Сравнительное изучение формирования иммунного ответа, вызываемого вакцинами против гриппа птиц (Н9) кур, включающими разные штаммы

Проблема распространения вируса гриппа птиц носит глобальный характер. Для сельскохозяйственного производства вирус представляет непосредственную угрозу, так как в случае возникновения очага заболевания высокопатогенным штаммом вся птица подлежит уничтожению и на предприятие накладывается карантин [4, 5]. Важным значением для предотвращения развития пандемии и нормального функционирования промышленного птицеводства имеют также низкопатогенные штаммы вируса [4, 6, 9]. Если борьба с высокопатогенным гриппом птиц предусматривает применение радикальных мер, то контроль эпизоотической ситуации по низкопатогенному гриппу птиц можно успешно осуществлять путем вакцинации [4, 11, 13].

Меры по ликвидации низкопатогенного гриппа птиц, ориентированные на соблюдение ветеринарно-санитарных мероприятий, должны быть ведущим звеном в системе их организации. Если вакцины не обеспечивают требуемого уровня защиты поголовья птицы, это может привести к циркуляции и распространению инфекции, а также к изменчивости возбудителя низкопатогенного гриппа птиц [1, 2, 3]. Вместе с тем, при угрожающем эпизоотическому благополучию состоянию по гриппу птиц превентивная иммунизация является одной из основных стратегий профилактики болезни [1, 12].

Цель применения любого биологического препарата, в том числе вакцин против гриппа птиц, заключается в защите поголовья от заболевания, формировании иммунного ответа на необходимом уровне [1]. Эффективность вакцин зависит от ряда факторов [10], прежде всего, от антигенных характеристик вакцинного штамма [1, 8].

Это можно достичь в том случае, если применение вакцины будет основано на проведении сравнения между идентичностью штаммов циркулирующих вирусов и штаммов вирусов, входящих в состав биопрепарата. Несоблюдение гомологичности способно вызвать клиническое проявление болезни и усилить степень выделения вируса во внешнюю среду у иммунизированной птицы при инфицировании, а также создать условия для появления новых вариантов вируса [12, 14]. Установлено, что может быть рекомендовано использование различных антигенных компонентов, обусловливающих различие в антигенности и иммуногенности разных штаммов патогенных вирусов в составе инактивированных вакцин [7].

В условиях крупного промышленного производства птицеводческой продукции важным аспектом является то, что специфический инфекционный фон и система вакцинаций вирусных заболеваний птиц могут оказать влияние на эффективность вакцинации от птичьего гриппа, поэтому приоритет при выборе вакцины и решение о целесообразности вакцинации целого региона может быть получено только путем натурных испытаний и экспериментальной проверкой.

С учетом вышеизложенного, цель исследований составило сравнительное изучение формирования иммунного ответа, вызываемого вакцинами против гриппа птиц (Н9) кур, включающих разные штаммы.

Материал и методы исследований. Исследование выполнено в условиях четырех цехов родительской площадки крупного птицеводческого комплекса Челябинской области. Объектом исследования были куры, подвергнутые вакцинации против низкопатогенного гриппа птиц, предметом исследования – показатели, отражающие уровень напряженности и длительности иммунитета на фоне вакцинации птиц против низкопатогенного гриппа биопрепаратами, включающими разные штаммы. Исследования, включающие изучение формирования иммунного ответа при применении вакцин против гриппа птиц (N9), проводили в условиях четырёх цехов производственного участка. Птице цехов № 5, 6, 8 применяли вакцину против гриппа птиц (Н9N2), включающую штамм A/chicken/Amursky/03/12/H9N2 сублинии Y280-like, цеха № 7 – штамм UAE/415/99. Кормление, содержание и профилактические мероприятия во всех группах были идентичными и соответствовали требованиям кросса и программы, принятой на птицефабрике. Вакцины вводили согласно инструкциям по их применению, через 4 недели после их введения проводили контроль напряженности иммунитета.

Для оценки формирования иммунного ответа у 25 голов птицы каждого цеха была взята кровь. Оценку формирования иммунного ответа, вызываемого вакцинами, проводили по уровню титров выработанных антител -результат считали положительным при титре 1:1280 и выше, их однородности и индексу вакцинации. Применяли тест

IDEXX MultiS-Screen, считывание результатов производили с помощью спектрофотометра Tecan (Австрия). Если более, чем в 20 пробах крови титры антител превышали защитный уровень, вакцинацию считали успешной.

Экономический анализ проводили по общепринятой методике с учётом рекомендаций И.Н. Никитина, 2022 и авторской методики, адаптированной к птицеводству [3].

