Сосудистый контроль над агрегационными свойствами форменных элементов крови у телят-молочников

Фаза молочного питания является у продуктивных животных важным этапом совершенствования многих физиологических механизмов [1]. В их числе можно назвать становление эффективного сосудистого контроля над гемостатическими процессами, протекающими в крови [2] и имеющими большую физиологическую значимость для обеспечения успешной гемоциркуляции, особенно в сосудах наименьшего калибра [3]. В литературе уделено определенное внимание сосудисто-тромбоцитарным взаимодействиям у продуктивных животных, являющимся основой процесса гемостаза [2,4]. Вместе с тем, несмотря на большую значимость для реологии крови у молодняка крупного рогатого скота, в т.ч. в раннем онтогенезе, дезагрегационный контроль сосудистой стенки над составляющими основную массу форменных элементов крови – эритроцитами и лейкоцитами изучен крайне недостаточно. В этой связи возникает большая практическая потребность определения состояния антиагрегационных свойств сосудов над основными форменными элементами крови как важного механизма, определяющего ее жидкостные свойства у телят в течение раннего онтогенеза, в том числе в фазу молочного питания [4,5]. Выяснение выраженности антиагрегационных возможностей сосудов у телят молочного питания в отношении эритроцитов, тромбоцитов и лейкоцитов позволит разработать их возрастные нормы, способные послужить отправной точкой при оценке их динамики на фоне коррекции состояния телят-молочников с различными заболеваниями [6]. В этой связи была поставлена цель – выяснить состояние антиагрегационных влияний сосудов на форменные элементы крови у телят в течение фазы молочного питания.

Материал и методы исследования.

Работа проведена в весенний период на 39 телятах черно-пестрой породы, взятых под наблюдение и обследованных на 11-е, 15-е, 20-е, 25-е и 30-е сутки жизни.

Уровень перекисного окисления липидов (ПОЛ) в плазме оценивался по содержанию тиобарбитуровой кислоты (ТБК)-активных продуктов набором «Агат-Мед» и ацилгидроперекисей (АГП). С учетом антиокислительной активности (АОА) жидкой части крови традиционными методами.

Антиагрегационные сосудистые свойства в отношении агрегации форменных элементов крови определяли по ее ослаблению в пробе с временной венозной окклюзией.

Агрегация эритроцитов до и после временной ишемии стенки сосуда определялась путем регистрации в камере Горяева количества агрегатов эритроцитов (КА), суммы эритроцитов в агрегате (СЭА) и количества свободных эритроцитов (КСЭ) [7]. У всех телят путем деления суммы всех эритроцитов в агрегатах на величину этой суммы на фоне временной венозной окклюзии рассчитывался индекс контроля сосудов над суммой эритроцитов в агрегате (ИКССЭА), в результате деления количества агрегатов без временной венозной окклюзии на их количество на фоне временной венозной окклюзии определяли индекс контроля сосудов над количеством эритроцитарных агрегатов (ИКСКЭА) и в ходе деления количества свободных эритроцитов на фоне временной венозной окклюзии на количество свободных эритроцитов без нее высчитывалась величина индекса контроля сосудов над количеством свободных эритроцитов (ИКСКСЭ).

Агрегацию тромбоцитов (АТ) определяли путем визуальной регистрации АТ [7] до и после венозной окклюзии с применением АДФ (0,5x10-4 М), коллагена (разведение 1:2 основной суспензии), тромбина (0,125ед/мл), ристомицина (0,8 мг/мл) и адреналина (5,0x10-6 М) в богатой тромбоцитами плазмы со стандартизированным количеством тромбоцитов 200x109 тр. Индекс антиагрегационной активности сосудистой стенки (ИААСС) выявляли при делении времени развития АТ после венозной окклюзии на время без нее.

Тормозящее влияние сосудов на агрегацию нейтрофилов в плазме, полученной после наложения манжетки против таковой без нее, оценивалось при регистрации их агрегации на фотоэлектроколориметре. Индукторами являлись лектин зародыша пшеницы 32 мкг/мл, конканавалин А – 32 мкг/мл и фитогемагглютинин – 32 мкг/мл. Рассчитывался индекс торможения сосудистой стенкой агрегации нейтрофилов (ИТССАН) путем деления величины агрегации нейтрофилов в плазме, полученной без манжетки на ее величину в плазме, взятой с наложением манжетки. Статистическая обработка результатов велась t-критерием Стьюдента.

Результаты исследований. У телят на протяжении всего наблюдения отмечена стабильно невысокая активность ПОЛ плазмы – содержание в ней АГП колебалось с 1,44±0,17 Д 233 /1 мл до 1,47±0,25 Д 233 /1 мл, ТБК-активных продуктов с 3,59±0,15 мкмоль/л до 3,64±0,28 мкмоль/л. Это сопровождалось неизменностью величины АОА плазмы, составляющей на 11-е сутки 32,5±0,38%, на 30-е 33,0±0,34%.

