Специфическая профилактика анаэробной энтеротоксемии и эшерихиозной диарея телят

В последние годы желудочно - кишечные заболевания телят получили широкое распространение . Они наносят значительный экономический ущерб . В этиологии этих болезней многими отечественными и иностранными авторами отмечается возрастающее значение бактерий Clostridium perfringens и их ассоциаций с другими видами энтеробактерий , в частности с Escherichia coli.

Анаэробная энтеротоксемия – остропротекающая болезнь животных различных видов ( овец , телят , поросят , пушных зверей , птиц и др .), характеризующаяся общим токсикозом организма с признаками поражения нервной системы и желудочно - кишечного тракта , стационарностью , значительным охватом поголовья и высокой летальностью ( до 60-100%). Болезнь вызывают спорообразующие грамположительные бактерии Clostridium perfringens (Cl. р erfringens), которых подразделяют на шесть типов : А , В , С , D, Е , F, отличающихся друг от друга антигенной структурой вырабатываемых ими токсинов . У телят анаэробную энтеротоксемию вызывают возбудители серотипов А , С и D [1, 3, 4].

В РФ разработаны и выпускаются биологической промышленностью вакцины против энтеротоксемии овец и поросят, такие как «Концентрированная поливалентная гидроокисьалюминиевая вакцина против брадзота, инфекционной энтеротоксемии, злокачественного отека и дизентерии ягнят», содержащая в своем составе антигены Cl. рerfringens типов В, С и D; «Поливалентный анатоксин против клостридиозов овец» на основе анатоксинов Cl. рerfringens типов С и D; «Вакцина ассоциированная против анаэробной энтеротоксемии и эшерихиоза поросят», на основе микробных клеток бактерий Cl. рerfringens типа С и эшерихий 7 серологических групп [2]. Вакцина против анаэробной энтеротоксемии телят в Российской Федерации не разработана и не выпускается. В хозяйствах, стационарно неблагополучных по анаэробной энтеротоксемии телят, применяется первая из вышеуказанных вакцин. Недостатком этой вакцины является неполный ее антигенный состав, а именно отсутствие в ней антигена типа А – основного возбудителя анаэробной энтеротоксемии телят, что делает ее малоэффективной в хозяйствах, где превалирует возбудитель этого типа.

Известно , что анаэробная энтеротоксемия у телят часто проявляется в виде смешанной инфекции с эшерихиозом . Поэтому актуальна разработка ассоциированной вакцины против анаэробной энтеротоксемии и эшерихиозной диареи телят .

Цель исследований – изготовление ассоциированной вакцины против анаэробной энтеротоксемии и эшерихиозной диареи телят , изучение ее безвредности , антигенной и иммуногенной активности .

Материалы и методы . Работа проводилась в условиях лаборатории по изучению болезней молодняка ФГБУ « ФЦТРБ - ВНИВИ » и молочно товарной фермы ООО « Ср . Девятово », неблагополучной по анаэробной энтеротоксемии и эшерихиозной диареи телят .

При изготовлении ассоциированной вакцины использовали штаммы Cl. perfringens серотипов А , С , Д и E. coli, синтезирующие адгезивные антигены К 99 и А 20. При этом производственные штаммы Cl. perfringens выращивали на мясо - печеночно - казеиновой среде в реакторе при температуре 37–38 ^о С до накопления не менее 4 млрд ./ см ³ микробных клеток . Эшерихиозные компоненты вакцины получали из штаммов E. coli КВ -1 и ПЗ -3, синтезирующих соответственно адгезивные антигены К 99 и А 20. Для получения бактериальной массы E. coli использовали мясо пептонный агар ( для штамма ПЗ -3) и среду Минка ( для штамма КВ -1). Для получения анатоксина каждый штамм E. coli засевали отдельно в реактор с бульоном Хоттингера , выращивали 5-7 суток при температуре 37-38 ^о С .

Контроль вакцины на безвредность проводили на 10 белых мышах живой массой 16-18 г , которым препарат вводили подкожно в дозе 0,5 см ³. Вакцину считали безвредной , если мыши в течение 10 суток после введения вакцины оставались живыми и клинически здоровыми .

