Сравнительное действие рекомбинантных иммунокорректоров на некоторые клеточные маркеры крови у лактирующих коров при реактивных артритах

В современных условиях ведения молочного животноводства на промышленной основе резко возросло количество случаев патологии суставов у высокопродуктивных лактирую-щих коров [1]. Этиология реактивных артритов, в основном, связана с переболеванием коров вирусными респираторными заболеваниями с последующим возникновением аутоиммунного асептического процесса поражения суставов [2]. В терапии животных при реактивных артритах возникает ряд проблем, таких как быстрое развитие воспалительного процесса, высокая антигенная поствакцинальная нагрузка на организм животных и низкая эффективность методов лечения суставов. В среднем продолжительность лечения коров составляет 30-45 дней. Часто больных лактирующих коров выбраковывают из-за резкого снижения продуктивности и сложности лечения [3].

Важное значение в развитии аутоиммунного процесса и поражения сустава играют мат-риксные металлопротеиназы-цинкосодержащие эндопептидазы, способные гидролизировать белки внеклеточного матрикса и разрушать суставной хрящ. Продуцировать матриксные металлопротеиназы способны нейтрофилы. моноциты, лимфоциты, фасциоциты, фибробласты, хондроциты, остеокласты, некоторые типы эпителиальных и эндотелиальных клеток [4]. Матричные металлопротеиназы способны вызывать дисбаланс в широком спектре биологических реакций и участвовать в ряде аутоиммунных нейродегенеративных, воспалительных и сосудистых патологических процессах. Учитывая важное физиологическое и патогенетическое значение матричных металлопротеиназ, исследование их возможных ингибиторов остается важной задачей в перспективе создания лекарственных препаратов замедляющих процесс разрушения хряща и деструкцию сустава [5].

Целью нашей работы являлось изучение сравнительного действия рекомбинантного колицина Е2 (RCol Е2) и рекомбинантного интерферона бычьего (IRB – recombinant interferon boine) на некоторые клеточные маркеры крови при лечении реактивных артритов у лактирующих коров.

Материалы и методы

Изучение сравнительного действия RecColE2 и IRB на некоторые клеточные маркеры при реактивных артритах проводили на трех группах голштинизированных коров черно-пестрой породы в возрасте 2-4 лет по восемь голов в каждой группе. Коровы находились в первой половине лактации. Первая (контрольная группа) состояла из здоровых животных. Вторая и третья группы (подопытные) группы состояли из коров с симптомами реактивного артрита путового и заплюсневого суставов. Коровам подопытных групп в течение 14 дней через сутки проводили пункцию пораженных суставов с аспирацией экссудата, затем промывали полость сустава 300-500 мл 0,5%-м раствором новокаина с антибиотиками (по 500 тыс. ЕД бензилпенициллина и стрептомицина сульфата). Кроме того, всем подопытным коровам провели пятидневный курс инъекций кетопрофа (ООО НПК «Асконт плюс», Россия) по 3 мл на 100 кг массы и 0,4% дексавета (ООО «Белкаролин», Беларусь). Коровам второй подопытной группы вводили IRB-интерферон рекомбинантный бычий (ООО «Научно-производственный центр БелАгроГен», Беларусь) в дозе 1,0 мл на 10 кг массы внутримышечно в сутки в течение 7 суток с 24-часовым интервалом. Животным третьей подопытной группы вводили RColE2 внутримышечно в дозе 10 мл (10 мг/мл) на голову один раз в сутки в течение 7 суток с 24-часовым интервалом [6].

Исследование крови на некоторые клеточные маркеры у всех коров трех групп проводили на 1-е и 20-е сутки.

Количество лейкоцитов, С-реактивный белок (C reacive protein – CRP) в крови и фагоцитарный индекс определяли в соответствии с утвержденными методиками [7].

Количество сурфактантного белка А (Surfactant protein A – SP-A) и матриксной ме- таллопротеиназы 3 (Matrix metelloproteinase-3 – MMP3) в крови животных определяли методом иммуноферментного анализа диагности-кумами Clon Cloud Со (США) и Cusabio Biotech Co (Китай) на иммуноферментном анализаторе Zenyth 340 («Anthos»).

