Сравнительная тезиографическая оценка биологических жидкостей при интоксикации животных ивермектином и фармакокоррекции в условиях эксперимента

Введение. Диагностика отравлений животных пестицидами, как правило, строится на анамнезе, анализе клинической картины, результатах патолого-анатомического и химикотоксикологического исследований с обнаружением остаточных количеств токсикантов в тканях животных [1, 2]. Вместе с тем физикохимические и реологические свойства биологических жидкостей являются важными индикаторами постоянства внутренней среды организма. Доказано, что кровь, моча, секреты потовых, слезных, слюнных желез и другие биожидкости представляют собой сложные биополимеры, находящиеся в жидкокристаллическом состоянии [3, 4]. Такие структуры высокочувствительны к воздействию как эндо-, так и экзогенных факторов. При этом воздействие таких неблагоприятных факторов, как электромагнитные поля, перепады температур, химические вещества даже в низких концентрациях, способны привести к изменению кристаллических форм [5]. Кристаллохимические свойства биологической среды изменяются при физиологических сдвигах, а также различных патологических состояниях организма [6]. Тезиографическое исследование является одним из методов прижизненной диагностики отравлений. Оно позволяет судить о токсическом воздействии на организм различных ксенобиотиков, опираясь на изменения основных параметров кристаллогенеза биологических жидкостей: форму, структуру, рост и расположение кристаллов [7]. Информативен этот метод и в отношении оценки эффективности применяемых схем лечения [5].

Цель исследования . Провести сравнительную тезиографическую оценку мочи и сыворотки крови лабораторных животных при острой интоксикации ивермектином и фармакокоррекции.

Материалы и методы исследования. В эксперименте использовали 30 белых беспородных половозрелых крыс (самцов и самок), подобранных по принципу аналогов. Животные с массой тела 260±20 г были разделены на 3 группы (две опытные и одну контрольную). Крысы опытных групп подвергались однократной обработке противопаразитарным препаратом на основе ивермектина с торговым названием Баймек® (ФГБУ «ВНИИЗЖ», г. Владимир) в токсической дозе 40 мг/кг по действующему веществу. Препарат вводили, согласно инструкции, подкожно в область предплечья. Животным второй опытной группы после введения Байме- ка для коррекции нежелательных эффектов были назначены следующие препараты:

• 1.    Азоксивет (ООО «АВЗ С-П», г. Сергиев Посад) в дозе 0,5 мг/кг подкожно 1 раз в день в течение 5 дней.

• 2.    Полисорб ВП (АО «Полисорб», г. Копейск) в дозе 200 мг/кг перорально с водой 1 раз в день в течение 5 дней.

• 3.    Лазикс^® (Санофи Индия Лимитед, Индия) в дозе 1 мг/кг/сут внутримышечно в течение 2 дней после введения Баймека.

Препараты для фармакокоррекции были выбраны с учетом описанных ранее нежелательных эффектов ивермектина [8, 9].

Контрольная группа была сформирована из интактных животных, не подвергавшихся никаким манипуляциям.

Объектом сравнительного тезиографическо-го исследования служили моча и сыворотка крови животных. Для микроскопии из образцов биологических жидкостей от животных каждой группы были изготовлены препараты по типу «высушенной капли». Для инициации кристаллообразования использовали 10%-й раствор натрия хлорида [10]. Тезиографическую оценку проводили с помощью микроскопа Альтами БИО (Россия) не позднее чем через 24 часа после полного высыхания образцов. Структуру поверхности и ячеистость микропрепаратов оценивали при увеличении ×40, форму и характер роста кристаллов – при увеличении ×60.

Результаты исследования и их обсуждение. Клиническая картина острой интоксикации Баймеком у животных опытных групп характеризовалась признаками угнетения нервной системы: в течение 15–20 минут после введения препарата крысы сидели неподвижно, преимущественно забившись в угол клетки, отмечалась замедленная реакция на звуковые и тактильные раздражители. Дыхание учащенное, аритмичное. Волосяной покров животных был взъерошен. В период наблюдения животные не проявляли интерес к корму и воде. Первые акты гру-минга у животных появились через 30 минут после введения противопаразитарного препарата. Диурез, отсутствовавший у крыс сразу после интоксикации, восстановился у животных первой опытной группы в течение получаса, у животных второй опытной группы, получавших препараты для фармакокоррекции, первый акт мочеиспускания появился на 10–15 минут раньше.

Клинический статус интактных животных за период наблюдений не изменился и соответствовал физиологической норме.