Контроль иммуногенной активности вакцины осуществляли на 3 кроликах, которым препарат вводили внутримышечно двукратно с интервалом 15 дней в дозе 4 см3. Через 20 суток после второй инъекции в сыворотке крови каждого кролика определяли титр антитоксических антител в реакции нейтрализации токсина Cl. perfringens на белых мышах. Вакцину считали активной против энтеротоксемии, если сыворотка крови иммунизированных кроликов предохраняла не менее двух мышей из трех, взятых в опыт, при гибели всех мышей контрольной группы. Иммуногенную активность вакцины к эшерихиям проверяли на 40 белых мышах массой 16-18 г. Вакцину вводили 20 мышам (опытным) подкожно двукратно с интервалом 10 дней в дозе 0,3 см3, а 20 мышам (контрольным) вакцину не вводили. Через 15 дней после второй иммунизации животным вводили внутрибрюшинно подтитрованную смертельную дозу двух контрольных штаммов E. coli (К99 и А20), используя на каждый штамм эшерихий 10 вакцинированных и 10 невакцинированных животных. Вакцину считали активной против E. coli при выживании не менее 7 из 10 вакцинированных и гибели не менее 8 невакцинированных белых мышей.

Эффективность вакцины оценивали по количеству заболевших и павших от анаэробной энтеротоксемии и эшерихиозной диареи телят в неблагополучном хозяйстве сравнивая эти показатели в опытных и контрольных группах животных .

Результаты исследований . Изготовлена экспериментальная серия ассоциированной вакцины против анаэробной энтеротоксемии и эшерихиозной диареи телят с содержанием следующих антигенных компонентов в 1 л . препарата :

• -    суспензия клеток штамма № 28 Cl. perfringens типа А в культуральной среде с концентрацией 3,5 · 10¹² – 4,0 · 10¹², см ³ – 140,0 – 160,0;

• -    суспензия клеток штамма № 392 Cl. perfringens типа С в культуральной среде с концентрацией 3,5 · 10¹² – 4,0 · 10¹², см ³ – 140,0 – 160,0;

• -    суспензия клеток штамма № 213 Cl. perfringens типа Д в культуральной среде с концентрацией 3,5 · 10¹² – 4,0 · 10¹², см ³ – 140,0 – 160,0;

• -    суспензия клеток штамма E. coli КВ -1, содержащая адгезивный антиген К 99 на физиологическом растворе с концентрацией 100 · 10¹² – 120 · 10¹², см ³ - 25,0-30,0;

• -    суспензия клеток штамма E. coli ПЗ -3, содержащая адгезивный антиген А 20 на физиологическом растворе с концентрацией 100 · 10¹² – 120 · 10¹², см ³ - 25,0 -30,0;

• -    гидроокись алюминия , 6%- ная , см ³ – 200,0-250,0;

• -    формалин , см ³ - 4,0-5,0;

• -    ТС - и ТЛ - анатоксины штаммов E. coli КВ -1 и E. coli ПЗ -3 в соотношении 1:1 в культуральной среде с титром в РДП 1:8-1:16, л . – До 1.

Проводили изучение безвредности и иммуногенной активности вакцины на лабораторных животных, а также ее эффективности на крупном рогатом скоте в производственных условиях. При этом установили, что вакцина безвредна для животных, не вызывает поствакцинальных осложнений. Результаты контроля иммуногенной активности вакцины на белых мышах в реакции нейтрализации по отношению к Cl. perfringens и E. coli представлены в таблицах 1 и 2. Данные таблиц свидетельствуют о том, что препарат обладает высокой иммуногенной активностью. Так, сыворотка крови, полученная от двукратно иммунизированных ассоциированной вакциной кроликов, предохраняет 80-90% белых мышей от гибели после заражения их смертельными дозами бактерий Cl. perfringens и E. coli.