Полученные в эксперименте данные обрабатывали статистически общепринятым методом с использованием программы STATISTICA 12.

Результат исследований.

Сравнительный анализ показателей иммунного ответа на фоне иммунизации вакциной против гриппа птиц (Н9N2), включающей штамм A/chicken/Amursky/03/12/H9N2 сублинии Y280-like, и гриппа птиц (Н9N2), включающей штамм A/chicken/UAE/415/99 сублинии G1-like, продемонстрировал разный уровень активности специфического звена иммунной системы кур.

Так, данные рисунка 1 свидетельствуют, что на фоне применения вакцины против гриппа птиц (Н9N2), включающей штамм A/chicken/Amursky/03/12/H9N2 сублинии Y280-like, количество проб крови, в которых установлен положительный уровень антител, составлял от 18 до 19, или 72-76 %.

При иммунизации птицы вакциной против гриппа птиц (Н9N2), включающей штамм A/chicken/UAE/415/99 сублинии G1-like, положительный уровень антител был установлен во всех пробах крови, то есть составлял 100 %.

Из данных таблицы 1 следует, что уровень антител при вакцинации разными биопрепаратами также был разным. При иммунизации птицы вакциной против гриппа птиц (Н9N2), включающей штамм A/chicken/Amursky/03/12/H9N2 сублинии Y280-like, титр антител был примерно на одном уровне, разница в значениях составляла 1,94 %. Титры антител были на 43,85-46,64 % ниже, чем титры антител при применении вакцины против гриппа птиц (Н9N2), включающей штамм A/chicken/UAE/415/99 сублинии G1-like.

На фоне применения вакцины против гриппа птиц (Н9N2), включающей штамм A/chicken/UAE/415/99 сублинии G1-lik, была более высокая однородность вакцинации, которая составила 42,16 %. При применении вакцины против гриппа птиц (Н9N2), включающей штамм A/chicken/Amursky/03/12/H9N2 сублинии Y280-like, коэффициент вариации был 54,26-57,95 %, варьировал в пределах 6,81 %.

ю 30

■ Исследовано проб, количество ■ Выявлены антитела, количество проб ■ Положительный результат, количество проб

Рисунок 1  – Выявляемость положительных проб, ед. Примечание:  * штамм

A/chicken/Amursky/03/12/H9N2 сублинии Y280-like ВНИИЗЖ;    ** штамм

A/chicken/UAE/415/99 сублинии G1-like

Таблица 1– Титры антител к вирусу гриппа птиц в крови птицы после вакцинации, X ± sx, n = 25

Птичник	Уровень антител			Коэффициент вариации, %
	min	max	med
ПУ 3 Цех 5*	1022	6453	2651,20±1438,47	54,26
ПУ 3 Цех 6*	1022	6418	2646,92±1534,02	57,95
ПУ 3 Цех 7**	1750	6918	3881,32±1636,46	42,16
ПУ 3 Цех 8*	1104	6084	2698,20±1525,03	56,52

Примечание: * штамм A/chicken/Amursky/03/12/H9N2 сублинии Y280-like ВНИИЗЖ; ** штамм A/chicken/UAE/415/99 сублинии G1-like

При этом различия, установленные по результатам одностороннего дисперсионного анализа Краскела-Уоллиса, были статистически значимы (р = 0,0086).

При проведении анализа с помощью U-критерия Манна-Уитни при сравнении результатов отдельно взятых групп были выявлены статистически значимые различия между значениями крови птицы цеха 7 и цехов 5 (Р=0,0088), 6 (Р=0,0040) и 8 (Р=0,0052), что подтверждает полученные результаты, указывающие на более выраженный иммунный ответ при применении вакцины против гриппа птиц (Н9N2), включающей штамм A/chicken/UAE/415/99 сублинии G1-like. Различия между значениями результатов исследования крови птицы цехов 5, 6 и 8 не были статистически значимы.

Следовательно, применение вакцины против гриппа птиц (Н9N2), включающей штамм штамм A/chicken/UAE/415/99 сублинии G1-like, способствует повышению однородности вакцинации на 22,29-27,25 %, подтверждаемое распределением титров антител (Таблица 2).

Таблица 2 – Распределение титров антител при вакцинации птицы разными вакцинами

Группа титров	Группы птиц
	ПУ 3 Цех 5**	ПУ 3 Цех 6**	ПУ 3 Цех 7***	ПУ 3 Цех 8**
0*	7	6	0	6
1	2	2	2	3
2	7	7	8	7
3	4	5	3	3
4	3	2	5	2
5	1	1	4	2
6	1	2	3	2

Примечание – под группой «0» понимали значения титров антител ниже 1:1280.

