Спектрофотометрическая методика определения суммарного содержания фенилпропаноидов в листьях какалии копьевидной (Cacalia hastata L.)

Автор: Мазур Л.В., Оленников Д.Н., Танхаева Л.М.

Журнал: Вестник Восточно-Сибирского государственного университета технологий и управления @vestnik-esstu

Статья в выпуске: 2 (33), 2011 года.

Бесплатный доступ

Разработана спектрофотометрическая методика определения суммарного содержания фенилпропаноидов в листьях Cacalia hastata, которая использует прямой вариант анализа в УФ-области. В качестве стандартного образца вещества сравнения выбрана хлорогеновая кислота - доминирующий компонент комплекса фенилпропаноидов данного вида растительного сырья. Установлено, что суммарное содержание фенилпропаноидов в листьях Cacalia hastata составляет 3.34-13.64%. Проведенный валидационный анализ показал, что методика соответствует критериям приемлемости.

Фенилпропаноиды, хлорогеновая кислота, уф-спектрофотометрия

Короткий адрес: https://sciup.org/142142308

IDR: 142142308

Текст научной статьи Спектрофотометрическая методика определения суммарного содержания фенилпропаноидов в листьях какалии копьевидной (Cacalia hastata L.)

Листья какалии копьевидной ( Cacalia hastata L.) рассматриваются в качестве перспективного лекарственного сырья, обладающего широким спектром биологической активности [1]. Ранее для анализа листьев C. hastata были предложены методики количественного определения суммарного содержания органических кислот, каротиноидов и аскорбиновой кислоты [2]. Стандартизация с использованием данных методик является приемлемой, но, учитывая современные потребности фармацевтической практики, нами пересмотрены подходы к анализу данного вида растительного сырья.

Целью настоящей работы является разработка спектрофотометрической методики определения суммарного содержания фенилпропаноидов в листьях C. hastata .

Экспериментальная часть

Растительное сырье – листья C. hastata , были собраны в разных районах Республики Бурятия. Видовая принадлежность определена д.фарм.н. Т.А. Асеевой (ИОЭБ СО РАН). Образцы сырья хранятся в гербарии Отдела биологически активных соединений ИОЭБ СО РАН.

В работе использовали достоверные образцы хлорогеновой и кофейной кислот (Sigma); остальные реактивы имели степень чистоты ч.д.а. Спектрофотометрические исследования проводили на спектрофотометре UV-Vis-mini (Shimadzu, Япония) в кварцевых кюветах с толщиной поглощающего слоя 10 мм.

Методика количественного определения суммарного содержания фенилпропаноидов в листьях C. hastata. Аналитическую пробу сырья измельчают до размера частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями диаметром 1 мм. Около 0.5 г (точная навеска) измельченного сырья помещают в колбу со шли- фом вместимостью 250 мл, приливают 100 мл 70% этанола, присоединяют обратный холодильник и нагревают на кипящей водяной бане в течение 60 мин. После охлаждения извлечение фильтруют в мерную колбу вместимостью 200 мл. Экстракцию сырья повторяют в тех же условиях еще раз. Объем объединенного фильтрата доводят до метки 70% спиртом этиловым (раствор А).

1 мл раствора А переносят в мерную колбу вместимостью 25 мл и доводят объем раствора до метки 70% спиртом этиловым (раствор Б).

Оптическую плотность раствора Б определяют при длине волны 330 нм.

Суммарное содержание фенилпропаноидов ( Х) в пересчете на хлорогеновую кислоту (в %) и абсолютно-сухое сырье вычисляют по формуле:

D • KV 100 m • 530 ‘ 100 - W ’ где D - оптическая плотность исследуемого раствора; KV- коэффициент разбавления исследуемого раствора (2500); 530 - удельный коэффициент погашения хлорогеновой кислоты в 70% спирте этиловом при длине волны 330 нм; m - масса сырья, г; W- потеря в массе при высушивании сырья, %.

Определение параметров специфичности, повторяемости, правильности, межоперационной точности и точности разработанной методики проводили согласно [3-5].

Обсуждение результатов

При исследовании УФ-спектра спиртового извлечения C. hastata установлено присутствие максимума поглощения при 330±2 нм (рис. 1). Спектр поглощения доминирующих фенилпропаноидов - хлорогеновой и кофейной кислот, совпадает с таковым спиртового извлечения из сырья, поэтому оба соединения могут быть использованы в качестве стандартных веществ для количественного определения суммарного содержания фенилпропаноидов, имеющих максимум поглощения в области 330 нм. Нами в качестве стандартного соединения была выбрана хлорогеновая кислота; для расчета использовали величину удельного коэффициента погашения (Е 1% _1см), равную 530.

В экспериментах по определению оптимальных параметров процесса экстракции флавоноидов, обеспечивающих их максимальное извлечение, исследовалось влияние типа экстрагента, температуры экстракции, степени измельчения сырья, соотношения сырье - экстрагент, кратности и времени экстракции.

Рис. 1. УФ-спектры поглощения спиртового извлечения листьев C. hastata (1), хлорогеновой (2) и кофейной кислот (3)

Эффективность экстракции оценивалась по содержанию в извлечениях фенилпропаноидов (табл. 1). Определено, что оптимальными параметрами экстракции флавоноидов являются: степень измельчения сырья 1.0 мм, температура экстракции 100° С, двукратная экстракция длительностью 60 мин каждая при соотношении сырье - экстрагент 1:200.