В течение фазы молочного питания у телят выявлена тенденция к повышению спонтанной агрегации эритроцитов, о чем судили по наклонности к увеличению СЭА (на 1,9%), нарастанию КА (на 2,4%) и понижению КСЭ (на 2,2%). В пробе с временной венозной окклюзией у телят в течение фазы молочного питания суммарное количество эритроцитов в агрегатах и число этих агрегатов осталось без динамики при незначительном увеличении числа свободных эритроцитов (на 1,1%), обеспечив тенденцию к повышению ИКССЭА, ИКСКЭА и ИКСКСЭ (табл.).

У наблюдаемых телят в течение фазы молочного питания отмечена тенденция к ускорению АТ как в интактной плазме, так и в плазме, полученной после временной венозной окклюзии. У наблюдаемых телят отмечено постепенное невыраженное усиление контроля стенки сосуда над АТ, что подтверждалось найденной тенденцией к увеличению ИААСС, достигших к 30 суткам жизни: для адреналина 1,68±0,004, для АДФ 1,69±0,003, для коллагена 1,64±0,005, для тромбина 1,56±0,005, для ристомицина 1,55±0,005 (табл.).

За фазу молочного питания у телят прослежена тенденция к усилению агрегации нейтрофилов. В пробе с временной венозной окклюзией их агрегация также имела наклонность к усилению в отношении всех испытанных индукторов, что обусловило тенденцию к повышению ИТССАН для лектина на 2,3%, для конканавалина А на 1,6%, для фитогемагглютинина на 4,0% (табл.).

Таблица - Сосудистый контроль над форменными элементами крови у телят молочного питания (n=39, M±m)

Параметры	Возраст, сут
	1-2	3-4	5-6	7-8	9-10
ИКССЭА	1,26±0,005	1,26±0,008	1,27±0,006	1,28±0,004	1,29±0,005
ИКСКЭА	1,16±0,002	1,16±0,004	1,17±0,009	1,18±0,004	1,18±0,006
ИКСКСЭ	1,21±0,010	1,22±0,008	1,23±0,013	1,25±0,014	1,25±0,010
ИААСС с АДФ	1,66±0,003	1,67±0,004	1,68±0,008	1,68±0,006	1,69±0,003
ИААСС с коллагеном	1,61±0,002	1,62±0,003	1,62±0,003	1,63±0,004	1,64±0,005
ИААСС с тромбином	1,53±0,004	1,53±0,002	1,54±0,006	1,55±0,003	1,56±0,005
ИААСС с ристомицином	1,51±0,002	1,52±0,004	1,53±0,003	1,54±0,006	1,55±0,005
ИААСС с адреналином	1,63±0,004	1,64±0,008	1,65±0,006	1,66±0,003	1,68±0,004
ИТССАН с лектином	1,25±0,002	1,26±0,004	1,26±0,003	1,27±0,004	1,28±0,005
Индекс торможения ИТССАН с конканавалином А	1,26±0,006	1,26±0,009	1,27±0,007	1,28±0,009	1,28±0,005
ИТССАН с фитогемагглютинином	1,19±0,003	1,20±0,004	1,21±0,006	1,23±0,005	1,24±0,006

Обсуждение. Агрегация форменных элементов крови оказывает существенное влияние на реологические свойства крови у продуктивных животных, в том чисчле у крупного рогатого скота в течение всего онтогенеза. Не являются в этом плане исключением и телята в фазу молочного питания [2,4]. Достаточно высокая у них АОА плазмы во многом обеспечивает ее стабильно невыраженную активность ПОЛ [1]. Выявленная у животных низкая интенсивность свободнорадикальных процессов в плазме не способна к альтерации мембран эритроцитов, тромбоцитов и лейкоцитов, способствуя тем самым их невысокой агрегабельности, ограничивающейся выраженной функциональной активностью эндотелиоцитов.

У телят в течение срока наблюдения отмечена тенденция к усилению агрегационной активности эритроцитов, значимо ослабляющейся под действием дезагрегантов в пробе с временной венозной окклюзией. Несомненно, нормальная агрегация эритроцитов у телят in vivo во многом поддерживается не только высокой дезагрегирующей способности сосудистой стенки, но и оптимальной электроотрицательностью поверхности эритроцитов за счет высокого количества на их мембране отрицательно заряженных протеинов [6]. Эффективный контроль над генерацией активных форм кислорода обеспечивает минимизацию оксидативных повреждений данных белков мембраны и глобулярных протеинов плазмы, способных связывать эритроциты между собой в уже образовавшихся агрегатах [7]. Выраженный контроль со стороны сосудистой стенки над агрегацией эритроцитов, видимо, имеет в своей основе функционально достаточную концентрацию в крови телят простациклина и NO, поддерживающих в красных кровяных тельцах оптимум активности аденилатциклазы и фосфодиэстеразы, обеспечивающих физиологическое соотношение в их цитоплазме количества циклического АМФ и Са2+.

