Сравнительная оценка биохимического статуса крови при лейкозе и лейкоз-бруцеллезной инфекции крупного рогатого скота

Лейкоз крупного рогатого скота – серьезная проблема для скотоводства Республики Казахстан, где, как и в ряде других стран мира, где не внедрены крупномасштабные программы ликвидации, у данной болезни достаточно широкое распространение [1–5]. Вирусная инфекция приводит к значительным экономическим потерям вследствие ряда причин: снижения производства молока, высокого уровня инфекционных осложнений, а также неэффективности репродуктивной функции [6–8].

Известно, что развитие лейкозного процесса происходит на фоне глубоких нарушений иммунных механизмов, особенно параметров клеточной системы [9–11]. Однако инфекционно-воспалительные осложнения, достаточно часто возникающие у инфицированных ВЛКРС животных, вносят разнообразие в течение болезни, вызывая, прежде всего, иммунодепрессивное состояние организма, а в некоторых случаях иммуностимулирующий эффект [12].

По результатам некоторых исследователей [13–14] отмечено: наряду с дефектами иммунитета происходит снижение уровня обменных процессов у зараженного вирусом лейкоза крупного рогатого скота (ВЛКРС) и больных лейкозом животных. Однако в этих работах не затрагиваются вопросы ассоциативного течения лейкоза с другими инфекционными болезнями. В этой связи отдельный интерес представляет изучение особенностей изменений биохимических показателей крови у крупного рогатого скота при лейкозе, осложненном бактериальной инфекцией.

Материал и методы исследований

Для исследований были использованы коровы красной степной и голштино-фризской породы разных хозяйств Северо-Казахстанской области Республики Казахстан.

Вирусоносительство ВЛКРС у коров определялось реакциями иммунодиффузии в геле агара – РИД (производство ФКП «Курская биофабрика – фирма «Биок», Россия), иммуноферментного анализа – ИФА (производство компании ID Vet, Франция) и непрямой иммунофлуоресценции – РНИФ; при диагностике бруцеллеза использовали ИФА (производство компании AniGen, Корея), роз бенгал пробу (РБП), реакции агглютинации (РА) и связывания комплемента (РСК) с единым антигеном (производство НПП «Антиген», Республика Казахстан) и РНИФ. При диагностике других бактериальных инфекций применяли ИФА (паратуберкулез, хламидиоз) с использованием коммерческих наборов компании ID Vet, а также РНИФ (хламидиоз, анаплазмоз, кампило-бактериоз и Ку-лихорадка).

Все реакции выполнены в соответствии с инструкцией по применению диагностических наборов для обнаружения специфических антител в сыворотке крови.

Учет и интерпретацию результатов иммуноферментного анализа осуществляли с помощью ИФА анализатора Multiscan FX («Thermo Scientific»). Исследования сыворотки крови – на полуавтоматическом биохимическом анализаторе Stat Fax 4500 (США) с помощью наборов реагентов производства ТОО «ДиАКиТ» (Республика Казахстан) и АО «ДИАКОН-ДС» (Россия) в соответствии с инструкциями по их применению.

Полученные данные были подвергнуты статистической обработке с определением средних арифметических (M) и расчетом ошибок средних арифметических (m). При оценке достоверности различий (р) между двумя средними величинами Мх и Му использовали t-критерий Стьюдента. Различия результатов считали статистически достоверными при уровне значимости р ≤ 0,05.

Результаты исследований и их обсуждение

На начальном этапе исследований сыворотки крови от 50 голов крупного рогатого скота, имеющих антитела к вирусу лейкоза, выявленных одновременно с помощью РИД, ИФА и РНИФ, были подвергнуты диагностическому тестированию на ряд других инфекционных болезней. Результаты представлены в табл. 1.

По данным табл. 1: чаще всего носительство ВЛКРС сочеталось с бруцеллезной инфекцией. Так, в общей сложности специфические антитела выявлены в 23 пробах сывороток крови (46%), из них 19 имели положительную реакцию в РБП, РСК, РА, ИФА и РНИФ, 3 – только в РБП и РНИФ и одна – в РА, ИФА и РНИФ. Отметим, что в двух пробах, помимо бруцеллезных антител, обнаружены хламидиозные.

Помимо этого с помощью ИФА и РНИФ установлено, что еще в 17 исследуемых сыворотках крови обнаружены антитела к другим бактериальным болезням, особенно можно выделить хламидиоз. Специфические антитела к этой бактериальной инфекции выявлены в 10 пробах (20%), из них в 5 положительную реакцию наблюдали в ИФА, в 9 – в РНИФ и в 4 – одновременно в ИФА и РНИФ. Необходимо отметить, что в четы- рех из 5 случаев, когда специфические антитела по результатам исследований в ИФА отсутствовали, но были идентифицированы с помощью РНИФ, параллельно выявлено носительство других бактериальных инфекций. Как уже было сказано выше, в двух пробах, наряду с хламидиозными антителами, определены бруцеллезные и по одной – анаплазмозные и кампилобактериозные.

