Совершенствование методов диагностики туберкулеза крупного рогатого скота

Каждый год миллионы людей и животных погибают как от новых экзотических, так и от хорошо известных инфекций. Однако среди всех инфекционных заболеваний убийцей номер 1 на большей части планеты продолжает оставаться туберкулез (Д.Н. Мингалеев, Р.В. Честнова, Н.И. Садыков, 2009).

Успех борьбы с туберкулёзом крупного рогатого скота определяется уровнем изученности болезни, наличием эффективных методов и средств диагностики, экономическими возможностями сельхозформирований, материальным обеспечением, а также организацией профилактических и оздоровительных мероприятий (В.А. Сапа, 2010).

Наукой и практикой достигнуты определенные успехи в борьбе с туберкулезом сельскохозяйственных животных, однако, эта инфекция остается одной из ведущих, наиболее сложных и экономически значимых в инфекционной патологии (Н.А. Донченко, 2008).

Наряду с этим, эпидемическая и эпизоотическая ситуация по туберкулезу в России, в целом остается напряженной (Д.Н. Мингалеев и др., 2011).

Ч.М. Сафина (2010) отмечает, что особую трудность представляет распознавание туберкулеза, когда у реагирующих на туберкулин животных не обнаруживается специфических для туберкулеза изменений, а лабораторные исследования, проводимые в соответствии с методическими указаниями по диагностике туберкулеза животных, не дают положительных результатов.

В связи с этим исследования, касающиеся разработки и усовершенствования методов диагностики туберкулеза, являются весьма актуальными.

Материал и методы. Исследования проводились на коровах, содержащихся в ООО «Луч» и совхозе «Техникум Вамин-Чистай» Чистопольского района Республики Татарстан. Пробы биоматериала отбирали у коров, положительно реагирующих на туберкулин, при санитарном убое.

Антитуберкулезную сыворотку получали от кроликов путем гиппериммунизации их вакциной БЦЖ. Иммуноглобулины из сыворотки крови получили путем осаждения с последующим диализом. Рабочий антиген получали путем отработки М. BCG . Использовали белок А-I125 St. aureus , который заменяет меченный иодом-125 антивидовой иммуноглобулин. В качестве контроля использовали экстракт нормальной ткани, а также сыворотку крови здоровых животных.

Для постановки реакции применяли полистироловые планшеты для иммунологических реакций. Концентрацию белка в пробах устанавливали на спектрофотометре. Учет реакции проводили на гамма-счетчике.

Для выявления оптимального варианта твердофазного радиоиммунологического анализа (ТФ-РИА) были использованы методы: непрямой с использованием белка St. aureus , «сендвич» и комбинированный непрямой.

При постановке непрямого метода ТФ-РИА на поверхность полистирола наносили антигенсодержащей материал (экстракты проб). Затем, на получившийся антигенный сорбент наносили специфическую сыворотку, а в контрольных пробах – нормальную сыворотку. Комплекс антиген-антитело выявляли с помощью белка St. aureus .

При постановке метода ТФ-РИА типа «сендвич» на поверхность полистирола наносили гаммаглобулины, полученные против M. BCG . Затем на получившийся антительный сорбент наносили экстракты проб. Комплекс антиген-антитело выявляли с помощью тех же глобулинов, меченных по I125.

При постановке комбинированного непрямого метода РИА использовали сочетание предварительного истощения гипериммунной сыворотки антигенсодержащим материалом с непрямым ТФ-РИА. При этом были испытаны следующие разведения сыворотки: 1 : 100, 1 : 200, 1 : 400, 1 : 800.

Результаты исследований. Эффективность испытанных методов определяется отношением радиоактивности проб опытных к контрольным, которое принято обозначать коэффициентом К.

В результате проведенной работы установлено:

• I.    Непрямой ТФ-РИА. При разведении сыворотки 1 : 10, 1 : 100, 1 : 1000; коэффициенты соответственно, составляли 60,59; 79,05; 72,94.

