя из вышеизложенного вопрос изучения возможной роли оксида азота (II) в регуляции полового цикла млекопитающих остается актуальным.

Цель исследования - изучить содержание метаболитов NO в плазме крови у крыс в разные фазы полового цикла.

Материал и методы исследований. Работа выполнена на базе кафедры физиологии ФБГОУ ВО Казанская ГАВМ. Объектом исследования служили самки крыс породы Wistar массой тела 250-295 г. Были созданы 4 группы животных. У каждой определяли фазу полового цикла, исследуя влагалищные мазки. Ежедневно с 8 до 9 утра собирали вагинальные секреты пластиковой пипеткой заполненной физиологическим раствором (NaCl 0,9 %), вставив наконечник во влагалище крысы. Вагинальную жидкость помещали на предметное стекло. Окраску мазка производили по методу Романовского-Гимза.

Рисунок-1 Микрофотографии вагинального мазка крыс при: (А) проэструсе, преимущественно состоящей из зародышевых эпителиашных клеток; (Б) эструсе с явными поверхностными безъядерными клетками; (В) метаэструсе, состоящей из трех типов клеток, лейкоцитов, зародышевых эпителиальных клеток; и (Г) диэструсе, состоящей преимущественно из лейкоцитов. Где, 1 - эпителиальные клетки, 2 - лейкоциты, 3 - поверхностные безъядерные клетки.

Мазок фиксировали этиловым спиртом в течение 5-15 мин. Готовый препарат рассматривали под микроскопом при 10-и, 40-кратном увеличении. По картине влагалищного мазка определяли фазы полового цикла. Продолжительность полового цикла крыс делает их идеальным объектом для изучения изменений, происходящих в течении полового цикла. Цикл длится четыре дня и включает в себя фазы проэструса, эструса, метаэструса и диэструса.

Фаза проэструса, или подготовительная, характеризуется кровянистыми выделениями, иногда обильными. Картина влагалищного мазка в начале фазы характеризуется большим числом округлой формы эпителиальных клеток с довольно крупными ядрами (рисунок 1а). В фазу эструса выделения из влагалища почти бесцветны или бледно-розового цвета. На препарате влагалищного мазка подавляющее большинство клеточных элементов представлено чешуйками, плоскими поверхностными эпителиальными клетками. У них нет видимого ядра, цитоплазма является зернистой (рис 1 б). В фазу мэтаэст-руса выделения из влагалища еще могут быть, как правило, они бесцветны, но могут быть и бледно-розового цвета. Влагалищный мазок демонстрирует незначи тельное количество молодых эпителиальных клеток, округлых с крупными и преобладанием лейкоцитов (рис 1в). В фазу диэструса мазок состоит преимущественно из лейкоцитов (рис 1г).

После определения фазы полового цикла брали кровь. Взятие крови у крыс производили из хвостовой вены. Об уровне содержания оксида азота (II) в крови судили по суммарной концентрации нитрат- и нитрит-анионов в плазме крови, которую определяли путём восстановления нитратов до нитритов однократной навеской цинковой пыли, обработанной аммиачным комплексом сульфата меди, с последующим фотометрическим определением нитритов с помощью реактива Грисса при длине волны 520,0 нм на КФК -3-10 [3]. Статистическую обработку результатов эксперимента проводили с использованием критерия t-Стьюдента, статистически значимое считали различия при уровне (р<0,05).

Результаты исследований. Ранее было установлено, что содержание нитрат-и нитрит-анионов в плазме крови у самок крыс в среднем составляет 35,57±2,58 мкмоль/л. Было установлено, что система NO в разных фазах полового цикла в плазме крови у крыс имеет разную активность.

Таблица 1 - Содержание метаболитов оксида азота (II) в плазме крови крыс в зависим ости от фазы п о лового цик ла                   ____

Примечание: * - достоверно по сравнению с контрольной группой (р<0,05)

В фазах проэструса и эструса в плазме крови наблюдается повышение концентрации нитрат и нитрит анионов на 1,3 % и 2,6 % соответственно, тогда как в фазах мэтаэструса и диэструса наблюдается снижение концентрация этих же анионов.

Результаты наших исследований позволили сделать следующие выводы. Содержание метаболитов оксида азота (II) в плазме крови самок крыс зависит от фазы полового цикла. Данные литературы свидетельствуют о том, что в фазах эструс и проэструс происходят процессы с высоким влиянием оксида азота (II). Наличие оксида азота (II) в фолликулярной жидкости подтверждено у нескольких видов жи-вотных[10]. Также оксид азота (II) участвует в контроле секреции гонадотропина, который, в свою очередь, известен как ключевой регулятор конечных стадий развития фолликулов [10]. В настоящий момент эстрогены считаются наиболее изученными регуляторами eNOS [9]. Кроме того, результаты недавних исследований свидетельствует о вовлеченности оксида азота (II) в овуляторный процесс. Местное применение ингибиторов eNOS подавляет процесс овуляции у крыс, что объясняется его высоким содержанием [1]. У человека eNOS была обнаружена в эпителии эндометрия во время менструации. Исходя из этого можно предположить, что оксид азота (II) может участвовать в инициировании и поддержании менструального кровотечения и релаксации миометрия во время менструации [14]. В фазу метаэст-руса и диэструса на месте лопнувшего фолликула под влиянием ЛГ развивается желтое тело, которое начинает вырабатывать прогестерон. Прогестерон через рецепторы глюкокортикоидов снижает уровень экспрессии eNOS [9]. Но, в отличие от эстрогена, его роль до конца не изучена. Многие факторы свидетельствуют об участии оксида азота (II) в регуляции развития и функционирования желтого тела, но эти данные не однозначны и противоречивы П]

Заключение. Исходя из вышеизложенного следует: 1 .Изменения активности системы оксид азота (II) в плазме крови зависит от фазы полового цикла. 2.Максимальная активность системы оксида азота (II) отмечается в фазе проэструс и эструс. При глубоком исследовании, определение количества метаболитов оксида азота может способствовать созданию методов диагностики заболеваний половой системы, а также может быть применено в процессах воспроизводства для более точного определения времени оплодотворения.

Резюме

В статье изложены результаты изучения содержания стабильных метаболитов оксида азота И (NO) в плазме крови у крыс в разные фазы полового цикла. Установлено, что система N0 в разных фазах полового цикла в плазме крови у крыс имеет разную активность. Максимальная активность системы оксида азота (П) отмечается в фазе проэструс и эструс.