Так, при применении против гриппа птиц (Н9N2), включающей штамм A/chicken/UAE/415/99 сублинии G1-like, количество проб, результаты которых соответствовали группе титров 6, составило 3, было максимальным – 12 %. При применении отечественного биопрепарата количество таких проб было от 1 до 2 – 4-8 %. К группе 5 титров антител при применении вакцины против гриппа птиц (Н9N2), включающей штамм A/chicken/UAE/415/99 сублинии G1-like, относилось 16 %, вакцины против гриппа птиц (Н9N2), включающей штамм A/chicken/Amursky/03/12/H9N2 сублинии

Y280-like, – 4-8 %, к группе 4 – 20 и 8-12 %, к группе 3 – 12 и 12-25 %, к группе 2 – 32 и 28 %, к группе 1 – 8 и 8-12 % соответственно.

Так как, при применении вакцины против гриппа птиц (Н9N2), включающей штамм A/chicken/UAE/415/99 сублинии G1-like, уровень титров антител соответствовал положительному значению в 100 %, то, соответственно, титров антител группы 0 не было выявлено.

Следовательно, среднее значение титров антител более наглядно подтверждается распределением титров по группам.

100.00

Рисунок 2 – Индекс вакцинации против гриппа птиц на фоне применения антистрессовых препаратов

Индекс вакцинации, отражающий соотношение показателей иммунного ответа, был максимальным при иммунизации вакциной против гриппа птиц (Н9N2), включающей штамм

A/chicken/UAE/415/99 сублинии G1-like, составил 92,06 %. При использовании вакцины против гриппа птиц (Н9N2), включающей штамм A/chicken/Amursky/03/12/H9N2 сублинии

Y280-like, этот показатель варьировал от 45,67 до 48,86 % (разница была 6,98 %), был ниже в 1,88-2,02 раза (Рисунок 2).

Таким образом, применение вакцины против гриппа птиц (Н9N2), включающей штамм A/chicken/UAE/415/99 сублинии G1-like, позволяет вызывать 100 % формирование иммунного ответа, в сравнении с вакциной против гриппа птиц (Н9N2), включающей штамм A/chicken/Amursky/03/12/H9N2 сублинии Y280-like, позволяет увеличить напряженность иммунитета на 43,85-46,64 %, однородность на 22,29-27,25 %.

Экономическую эффективность определяли, основываясь на экономическом результате, полученном за счёт дополнительной стоимости продукции, а именно – стоимости цыплят, вывод которых зависит от сохранности поголовья кур и оплодотворяемости яиц при использовании новой технологии вакцинации (вакцины против гриппа птиц (Н9N2), включающей штамм A/chicken/UAE/415/99 сублинии G1-like) в сравнении с базовой (вакцины против гриппа птиц (Н9N2), включающей штамм A/chicken/Amursky/03/12/H9N2 сублинии Y280-like). Так, в расчёте на партию птицы – 100000 кур в начале периода выращивания, вывод цыплят в контрольной группе составил 3298657, в опытной – 3580172. Следовательно, при применении новой технологии вакцинации было получено на 281515 цыплят больше. С учётом стоимости одного цыпленка – 20 руб., дополнительная стоимость составила 5630306 руб. Птицу иммунизировали в возрасте 50 дней, или на 8 неделе жизни. С учётом средних показателей сохранности, вакцинации в расчёте на партию птицы – 100000 кур в начале периода выращивания было подвергнуто 111865 курочек и петушков. Стоимость одного флакона, объемом 500 мл (1000 доз) составляла 5380 руб. Для вакцинации 111865 голов птицы требуется 112 флаконов (остатки вакцины утилизированы), общей стоимостью 602560 руб. Трудоёмкость ветеринарных мероприятий по вакцинации птицы на каждую тысячу составила 3,2 минуты (ветеринарный врач) и 45,1 минуты

(ветеринарный санитар), на все поголовье – 5,97 и 84,08 часа соответственно. Заработная плата ветеринарного врача в час составляет 306,57 руб., ветеринарного санитара – 136,26 руб., на оплату труда на вакцинацию птицы – 1830,22 руб. и 11456,74 руб. соответственно, общие затраты на оплату труда – 13286,96 руб., с начислениями – 17299,62. Следовательно, общие затраты, связанные с проведением вакцинации птицы, равны 149459,62 руб. Экономический эффект, полученный в результате иммунизации птицы, был положительным и составил 5010446,38 руб., экономическая эффективность мероприятий на один рубль затрат – 8,08 руб.

