Способ получения лечебно-профилактической сыворотки против анаэробной энтеротоксемии и эшерихиозной диареи телят

Желудочно-кишечные болезни сельскохозяйственных животных занимают одно из ведущих мест по частоте, массовости проявления и величине наносимого хозяйствам экономического ущерба вследствие высокой заболеваемости и падежа молодняка, недополучения привеса, а также больших затрат на лечебно-профилактические мероприятия.

В этиологии этих болезней многими отечественными и иностранными авторами отмечается возрастающее значение бактерий Cl. perfringens и их ассоциаций с другими видами энтеробактерий, в частности с Е.coli [1, 2, 4,5]. В РФ разработана ассоциированная вакцина против анаэробнойэнтеротоксемии и эшерихиозной диареи телят на основе инактивированных антигенов бактерий CI. perfringens (серотипы А, С, Д) и Е.coli, синтезирующих адгезивные антигены К99, А20, а также их ТЛ- и ТС-анатоксинов (Патент РФ на изобретение №2428202 от 10.09.2011 г.) [3]. Вакцина предназначена для иммунизации глубокостельных коров и нетелей с целью создания колострального иммунитета у потомства через материнское молозиво, а также для иммунизации молодняка 18-20-дневного возраста, полученных от иммунизированных маток. Антитела, полученные с молозивом матери, обеспечивают защиту новорожденных телят от заболеваний до тех пор, пока у них не выработаются собственные механизмы иммунитета. По различным причинам некоторые животные после рождения не получают в необходимом количестве эту естественную защиту, что связано с недостаточным поступлением антител с молозивом матери или нарушением механизма абсорбции иммуноглобулинов молозива кишечником новорожденных. Гипериммунная сыворотка необходима также для купирования свежих очагов инфекции. В этой связи разработка гипериммунной сыворотки для специфической терапии и пассивной иммунопрофилактики анаэробной энтеротоксемии и эшерихиозной диареи телят является весьма актуальной.

Цель исследований – получение гипериммунной сыворотки против анаэробной      энтеротоксемии      и эшерихиозной диареи телят, изучение ее безвредности и лечебно-профилактической эффективности.

Материалы и методы. Работа проводилась в условиях лабораториипо изучению болезней молодняка ФГБУ «ФЦТРБ-ВНИВИ» и скотоводческих хозяйствах    Республики    Татарстан, неблагополучных поанаэробнойэнтеротоксемии           и эшерихиозной диареи телят.

Пригипериммунизациииспользовали инактивированные       антигены Cl.

perfringensсеротипов А, С, Д и E.coli, продуцирующих адгезивные антигены К99 и А20 при следующем соотношении их компонентов    в двух различных иммуногенах (в 1 л антигена):

• 1.    Антиген Cl. perfringens:

• -    анатоксин и соматический антиген штамма №28 (тип А) в культуральной среде с концентрацией 9∙10¹² - 10∙10¹²м.к. в 1 см³ -300,0 – 350,0см³;

• -    анатоксин и соматический антиген штамма №392 (тип С) в культуральной среде с концентрацией 9∙10¹² - 10∙10¹²м.к. в 1 см³ - 300,0 – 350,0см³;

• -    анатоксин и соматический антиген штамма №213 (тип Д) в культуральной среде с концентрацией 9∙10¹² - 10∙10¹²м.к. в 1 см³ - 300,0 – 350,0см³;

• -    формалин- 4,0 – 5,0см³.

• 2.    Антиген E. coli:

• -    соматический и адгезивный антиген штамма КВ-1 (К99) в физиологическом растворе с концентрацией 14∙10¹²  -

  15∙10¹²м.к. в 1 см³ - 300,0 – 350,0см³;

• -    соматический и адгезивный антиген штамма ПЗ-3 (А20) в физиологическом растворе с концентрацией 14∙10¹²  -

  15∙10¹²м.к. в 1 см³ - 300,0 – 350,0 см³;

• -    формалин - 4,0-5,0см³;

• -    термостабильные и термолабильные анатоксины штаммов E. coli КВ-1 и ПЗ-3 в культуральной среде с титрами в РДП 1:81:16 – до 1 литра.

Быков-продуцентов, предназначенных для гипериммунизации, карантинировали      и      подвергали исследованию и необходимой обработке против инфекционных болезней согласно действующей инструкции «О порядке заготовки и санитарной обработки животных, используемых для производства биопрепаратов». К эксплуатации допускали животных 18-24 месячного возраста живой массой 350-400 кг. Гипериммунизацию животных проводили по схеме, приведенной в таблице 1.

