Сравнительная эффективность методов диагностики лейкоза крупного рогатого скота

На текущем этапе борьбы с лейкозом у животных ключевым фактором в профилактике и оздоровлении является своевременная и точная диагностика этой инфекции. В настоящее время единственным способом излечения стада является уничтожение заражённых животных. Важно отметить, что чем быстрее такие особи будут изолированы, тем меньше вероятность распространения вируса [2, 5].

Характерной особенностью инфекции крупного рогатого скота является образование специфических антител, которые обнаруживаются в крови через 2-8 недель после заражения животных и остаются в организме инфицированных особей на всю жизнь. Поэтому серологические методы исследования в настоящее время составляют основу прижизненной диагностики лейкоза крупного рогатого скота. Согласно стандартам, Международного Эпизоотического Бюро (МЭБ), основными методами диагностики лейкоза крупного рогатого скота являются реакция иммунодиффузии в геле агара (РИД) и иммуноферментный анализ (ИФА) [1, 8].

В дополнение к серологическим методам, в настоящее время в диагностике лейкоза КРС также широко используется полимеразная цепная реакция (ПЦР) в качестве индикатора инфицированности животных, а также определение уровня провирусной нагрузки [4,7].

Целью научных исследований являлось изучение диагностической эффективности различных методов, таких как РИД, ИФА и ПЦР.

Материал      и      методы исследований. Исследования были проведены на базе Государственного бюджетного учреждения Республиканской ветеринарной лаборатории Республики Татарстан. В рамках исследования были проанализированы более 300 образцов сыворотки крови коров, полученных из хозяйств Республики Татарстан, при помощи       методов       реакции иммунодиффузии и иммуноферментного анализа. Реакцию иммунодиффузии осуществляли с использованием "Набора для серологической диагностики лейкоза крупного рогатого скота", произведённого Курской биофабрикой – "БИОК".

Постановка    ИФА    анализа осуществлялась в строгом соответствии с инструкцией, предусмотренной для "Набор для выявления антител к вирусу лейкоза крупного рогатого скота в сыворотке крови и молоке иммуноферментным методом (Вариант № 1-скрининг)", разработанный    и    представленный компанией Курская биофабрика – "БИОК"

Постановка ПЦР выполнялась по следующему протоколу. Приготовление ПЦР-смесей (на 1 образец) осуществляли по представленной ниже прописи: 2 мкл 10-ти кратного ПЦР-буфера, 2 мкл 2,5 мМ раствора нуклеозидтрифосфатов, 2 мкл 25 мМ раствора магния хлорида, по 1 мкл 10 рМ            прямого            (5’-

GGCACCGGGTCTCGCAAGTATG-3'), обратного                              (5'-

CGGTTAGGCTGGTCATGTGGCC-3') праймеров и зонда типа TaqMan (ROX-AAACACTACGACTTGCAATCTTACAGG

CCGAC-RTQ2) (праймеры и зонд патент RU 2644233 C2), 1 мкл Taq-полимераза (5 ед.акт./мл), 10 мкл исследуемого образца ДНК. Общий объём реакционной смеси – 20 мкл. Постановка ПЦР осуществлялась по следующей программе: 1 повтор (95 °C -5 мин); 5 повторов (95 °C - 30 с., 60,5 °C -30 сек), 40 повторов (95 °C - 30 с., 60,5 °C -30 сек). Детекция результатов осуществлялась по каналу ROX при температуре «отжига» праймеров (60,5 °C)

[3, 6].

Результат исследований. Из общего количества исследуемых проб методом случайной выборки было отобрано 15 положительных и 15 отрицательных в РИД проб сыворотки крови, которые были исследованы методам ИФА на обнаружение противолейкозных антител. Пробы крови от этих же коров были исследованы в ПЦР. Результаты исследований представлены в таблице 1.

Таблица 1 – обнаружение противолейкозных антител

Результаты исследования показывают, что из 15 проб положительных в РИД 4 пробы (26,6 %) в ИФА были отрицательные. Эти же пробы показали отрицательный результат и в ПЦР.

Из 15 проб отрицательных в РИД 3 пробы (20 %) в ИФА были положительные, те же самые пробы были положительны и в ПЦР. Кроме того, в ПЦР обнаружен вирус ещё в 2-х пробах.

Заключение. Проведенные исследования по сравнительному изучению эффективности методов диагностики лейкоза крупного рогатого скота, показали, что эффективность методов ИФА и ПЦР в диагностике лейкоза у инфицированных ВЛКРС коров одинаковая и при этом выше не менее чем на 20-25 % по сравнению с РИД исследованиями.

Однако, нужно отметить, что эффективность ПЦР анализа самая высокая в диагностике лейкоза в неблагополучных хозяйствах по выявлению инфицированных ВЛКРС животных и не выявленных серологическими методами.

На основании полученных результатов можно сказать, что серологические методы вполне пригодны в широкомасштабных исследованиях по диагностике лейкоза, однако на стадии оздоровления хозяйства, большей эффективностью обладает ПЦР анализ.

Изучение этих методов имеет важное значение для определения наиболее точного и быстрого способа выявления инфекции, что в свою очередь способствует эффективной борьбе с заболеванием и предотвращению его распространения в стадах крупного рогатого скота.