• 1.    Результаты контроля иммуногенной активности вакцины на белых мышах в реакции нейтрализации по отношению к Cl. perfringens

  Группы мышей	Коли чество , гол .	Доза сыворот ки , см 3	Заражены бактериями		Результаты контроля
  					Пали		Выжили
  					гол .	%	гол .	%
  опытные	10	0,5	Cl.	perfringens, тип А	1	10	9	90
  	10	0,5	Cl.	perfringens, тип С	2	20	8	80
  	10	0,5	Cl.	perfringens, тип Д	1	10	9	90
  контроль ные	10	-	Cl.	perfringens, тип А	10	100	0	0
  	10	-	Cl.	perfringens, тип С	10	100	0	0
  	10	-	Cl.	perfringens, тип Д	10	100	0	0

• 2.    Результаты контроля иммуногенной активности вакцины на белых мышах по отношению к E. coli

  Группы мышей	Коли чество , гол .	Доза вакцины , см 3	Заражены бактериями	Результаты контроля
  				Пали		Выжили
  				гол .	%	гол .	%
  опытные	10	0,3 + 0,3	E. coli К 99	1	10	9	90
  	10	0,3 + 0,3	E. coli А 20	2	20	8	80
  контрольные	10	-	E. coli К 99	9	90	1	10
  	10	-	E. coli А 20	10	100	0	0

  Производственное испытание вакцины проводили в ООО « Ср . Девятово », стационарно неблагополучном по анаэробной энтеротоксемии и эшерихиозной диареи телят . В опытах использовали 46 глубокостельных коров и 60 телят 30-35 дневного возраста . Коровам вакцину вводили подкожно в дозе 10 см ³ двукратно за 50-60 дней до отела с интервалом 1518 дней . Телят иммунизировали в возрасте 18-20 дней также двукратно с интервалом 15-18 дней в дозе 4 см ³. При этом установили , что вакцина обладает высокой профилактической эффективностью . Так , в группе новорожденных телят , полученных от вакцинированных коров , заболеваемость составила 13,04%, сохранность – 89,9%, тогда как в группе телят , полученных от невакцинированных коров , эти показатели составили

78,8 и 77,7% соответственно . В группе телят старшего возраста , вакцинированных ассоциированной вакциной , заболеваемость анаэробной энтеротоксемией и эшерихиозной диареей составила 8,3%, сохранность 91,6%, а в группе невакцинированных телят эти показатели составили соответственно 21,9 и 73,9%.

Заключение . Изготовлена и испытана ассоциированная вакцина против анаэробной энтеротоксемии и эшерихиозной диареи телят . Применение ее с профилактической целью в стационарно неблагополучном хозяйстве позволило снизить заболеваемость новорожденных телят в 6,4 раза , телят старшего возраста – в 2,63 раза и тем самым повысить сохранность новорожденных телят на 12,2%, телят старшего возраста – на 17,7%.

ЛИТЕРАТУРА : 1. Антонов , Б . И . Лабораторные исследования в ветеринарии . Бактериальные инфекции / Б . И . Антонов , В . В . Борисова , П . М . Волков и др . - М .: Агропромиздат , 1986.- С . 48-51. 2. Каталог лекарственных средств для животных . - М .: Торговый дом « Биопром », 2005. - С . 92, 104, 105. 3. Куриленко , А . Н . Бактериальные и вирусные болезни молодняка с .- х . животных / А . Н . Куриленко , В . Л . Крупальник , Н . В . Пименов . - М .: КолосС , 2005. - С . 84-91. 4. Салимов , В . А . Некоторые особенности патологоанатомической диагностики анаэробной энтеротоксемии телят , вызванной Cl. perfringens типа А / В . А . Салимов , Н . П . Салимова // Актуальные проблемы болезней молодняка в современных условиях : Матер . науч .- практ . конф . - Воронеж , 2002. - С . 527-528.

СПЕЦИФИЧЕСКАЯ ПРОФИЛАКТИКА АНАЭРОБНОЙ ЭНТЕРОТОКСЕМИИ И ЭШЕРИХИОЗНОЙ ДИАРЕЯ ТЕЛЯТ

Спиридонов А . Г ., Макаев Х . Н ., Спиридонов Г . Н .

Резюме

Разработана технология изготовления ассоциированной вакцины против анаэробной энтеротоксемии и эшерихиозной диарея телят . Изучена безвредность , антигенная и иммуногенная активность вакцины на лабораторных животных и крупном рогатом скоте .

SPECIFIC PROPHYLAXIS OF ANAEROBIC ENTEROTOXEMIA AND ESHERIHIAL DIARRHEA OF CALVES

Spiridonov A.G., Makaev Ch.N., Spiridonov G.N. Summary

The manufacturing technology of associated vaccines against enterotoxaemia infectious anaerobic and Еscherichia соli diarrheas of calves was developed. Antigenic, immunological and harmlessness of the vaccine on laboratory animals and the cattle is studied.