В ходе проведения валидации разработанной методики были исследованы параметры специфичности, повторяемости, правильности, межоперационной точности и точности (табл. 2).

Установлено, что методика определения суммарного содержания фенилпропаноидов в листьях C. hastata спектрофотометрическим методом соответствует критериям приемлемости. Заданные критерии удовлетворяют требованиям соответствующей нормативной документации.

Влияние технологических параметров на степень экстракции фенилпропаноидов (ФПр) из листьев C. hastata ^а

Исследуемый параметр	Суммарное содержание ФПр, % ^б	Исследуемый параметр	Суммарное содержание ФПр, % ^б
Экстрагент (концентрация этанола, %)		Степень измельчения, мм
20	5.07±0.10	5	2.21±0.04
40	5.03±0.10	3	4.15±0.08
60	5.24±0.11	2	6.33±0.12
70	7.14±0.14	1	7.11±0.14
80	7.04±0.14	0.5	7.04±0.14
95	6.67±0.12	0.25	7.01±0.13
Температура, ºС		Соотношение сырье : экстрагент
20	2.07±0.04	1:30	1.10±0.02
40	3.73±0.07	1:50	2.73±0.05
60	4.81±0.10	1:70	5.11±0.10
80	6.15±0.12	1:100	6.88±0.13
90	7.03±0.14	1:200	7.16±0.14
100	7.22±0.15	1:400	7.15±0.14
Время и кратность экстракции
Время, мин	Экстракция
Время, мин	1-я	2-я	3-я
15	1.19±0.02	0.33±0.01	н.о. ^в
30	3.15±0.06	0.43±0.01	н.о. ^в
45	4.39±0.09	0.87±0.02	н.о. ^в
60	6.83±0.14	1.11±0.02	<0.1
75	6.83±0.14	1.11±0.02	<0.1
90	6.84±0.14	1.11±0.02	0.2
105	6.83±0.14	1.11±0.02	0.2
120	6.82±0.14	1.10±0.02	0.2
^а образец сырья C h -9 (см. табл. 3); ^б n = 5; ^в не определяются. Таблица 2

Аттестационная характеристика методики количественного определения суммарного содержания фенилпропаноидов в листьях C. Hastate

Параметр	Критерий приемлемости
Параметр	Определенная величина критерия	Требуемая величина критерия	Вывод
Специфичность	Recovery = 98.7-103.2% δ = 0.91%	Recovery = 95-105% δ <3%	удовлетворяет критерию приемлемости
Правильность	Recovery = 99.4-102.1% δ = 0.98%	Recovery = 97-103% δ <3%	-''-
Повторяемость	RSD = 1.28%	RSD <3%	-''-
Межоперационная точность	RSD = 1.42%	RSD <3%	-''-
Точность	согласно п.п. 3 и 4 – удовлетворяет критерию приемлемости

С применением разработанной методики было проведено исследование 14 образцов сырья C. has-tata , собранного в 2004-2009 гг. на территории Республики Бурятия (табл. 3). Результаты количественного анализа показали, что суммарное содержание фенилпропаноидов в исследованном сырье в пересчете на хлорогеновую кислоту может составлять 3.34-13.64%.

Полученные результаты свидетельствуют о том, что разработанная методика может быть использована в практике фармацевтического анализа для количественной характеристики листьев C. hastata .

Суммарное содержание фенилпропаноидов (ФПр) в листьях C. Hastate

Номер сырья	Место сбора	Дата сбора (ДД.ММ.ГГ)	Суммарное содержание ФПр, %
C h -1	Прибайкальский р-он, с. Горячинск	10.VIII.2003	3.63±1.93
C h -2	Закаменский р-он, с. Бортон	12.VII.2004	13.17±1.60
C h -3	Прибайкальский р-он, с.Хурамша	27.VII.2004	3.34±2.10
C h -4	Мухоршибирский р-он, с. Харашибирь	27.VII.2004	11.14±1.98
C h -5	Мухоршибирский р-он, с. Мухоршибирь	15.VIII.2004	11.24±2.22
C h -6	Мухоршибирский р-он, с. Мухоршибирь	14.VIII.2005	4.25±1.88
C h -7	Прибайкальский р-он, с. Горячинск	20.VII.2006	10.11±2.28
C h -8	Прибайкальский р-он, пос. Тальцы	25.VII.2007	10.73±1.96
C h -9	г. Улан-Удэ	30.VII.2007	8.10±2.10
C h -10	г. Улан-Удэ	2.VIII.2008	7.61±1.97
C h -11	Прибайкальский р-он, с. Горячинск	14.VII.2009	13.64±2.27
C h -12	Мухоршибирский р-он, с. Мухоршибирь	20.VII.2009	6.42±2.18
C h -13	Прибайкальский р-он, с. Татаурово	25.VII.2009	11.88±1.94
C h -14	Прибайкальский р-он, с. Горячинск	31.VII.2009	12.31±2.03

Заключение

1. Изучены условия экстракции и спектрофотометрического определения фенилпропаноидов в листьях Cacalia hastata L.
2. Разработана методика количественного определения фенилпропаноидов в листьях C. hastata в пересчете на хлорогеновую кислоту.
3. Параметры специфичности, повторяемости, правильности, межоперационной точности и точности удовлетворяют требованиям соответствующей нормативной документации.

Статья научная