Таблица 1 - Схема гипериммунизации быков-продуцентов

Срок иммунизации, сут	Доза антигена, см3
	CI. perfringens	E. coli
1	8,0	8,0
14	10,0	10,0
28	15,0	15,0
42	20,0	20,0

При гипериммунизации антигены Cl. perfringens вводили подкожно в область шеи с одной стороны, эшерихиозный антиген подкожно с другой стороны шеи. Производственное взятие крови производили при наличии в сыворотке крови быков-продуцентов специфических антител к Cl. perfringens в титрах не менее

1:12800 в ИФА, к E. coli – не менее 1:1600 в РА, к термостабильному и термолабильному анатоксину E. coli– не менее 1:8 в РДП и при условии, если общая температура тела животных не превышала 39,50 С, а также после предварительной выдержки животных на голодной диете в течение 12 ч при неограниченном водопое.

Таблица 2 - Превентивные свойства гипериммунной сыворотки на белых мышах в реакции нейтрализации по отношению к Cl. perfringens и E. coli

Группа	Кол-во, гол.	Заражены бактериями	Результаты контроля
			Пало		Выжило
			к-во	%	к-во	%
Опытная.	10	Cl. perfringens,типА	0	0	10	100
Обработана	10	Cl. perfringens,типС	1	10	9	90
гипериммунной	10	Cl.perfringens,типД	1	10	9	90
сывороткой	10	E. coli К99	0	0	10	100
	10	E. coli А20	0	0	10	100
Контрольная.	10	Cl. perfringens,типА	8	80	2	20
Обработана	10	Cl. perfringens,типС	10	100	0	0
сывороткой,полу	10	Cl. perfringens,типД	8	80	2	20
ченной до	10	E. coliК99	7	70	3	30
иммунизации	10	E. coli А20	9	90	1	10
	10	Cl. perfringens,типА	10	100	0	0
Контрольная.	10	Cl. perfringens,типС	10	100	0	0
Сывороткой не	10	Cl. perfringens,типД	10	100	0	0
обработана	10	E. coliК99	10	100	0	0
	10	E. coli А20	10	100	0	0

Результаты исследований. В производственных условиях изготовлены 4 серии гипериммунной сыворотки в количестве 115 литров. Превентивные свойства гипериммунной сыворотки изучали на 100 белых мышах массой 14-16 г, разделенных на 2 группы по 50 гол в каждой. Мышей 1-ой группы иммунизировали гипериммунной сывороткой, полученной от быков-продуцентов, мыши 2-ой группы служили контролем, т.е. сыворотка им не вводилась. Свежеприготовленную сыворотку, взятую в равном объеме от пяти быков, вводили мышам 1-ой группы подкожно в дозе 0,5 см3. Заражение мышей проводили внутрибрюшинно через 24 ч после введения сыворотки подтитрованными смертельными дозами E. coli (К99 и А20) и Cl. perfringens(серотипы А, С, Д). Результаты этих исследований представлены в таблице 2.

Данные таблицы 2 показывают, что гипериммунная сыворотка крови обладает высокими превентивными свойствами по отношению к бактериям Cl.perfringens и E. coli – защищает 90-100% мышей после заражения их летальными дозами этих бактерий.

Оценку лечебно-профилактической эффективности сыворотки проводили в ООО «Среднее Девятово» и ООО «Ак Барс Агро», неблагополучных поанаэробнойэнтеротоксемии и эшерихиозной диареи телят. С профилактической целью новорожденным телятам сыворотку вводили внутримышечно дозе 2 см3, с лечебной целью - в дозе 2,5 см3 на 1 кг массы тела. При тяжелом течении болезни сыворотку вводили повторно через 1-3 дня в тех же дозах внутрибрюшинно. Суточную лечебную дозу сыворотки вводили в 2 приема с интервалом 6 часов. Результаты производственного испытания сыворотки представлены в таблицах 3 и 4.

Таблица 3 - Результаты испытания профилактической эффективности гипериммунной сыворотки

Хозяйство	Группа жив-х	Кол-во жив-х	Заболело		Пало
			кол-во	%	кол-во	%
ООО «Среднее	опытная	85	22	25,9	2	2,35
Девятово»	контрольная	63	51	81,0	9	14,3
ООО «Ак Барс Агро»	опытная	128	41	32,0	9	7,03
	контрольная	139	116	83,5	26	18,3
Всего	опытная	213	63	29,6	11	5,7
	контрольная	202	167	82,7	35	17,3