• II.    «Сендвич» вариант ТФ-РИА. В опытах испытывали двойной контроль:

• 1    вариант – экстракт органов зараженных животных + иммунная сыворотка (опыт) и экстракт органов здоровых животных + иммунная сыворотка (контроль),

• 2    вариант – экстракт органов зараженных животных + иммунная сыворотка (опыт) и экстракт органов зараженных животных + нормальная сыворотка (контроль).

При оптимальном разведении сывороток 1 : 200 в 1 варианте опытов коэффициент составил 1,55; во 2 варианте – 0,91.

• III . комбинированный метод ТФ-РИА. Результаты одного из опытов представлены в таблице 1. Количество выявляемого в пробе антигена в данном методе прямо пропорционально степени снижения радиоактивности опытных проб по сравнению с контрольными.

1. Радиоактивность проб при разных количествах микробных клеток

Количество микробных клеток (млн.)	Радиоактивность (имп./мин.)
	опытные пробы	контрольные пробы
24	7550	21030
2,4	15580	22103
0,240	16480	19990
0,024	17950	21240
0,0024	18150	21090
0,00024	18220	22240

Выводы. 1. Метод ТФ-РИА может быть использован для выявления возбудителя туберкулеза крупного рогатого скота; 2. Наиболее перспективным является комбинированный метод ТФ-РИА; 3. Для повышения эффективности ТФ-РИА необходимо совершенствовать способы получения специфических антигенов возбудителя.

ЛИТЕРАТУРА: 1. Мингалеев, Д.Н. Возможности ускоренного определения бактериостатической активности некоторых химических соединений в отношении М. tuberculosis с помощью автоматизированной системы BACTEC MGIT 960 / Д.Н. Мингалеев, Р.В. Честнова, Н.И. Садыков // Ученые записки Казанской ГАВМ. – Т. 197. – Казань, 2009.– С. 106-112. 2. Донченко, Н.А. Усовершествование средств и методов диагностики и профилактики туберкулеза крупного рогатого скота :

автореф. дисс. докт. ветер. наук : 16.00.03; 16.00.04 / Донченко Николай Александрович. – Новосибирск. – 2008. – 36 с. 3. Сапа, В.А. Совершенствование системы ветеринарно-профилактических мероприятий и её влияние на проявление неспецифической реактивности на туберкулин у крупного рогатого скота : автореф. дисс. канд. ветер. наук : 16.00.03 / Сапа Владислав Андреевич. – Республика Казахстан. – Астана, 2010. – 29 с. 4. Сафина, Ч.М. Выделение Л-форм микобактерий туберкулеза от собак и кошек, реагирующих на ППД-туберкулин для млекопитающих / Ч.М. Сафина // Ученые записки КГАВМ. – Т. 201. – Казань, 2010.– С. 105-108. 5. Мингалеев, Д.Н. Изучение профилактической активности нового противотуберкулезного препарата – Линарола в опытах на морских свинках / Д.Н. Мингалеев, Р.Ш. Валеев, С.Г. Фаттахов, М.М. Шулаева, Р.В. Честнова, Н.И. Садыков// Ученые записки КГАВМ. – Т.205. – Казань, 2011.– С.140-145.

СОВЕРШЕНСТВОВАНИЕ МЕТОДОВ ДИАГНОСТИКИ ТУБЕРКУЛЕЗА КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА

Ахметов Т.М., Нуруллин А.А. Резюме

В результате проведенных исследований показана возможность использования радиоиммунологического анализа для индикации возбудителя туберкулеза крупного рогатого скота. Наиболее перспективным является комбинированный метод твердофазного радиоиммунологического анализа.

PERFECTION METHODS OF DIAGNOSTICS OF THE TUBERCULOSIS FROM CATTLE

Ahmetov T.M., Nurullin A.A. Summary

As a result of the spent researches is shown possibility use of a radioimmunoassay for indication of the originator of a cattle tuberculosis. The most perspective is the combined method of hardly-phase radioimmunoassay.