Таблица 1 Результаты комплексных диагностических исследований сыворотки крови носителей ВЛКРС

Наименование диагностируемой инфекции (n = 50)	Выявленные антитела, пробы (%)
	ИФА	РНИФ	ИФА+РНИФ	РБП	РА	РСК
Бруцеллез	19 (38)	23 (46)	19 (38)	22 (44)	20 (40)	19 (38)
Хламидиоз	5 (10)	9 (18)	4 (8)	–	–	–
Паратуберкулез	6 (12)	–	–	–	–	–
Кампилобактериоз	–	4 (8)	–	–	–	–
Анаплазмоз	–	2 (4)	–	–	–	–
Ку-лихорадка	–	0	–	–	–	–

На следующем этапе исследований отобрали 30 коров, разделив их на три группы. Первую группу составили клинически здоровые животные (n = 10), при диагностических исследованиях на лейкоз и бактериальные инфекции специфические антитела отсутствовали (контроль). Вторая группа сформирована из 10 голов крупного рогатого скота, у которых, по результатам диагностических исследований на лейкоз с помощью РИД, ИФА и РНИФ, установлена положительная реакция (носители ВЛКРС). Третья тоже образована из 10 инфицированных ВЛКРС животных, но, в отличие от второй группы, у них, по результатам тестирования на бруцеллез, регистрировались положительные реакции в РБП, РА, РСК, ИФА и РНИФ.

У животных всех групп определены биохимические показатели крови. Результаты представлены в табл. 2.

Таблица 2

Результаты биохимических исследований сыворотки крови крупного рогатого скота при лейкоз-бруцеллезной инфекции, М ± m

Биохимический показатель, ед. измерения	Группа животных
	Здоровые	Носители ВЛКРС	Лейкоз-бруцеллезная инфекция
Общий белок, г/л	71,80 ± 1,70	66,10 ± 6,00	82,10 ± 5,20
Альбумины, г/л	38,10 ± 1,40	23,90 ± 1,50**	63,30 ± 3,50**
Мочевина, ммоль/л	4,90 ± 0,70	4,70 ± 0,50	5,50 ± 0,80
Мочевая кислота, мкмоль/л	63,70 ± 6,90	73,80 ± 5,90	67,20 ± 4,40
Холестерин, ммоль/л	3,60 ± 0,30	3,00 ± 0,40	4,90 ± 0,50*
Глюкоза, ммоль/л	2,80 ± 0,10	2,80 ± 0,10	3,00 ± 0,30
Кальций, ммоль/л	2,70 ± 0,10	1,90 ± 0,10**	2,40 ± 0,10*
Фосфор, ммоль/л	1,50 ± 0,10	2,30 ± 0,20*	1,50 ± 0,10
Магний, ммоль/л	5,10 ± 0,70	4,00 ± 0,70	4,90 ± 0,70
Железо, ммоль/л	34,80 ± 1,80	33,40 ± 1,90	32,50 ± 1,60

Примечание . *р < 0,05; **р < 0,01.

При анализе показателей белкового обмена установлена неодинаковая траектория изменений параметров у КРС опытных групп относительно контроля. Так, если у носителей ВЛКРС наблюдалось снижение в сыворотке крови концентрации общего белка и альбуминов, то у животных, одновременно бруцелло- и вирусоносителей, напротив, отмечено увеличение их содержания.

Наиболее выраженные различия выявлены в количестве альбумина. В частности, показатель значительно возрастал при ассоциативном течении вирусной инфекции до 63,30 ± 3,50 г/л против 38,10 ± 1,40 г/л (р < 0,01) у здоровых животных, тогда как у инфицированных ВЛКРС он с высокой степенью достоверности уменьшался до 23,90 ± 1,50 г/л.

Аналогичная траектория изменений обнаружена у животных опытных групп по сравнению с контрольной в содержании мочевины и холестерина, однако только концентрация последнего показателя достигала достоверной разницы у коров с лейкоз-ассоциированной инфекцией (4,90 ± 0,50 ммоль/л), против 3,60 ± 0,30 ммоль/л (р < 0,05) у здорового крупного рогатого скота.

Содержание глюкозы и мочевой кислоты в сыворотке крови существенно не изменилось, хотя наблюдалась некоторая тенденция их увеличения у коров обеих опытных групп.

При анализе биохимических параметров также выявлены отклонения в минеральном обмене: достоверное снижение уровня общего кальция до 1,90 ± 0,10 ммоль/л у носителей ВЛКРС против 2,70 ± 0,10 ммоль/л (р < 0,01) в контрольной группе на фоне заметного увеличения концентрации неорганического фосфора (соответственно: 2,30 ± 0,20, 1,50 ± 0,10 ммоль/л; р < 0,05). Тенденция существенного уменьшения содержания общего кальция также прослежена при ассоциативном проявлении лейкозной инфекции, однако разница заключалась в том, что количество неорганического фосфора оставалось неизменным.

Концентрация магния и железа в сыворотке крови КРС опытных групп относительно идентичных показателей здоровых коров имеет направленность к снижению, не достигающему достоверной разницы.

Заключение

На основании полученных результатов можно констатировать: ассоциированное течение лейкозной инфекции наиболее часто протекает с возбудителями бактериальных инфекций: бруцеллезом, хламидиозом, паратуберкулезом и кампилобактериозом.

Для биохимического статуса крови инфицированного ВЛКРС характерно снижение интенсивности белкового, жирового и минерального обменов. Особенно следует выделить достоверные изменения, сопровождающиеся снижением концентрации альбуминов, а также кальция на фоне значительного увеличения содержания неорганического фосфора. Ассоциативное течение лейкозной инфекции с бруцеллезом, отмеченное нами у 46% носителей вируса лейкоза, напротив, сопровождалось усилением интенсивности белкового и жирового обменов, об этом свидетельствовало достоверное повышение уровня альбуминов и холестерина.

S.T. Baiseitov1, V.S. Vlasenko1, 2, M.A. Bazhin1

• ¹Omsk State Agrarian University named after P.A. Stolypin, Omsk

• ²Omsk Agrarian Scientific Center, Omsk

Comparative evaluation of the biochemical blood profile in the presence of bovine leukemia and leuko-brucella infection