Современные иммунологические кожные тесты в ранней диагностике туберкулеза

(M. Bovis BCG), возникает трудности в ее интерпретации. Перекрестная чувствительность приводит к низкой специфичности туберкулинодиагностики. Реакция на туберкулин не всегда позволяет дифференцировать лиц, впервые инфицированных микобактерией туберкулеза (МБТ) или ранее перенесшее заболевание, больных локальными формами туберкулеза, лица вакцинированные БЦЖ, так как положительная реакция на туберкулин развивается в результате как вакцинации БЦЖ, так и инфицировании МБТ, что затрудняет ее интерпретацию, приводит к гипердиагностике инфицированности и, как результат, необоснованному назначению превентивной химиотерапии [2].

В конце ХХ века была завершена расшифровка геномов M. tuberculosis, M. bovis и M. bovis BCG. Сравнительные исследования геномов привели к индентификации зоны RD1, присутствующей во всех штаммах M. tuberculosis и патогенных штаммах M. bovis, но отсутствующей во всех штаммах вакцины M. bovis BCG и в большинстве нетуберкулезных микобактерий. В этой зоне, в частности, кодируется секреция двух белков: ESAT-6 и CFP-10. В связи с их отсутствием M. bovis BCG, они способны в диагностическом тесте дифференцировать туберкулезную инфекцию и вакцинацию БЦЖ. Открытие генов, специфичных для M. Tuberculosis, привело к разработке тестов in vitro, основанных на продукции гамма-интерферона (ИНФ-γ) Т- лимфоцитами крови в ответ на стимуляцию белками ESAT-6 и CFP-10 (IGRA-Interferon- Gamma Release Assays). Один из них QuantiFERON-TB Gold In-Tube(QFT-GIT), использует твердофазный иммуносорбентный анализ для измерения антиген специфичной продукции ИНФ-γ циркулирующими клетками Т-клетками в цельной крови. Другой тест, T-SPOT.TB, использует технику Elispot для измерения количества мононуклеарных клеток периферической крови, продуцирующих ИНФ-γ.

Поскольку ESAT-6 и CFP-10 экспрессируются при размножении микобактерии, иммунный ответ на эти антигены отражает наличие в организме активной туберкулезной инфекции. Тесты IGRA обладают достаточно высокой чувствительностью и почти 100% специфичностью.

Однако высокие материальные затраты, необходимость специально оборудованной лабораторией и внутривенных манипуляции, особые требования к соблюдению предосторожностей для сохранения жизненной способности лимфоцитов, продуцирующих ИНФ-γ, не позволяет использовать данный метод для массовой диагностики [3].

Решением проблемы стало внедрение нового кожного теста с аллергеном туберкулезным рекомбинантным – “Диаскинтест”. По результатам исследования авторов установлена высокая специфичность данной внутрикожной пробы. “Диаскинтест” – аллерген туберкулезный рекомбинантный в стандартном разведении 0,2 мкг в 0,1 мл; раствор для внутрикожного введения, представляющий собой рекомбинантный белок, продуцируемый генетически модифицированной культурой Escherichia coli BL21/(DE3)/рCFP-ESAT, разведенный в стерильном изотоническом фосфатном буферном растворе, с консервантом (фенол).

По результатам проведенных исследований издан приказ Министерства здравоохранения и социального развития РФ № 855 от 29 октября 2009 г. ”О внесении изменений в приложение №4 к Приказу Минздрава России от 21 марта 2003 г. №109”, внедрение которого началось по всей территории Российской Федерации.

Преимущество теста – простота в исполнении (аналогично пробе Манту), низкая стоимость препарата [4].

Цель исследования: сопоставить результаты кожного теста с аллергеном туберкулезным рекомбинантным (“Диаскинтест”) и реакцией Манту с 2ТЕ у детей подростков с латентной туберкулезной инфекцией.

Материалы и методы исследования. Обследованы 57 детей разных возрастных групп, находящихся в семейном контакте с больными туберкулезом органов дыхания с бактериовыделением. Исследование было проведено на базе БУЗ УР РКТБ МЗ УР в отделении №5.

С целью постановки диагноза, в стационаре был проведен стандартный комплекс фтизиатрического обследования, дополненный углубленной туберкулинодиагностикой (реакцией Манту с 2 ТЕ в стандартном разведении), пробы с аллергеном туберкулезным рекомбинантным в стандартном разведении - Диаскинтест (ДСТ), и лучевыми методами диагностики (рентгеноскопия органов грудной клетки, многосрезовая спиральная компьютерная томография - МСКТ). Кроме того, проведен анализ результатов кожной пробы Манту 2 ТЕ и Диаскинтеста. Оценивали частоту положительных и отрицательных результатов обоих тестов в процентах от общего числа обследованных.

Результаты . В ходе обследования отмечены следующие результаты: положительная реакция с ДСТ отмечены у 44 человек (77%), отрицательные - у 13(23%) при положительной реакции Манту с 2ТЕ.

Случаи с отрицательной пробой ДСТ были расценены как дети с поствакцинальной аллергией.

При анализе стандартного рентгенологического комплекса по обзорной рентгенограмме и МСКТ, среди детей с положительным ДСТ было выявлено: 14 (24%) детей с клиническими формами туберкулеза, 30 (53%)-дети инфицированные МБТ.

После изучения анамнеза у детей с выявленными клиническими формами туберкулеза было установлено, что у 9 (64%) детей был пропуск “виража”, у 5 (36%) установлен “вираж”. Проведение химиопрофилактики проводилась у 2 (14%) детей одним препаратом (изониазид), у 3 (22%) был отказ от химиопрофилактики.

Проба Манту в 80,0% случаях была положительная, гиперэргическая и сомнительная реакции по 10,0% соответственно. Проба с “Диаскинтестом” у этих детей показала гиперэргическую и положительную реакции в равном процентном соотношении – по 43,3%, сомнительная реакция составила 13,3%.

При сопоставлении средних размеров кожных реакции при туберкулинодиагностике ( реакция Манту с 2 ТЕ) показало следующие: средний размер папулы при гиперэргической реакции 18,5 мм, при положительной реакции – папула 11,69 мм, сомнительная реакция расценивалась как гиперемия , средний размер которой составил 4 мм. При пробе с “Диаскинтестом” средний размер папулы при гиперэргической реакции составил 16,0 мм, папула при положительной реакции - 10.52 мм, сомнительная реакция-гиперемия 2 мм.

Для ППТТ были подобраны противотуберкулезные препараты I ряда. На фоне химиопрофилактики в течение 2 месяцев наблюдалось уменьшение папулы ДСТ, что свидетельствует о снижении активности МБТ.