Таблица 4 - Результаты испытания лечебной эффективности гипериммунной сыворотки

Хозяйство	Группа жив-х	Кол-во жив-х	Выздоровело		Пало
			кол-во	%	кол-во	%
ООО «Среднее	опытная	47	45	95,7	2	4,3
Девятово	контрольная	25	22	88,0	3	12,0
ООО «Ак Барс Агро»	опытная	68	62	91,2	6	8,8
	контрольная	67	51	76,2	16	23,8
Всего	опытная	115	107	93,0	8	7,0
	контрольная	92	73	79,4	19	20,6

Из данных таблиц 3 и 4 следует, что гипериммунная сыворотка обладает выраженными лечебными и профилактическими свойствами. Так, например, в группе телят, обработанной гипериммунной сывороткой, заболело всего 29,6%, пало 5,7% телят, тогда как в контрольной (интактной) группе эти показатели составили 82,7% и 17,3% соответственно. При этом сохранность телят в опытной группе составила 94,3% против 82,7% в контрольной группе. Применение сыворотки в лечебных дозах позволило вылечить 93,0% больных телят, тогда как в контрольной группе, где в качестве лечебных средств применялись только антибиотики, сохранность телят составила лишь 79,4%, что на 13,6% ниже, чем в опытной группе.

На основании результатов проведенных исследований для внедрения в ветеринарную практику предложен «Способ получения гипериммунной сыворотки против анаэробной энтеротоксемии и эшерихиозной диареи телят» (Патент РФ по заявке № 2013124364 от 27.05.2013 г.).

Заключение. Изготовлена и эшерихиозной диареи телят. Применение ее испытана в лабораторных и в стационарно неблагополучных пунктах производственных условиях позволяет значительно снизить гипериммунная сыворотка против заболеваемость и гибель телят, тем самым анаэробной энтеротоксемии и повышая их сохранность.

ЛИТЕРАТУРА: 1. Казимир А.Н. Эпизоотология, этиология, фаготерапия и специфическая профилактика анаэробной энтеротоксемии телят в хозяйствах Ульяновской области : автореф. дис…канд.вет.наук / А.Н. Казимир. – Казань, 1997. – 22 с.2. Куриленко А.Н. Бактериальные и вирусные болезни молодняка с.-х. животных / А.Н.Куриленко, В.Л.Крупальник, Н.В. Пименов. - М.: КолосС, 2005. - С. 84-91. 3. Патент РФ на изобретение №2428202. Вакцина ассоциированная против анаэробной энтеротоксемии и эшерихиозной диареи телят / Г.Н.Спиридонов, А.А.Иванов, Х.Н.Макаев, М.Т.Хурамшина, А.Г. Спиридонов, Э.Р.Галиуллина; заявитель и патентообладатель ФГБУ «ФЦТРБ-ВНИВИ»; опубл. 10.09.2011, Бюл. №25. 4. Салимов В.А. Некоторые особенности патологоанатомической диагностики анаэробной энтеротоксемии телят, вызванной Cl. perfringensтипа А / В.А.Салимов, Н.П.Салимова // Актуальные проблемы болезней молодняка в современных условиях: Матер. науч.-практ. конф. - Воронеж, 2002. - С. 527-528. 5. Спиридонов Г.Н.

Инфекционнаяэнтеротоксемия молодняка сельскохозяйственных животных в регионе Среднего Поволжья и Предуралья / Г.Н. Спиридонов, А.Ф. Махмутов, М.Т. Хурамшина, А.Г. Спиридонов // Актуальные вопросы ветеринарной медицины Сибири: Матер. науч.-практ. конф. – Краснообск, 2010. – С. 134-139.

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЛЕЧЕБНО-ПРОФИЛАКТИЧЕСКОЙ СЫВОРОТКИ ПРОТИВ АНАЭРОБНОЙ ЭНТЕРОТОКСЕМИИ И ЭШЕРИХИОЗНОЙ ДИАРЕИ ТЕЛЯТ

Спиридонов А.Г., Юсупов Р.Х., Насертдинов Д.Д., Спиридонов Г.Н., Махмутов А.Ф.

Резюме

Разработана гипериммунная сыворотка против анаэробной энтеротоксемии и эшерихиозной диареи телят. Изучена ее эффективность в лабораторных и производственных условиях.

THE METHOD OF PRODUCING MEDICAL AND PROPHYLACTIC SERUM AGAINST

ANAEROBICENTEROTOXAEMIAAND ESCHERICHIA DIARRHEA IN CALVES

Spiridonov A.G., Ysupov R.Kh., Nasertdinov D.D., Spiridonov G.N., Makhmutov A.F. Summary

It has developed hyperimmune serum against anaerobic enterotoxaemia and escherichia coli diarrheas of calves. It has investigated serum’s effectiveness in laboratory and production conditions.