При оценке подготовленных микропрепаратов сыворотки крови (ув. ×40) было установлено, что образцы контрольной группы имеют выраженное крупноячеистое строение. Заметно разделение на 3 зоны: краевую, промежуточную и центральную. Краевая зона узкая, бледно-молочного цвета, представлена преимущественно аморфным веществом (рис.1, A).

A

B

C

Рис. 1. Кристаллическая структура образцов сыворотки крови крыс, ув. ×40: A – контроль; B – острая интоксикация; C – фармакокоррекция после интоксикации

В промежуточной зоне в центре каждой ячейки наблюдаются одиночные скопления аморфного вещества правильной округлой формы, вокруг которых рост кристаллов происходит по типу «наслоения» или «налипания». Кристаллы в центральной части при увеличении

×60 имеют линейный рост с большим количеством папоротниковидных ответвлений.

В отличие от контрольной группы в образцах сыворотки крови животных с острой интоксикацией зона краевого роста достаточно широкая, имеет более темный кремовый оттенок. На поверхности микропрепаратов в краевой и промежуточной зонах отмечается наличие небольшого количества разломов, но ячеистое строение отсутствует (рис. 1, B). В центральной зоне – поверхность мелкоячеистая (ув. ×40). Кристаллы промежуточной зоны крупные, имеют вытянутую листовидную форму с зубчатым краем (ув. ×60).

Краевая зона образцов сыворотки крови животных, получавших препараты для коррекции, свободна от кристаллов, хорошо визуализируется без микроскопии (см. рис. 1, С). Ее цвет в сравнении с препаратами первой опытной группы более светлый, с молочным оттенком (см. рис. 1, В, С). Центральная и промежуточная зоны не имеют четкой границы деления (ув.

×40), так как кристаллы этих зон многочисленны и имеют сплошной рост в виде папоротниковидных лучей, близких по строению к кристаллам контрольной группы (ув. ×60). Поверхность микропрепарата центральной зоны имеет среднеячеистое строение, размер ячеек также приближен к образцам контрольной группы. Разломы поверхности единичны либо отсутствуют. На внешней границе промежуточной зоны по всей окружности располагаются кристаллы, имеющие ворсинчатое строение (рис. 1, С). Это является отличительной особенностью кристалло-генеза сыворотки крови животных с фармакокоррекцией.

При микроскопии препаратов мочи (ув. ×40) было установлено, что деление на зоны в образцах всех трех групп отсутствует. Отмечается равномерный рост кристаллов по всей поверхности микропрепаратов. При этом кристаллообразование наиболее выражено в моче животных после введения Баймека (рис. 2).

A

B

C

Рис. 2. Кристаллическая структура образцов мочи крыс, ув. ×40:

A – контроль; B – острая интоксикация; C – фармакокоррекция после интоксикации

Микроскопия с использованием увеличения ×60 показала, что кристаллы мочи контрольной группы имеют вытянутое строение с палочковидными ответвлениями, рост которых происходит под прямым углом. Встречаются мелкие одиночные кристаллы четырехугольной формы, представленные в основном кристаллообразующим веществом. По краям микропрепарата располагаются крупные кристаллы неправильной многоугольной формы.

Кристаллы мочи у животных с острой интоксикацией растут из одной точки роста радиально и имеют форму пера. Отдельные кристаллы имеют форму четырёх- и пятилепесткового цветка.

Кристаллы образцов мочи крыс с фармакокоррекцией имеют схожую конфигурацию с кристаллами контрольной группы, они палочковидные, но отличаются более утолщенной формой ответвлений.

Заключение. При изучении процессов кристаллообразования в биологических жидкостях у животных трех групп установлены видимые различия в структуре кристаллов и общем рисунке поверхности образцов.

Микропрепараты сыворотки крови животных после интоксикации препаратом Баймек, в от- личие от сыворотки крови контрольной группы, имеют более широкую однородную краевую зону с одиночными разломами и мелкоячеистое строение центральной зоны.

Кристаллический рисунок образцов сыворотки крови животных с фармакокоррекцией занимает промежуточное положение между образцами контрольной и первой опытной групп. От сыворотки крови интоксицированных животных он отличается выраженной краевой зоной, представленной аморфным веществом, и ворсинчатым ростом кристаллов по внешнему краю промежуточной зоны. Последняя особенность характерна для образцов сыворотки крови, полученной только от животных, в группе которых проводилась коррекция. Рост кристаллов и ячеистость в центральной зоне имеют сходство с сывороткой крови контрольной группы, но не идентичны ей полностью.

Микропрепараты образцов мочи животных с острой интоксикацией отличаются от контрольных образцов преимущественно перьевидной формой кристаллов, в то время как кристаллы мочи животных с фармакокоррекцией палочковидные, в чем прослеживается их сходство с кристаллами образцов мочи контрольной группы.