Найденное активное торможение АТ в пробе с временной венозной окклюзией во многом связано с повышением чувствительности тромбоцитов к дезагрегирующим воздействиям со стороны сосудистой стенки на фоне тенденции к росту их восприимчивости к индукторам агрегации у телят в течение второй фазы раннего онтогенеза. Данное обстоятельство имеет в своей основе оптимальность выработки в эндотелии простациклина и NО при высокой чувствительности к ним рецепторов кровяных пластинок. Невыраженная АТ в ответ на ристомицин у телят была обусловлена неактивной выработкой в эндотелии сосудов фактора Виллебранда [8].

Невысокая, имеющая легкую тенденцию к повышению агрегация нейтрофилов, полученная у наблюдаемых телят, эффективно сдерживалась антиагрегационными воздействиями сосудов, сочетающимися с оптимумом состава гликопротеиновых рецепторов лейкоцитов и их чувствительности к лектинам, использованным в качестве индукторов. Найденная слабая тенденция к росту лектин- и конканавалин А-индуцированной агрегации нейтрофилов у животных молочного питания обеспечивалась тенденцией к усилению индуцированной фитогемагглютинином агрегации обеспечивалась легким нарастанием в их рецепторах участков гликопротеинов, содержащих bD-галактозу. При этом данные процессы эффективно ограничивались высокой выработкой в сосудах животных простациклина и NO, обеспечивая оптимум реологии крови.

Заключение. Для телят молочного питания свойственна тенденция к усилению агрегации форменных элементов крови, экспрессии рецепторов адгезии и которая адекватно сдерживается увеличением в их составе участков, содержащих N-ацетил-D-глюкозамин, N-ацетил-нейраминовую кислоту и маннозу. Выявленная тенденция к росту

увеличивающимся

с

дезагрегирующим контролем стороны сосудистой стенки.

возрастом над ними со

ЛИТЕРАТУРА: 1. Максимов В.И., Медведев И.Н., Парахневич А.В.

Особенности

антикоагуляционной и фибринолитической активности крови у здоровых поросят молочного питания // Ветеринария, зоотехния и биотехнология, 2014. – №1. – С.12-16. 2. Краснова Е.Г., Медведев И.Н. Антиагрегационная активность сосудов поросят молочного питания // Актуальные вопросы ветеринарной биологии, 2011. №2(10).– С.7-12. 3. Максимов В.И., Медведев И.Н. Оценка тромбоцитарных функций у телят и поросят в раннем онтогенезе // Ветеринария. –2008. –№11.– С.50-54. 4. Завалишина С.Ю. Активность сосудистого гемостаза у телят молочного питания // Доклады РАСХН, 2012. №4.– С.49-51. 5. Медведев И.Н., Завалишина С.Ю. Активность системы гемостаза у телят молочно-растительного питания // Доклады РАСХН, 2012.–№6.–С. 62-65. 6. Парахневич А.В., Медведев И.Н., Максимов В.И. Микрореологические характеристики эритроцитов у поросят в течение фазы молочного питания // Актуальные вопросы ветеринарной биологии, 2012. –№ 4 (16).– С.3-7. 7. Медведев И.Н., Завалишина С.Ю., Краснова Е.Г., Кутафина Н.В. Методические подходы к оценке агрегации и поверхностных свойств тромбоцитов и эритроцитов // Фундаментальные исследования, 2014. –№10-1. – С.117-120. 8. Кутафина Н.В., Медведев И.Н. Количественное определение фактора Виллебранда // Международный журнал прикладных и фундаментальных исследований, 2012.– №4. – С.72.

СОСУДИСТЫЙ КОНТРОЛЬ НАД АГРЕГАЦИОННЫМИ СВОЙСТВАМИ ФОРМЕННЫХ ЭЛЕМЕНТОВ КРОВИ У ТЕЛЯТ-МОЛОЧНИКОВ

Глаголева Т.И.

Резюме

Исследование выполнено на 39 здоровых телятах черно-пестрой породы, обследованных за фазу молочного питания 5 раз. Проведена оценка антиагрегационного контроля сосудистой стенки над способностью к агрегации эритроцитов, тромбоцитов и нейтрофилов. В результате исследований у телят отмечена тенденция к повышению агрегации форменных элементов крови. Это сопровождалось у них постепенным повышением антиагрегационного контроля сосудистой стенки, связанного с усилением выработки в ее эндотелии оксида азота и простациклина. Найденный баланс про- и антиагрегационных влияний обеспечивает у телят молочного питания необходимые для данного этапа развития реологические свойства крови, во многом определяя адаптационные характеристики организма животных к внешней среде.

VASCULAR CONTROL AGGREGATION PROPERTIES OF BLOOD CELLS

CALVES MILKMAN

Glagoleva T.I. Summary

A study performed on 39 healthy calves black-motley breed surveyed over a milk 5 times. Estimation of the antiaggregation monitoring of the vascular wall over the ability of aggregation of erythrocytes, platelets and neutrophils. The results of the research have a tendency to raise calves aggregation of loose blood. This has been accompanied by a gradual increase in vascular wall control antiaggregation associated with increased development in the endothelium nitric oxide and prostacyclin. Found the balance of pro-and antiaggregation influences provides the calves milk necessary for this stage of the development of the flow properties of blood, largely defining Adaptive characteristics of the body of animals to the external environment.