Уровень интерферона бета (Interferon beta – If β) и интерлекина 6 (Interleukin 6 – Il-6) в крови определяли методом ИФА диагности-кумами Clon Cloud Со (США).

Статистическую обработку данных проводили по программе Statistica [8].

Результаты и обсуждения

Установили, что реактивные артриты у лактирующих коров в подопытных группах возникали, в основном, через 8-10 суток после перенесенных инфекционного ринотрахеита, парагриппа и вирусной диареи. Реактивные артриты представляли собой аутоиммунное воспаление. клинически выраженное припухлостью, повышением температуры и болезненностью в области путового и заплюснево-го суставов. В результате воспаления уровень белка острой фазы CRP в крови животных 2-й и 3-й групп повышался с 8,2±0,54 (контроль), соответствено, до 56,8±0,84 и 52,6±0,78 мг/л. Повышения количества лейкоцитов в крови коров подопытных групп не наблюдалось. В крови больных животных 2-й и 3-й групп отмечали повышение SP-A в 8,8 раза (табл. 1).

Таблица 1. Сравнительное действие рекомбинантного колицина Е2 на некоторые клеточные маркеры при реактивных артритах у лактирующих коров.

* P<0,05 –по отношению к контролю на 1-е сутки;

** P<0,05 – на 20-е сутки по отношению к 1-м суткам.

Учитывая, что SP-A является одним из ос-    ных и аллергических процессов в дыхатель- новных регуляторов в патологии инфекцион-    ных путях, SP-A выступает в качестве цен- трального звена взаимодействия с цитокинами IF-β и IL-6, стимулируя пролиферацию фагоцитов и активацию продукции ММР-3 [9, 10]. Увеличение ММР-3 в крови с 15,8±0,6 (контроль) до 714,6±1,8 нг/мл (опыт, 3 группа) подтверждало вышеуказанный процесс, клинически приводящий к образованию экссудата и разрушению внеклеточного матрикса хряща суставов. На первые сутки у подопытных животных отмечали снижение фагоцитарного индекса, что указывало на асептический процесс поражения суставов. В крови больных коров повышалось количество IL-6-ключевого медиатора выработки острофазных белков и основного пирогена при аутоиммунных процессах (табл. 1). Организм больных животных пытался компенсировать воспаление суставов в острой фазе усиленной выработкой IF-β, способного уменьшать пролиферацию и повышать супрессорную активность мононуклеарных клеток периферической крови. Многократное увеличение уровня IF-β в крови коров подопытных групп отражало течение воспалительного процесса (табл. 1).

На 20-е сутки отмечали выздоровление коров в подопытных группах после проведенного лечения. У них не наблюдали признаков хромоты, бурситов, припухлости суставов, болевых ощущений. В крови подопытных животных отмечали снижение SP-A, что указывало на купирование воспалительного про- тивного артрита у подопытных коров 2-й и 3й группы подтверждалось снижением в крови белка острой фазы воспаления CRP и цитокина вызывающего разрушение костной ткани IL-6 [11]. Увеличивались значения фагоцитарного индекса, при достоверном снижении активатора апоптоза IF-β (табл. 1). При применении RCol E2 (3-я подопытная группа) количество ММР-3 в крови коров на 20-е сутки достоверно снизижалось с 714,6±1,8 до 24,5±0,9 нг/мл. При лечении животных с использованием IRB показатель MMP-3 снижался только до 120,4±1,5 нг/мл, что указывало на нахождение коров 2-й подопытной группы в зоне риска рецидива воспалительного процесса [12].

Заключение

В результате выполненных исследований установлено повышение количества SP-A, CRP, MMP-3, IFβ и IL-6 в крови лактирующих коров при реактивных артритах путового и заплюсневого суставов.

После применения в схеме лечения IRB и RCol E2 на 20-е сутки показатели SP-A, CRP, MMP-3, IFβ и IL-6 в крови подопытных животных 2-й и 3-й группы снизились, а симптомов острого воспаления суставов не наблюдалось.

Препараты IRB и RCol E2 ингибировали MMP-3 в крови больных коров, тем самым цесса в суставах и аутоиммунного – в орга- купировали процесс разрушения хряща и де-низме (табл. 1). Устранение симптомов реак- струкцию суставов.