Таким образом, иммунизация птицы против гриппа птиц вакциной против гриппа птиц (Н9N2), включающей штамм A/chicken/UAE/415/99 сублинии G1-like, на каждые 100000 голов на начало периода выращивания за счёт сохранности птицы и более высокого уровня вывода цыплят позволяет получить положительный экономический эффект, экономическая эффективность ветеринарных мероприятий по вакцинации кур против низкопатогенного гриппа составила 8,08 руб. на один рубль затрат.

Заключение. Сравнительный анализ показателей иммунного ответа на фоне иммунизации птицы вакциной против гриппа птиц (Н9N2), включающей штамм A/chicken/UAE/415/99 сублинии G1-like, и вакциной против гриппа птиц (Н9N2), включающей штамм A/chicken/Amursky/03/12/H9N2 сублинии Y280-like, продемонстрировал различный уровень активности специфической профилактической эффективности конкретных звеньев иммунной системы кур. Применение вакцины против гриппа птиц (Н9N2), включающей штамм A/chicken/UAE/415/99 сублинии G1-like, позволяет обеспечить 100 % формирование иммунного ответа. В сравнении с вакциной против гриппа птиц (Н9N2), включающей штамм A/chicken/Amursky/03/12/H9N2 сублинии Y280-like, ее применение позволяет увеличить напряженность иммунитета в среднем на 45,2 % и однородность титров антител на 24,8 %. Иммунизация птицы против гриппа птиц вакциной против гриппа птиц (Н9N2), включающей штамм A/chicken/UAE/415/99 сублинии G1-like, на каждые 100000 голов за счёт повышения сохранности птицы и более высокого уровня вывода цыплят позволяет получить положительный экономический эффект на уровне 5010446,38 руб., экономическая эффективность ветеринарных мероприятий составляет 8,08 руб. на один рубль затрат. Рекомендуем выбор вакцины необходимо проводить согласно филогенетическому анализу изолятов возбудителя, вакцина должна включать подтип циркулирующего вируса и содержать варианты вируса наиболее близкие в генетическом отношении к циркулирующим вариантам.

ЛИТЕРАТРУРА:

• 1.    Вакцины против гриппа птиц в птицеводстве / Л. В. Костина, А. Д. Забережный, Т. В. Гребенникова [и др.] // Вопросы вирусологии. – 2017. – Т. 62, № 2. – С. 53-60. – DOI 10.18821/0507-40882017-62-2-53-60. – EDN YJKHEP.

• 2.    Волков, М. Высоко- и низкопатогенный грипп птиц / М. Волков // Животноводство России. – 2021. – № S3. – С. 50-54. – DOI 10.25701/ZZR.2021.97.56.003. – EDN JKTONY.

• 3.    Журавель, Н. А. Цифровизация методологии экономической оценки внедрения инновационных методов и средств ветеринарного применения в птицеводство / Н. А. Журавель, А. В. Мифтахутдинов // Достижения науки и техники АПК. – 2019. – Т. 33, № 11. – С. 91-94. – DOI 10.24411/0235-2451-201911120. – EDN RVUVQH.

• 4.    Ирза, В. Н. Cитуация по особо опасным вирусным болезням в промышленном птицеводстве Российской Федерации / В. Н. Ирза, М. С. Волков, А. В. Варкентин // Птица и птицепродукты. – 2020. – № 2. – С. 50-52. – DOI 10.30975/2073-4999-2020-22-2-50-52. – EDN DEMQOO.

• 5.    Ирза, В. Н. Об обострении эпизоотической ситуации по высокопатогенному гриппу птиц в России в

  2020 г / В. Н. Ирза, М. С. Волков, А. В. Варкентин // Птица и птицепродукты. – 2020. – № 6. – С. 16-20. – DOI 10.30975/2073-4999-2020-22-6-16-20. – EDN ZEPPWB.

• 6.    Клинический случай низкопатогенного гриппа птиц Н9N2 на птицефабрике яичного направления / А. В. Варкентин, В. Н. Ирза, М. С. Волков, Л. А. Демченко // Птица и птицепродукты. – 2020. – № 3. – С. 10-13. – DOI 10.30975/2073-4999-2020-22-3-10-13. – EDN DRCGKD.

• 7.    Сравнение иммуногенной активности вакцин против низкопатогенного гриппа птиц подтипа H9N2, изготовленных на основе вирусов генетических линий G1 и Y280 / С. В. Фролов, Л. О. Щербакова, Н. В. Мороз [и др.] // Ветеринария сегодня. – 2021. – № 3(38). – С. 224-229. – DOI 10.29326/2304-196X-2021-3-38-224-229. – ED N DQHCCA.

• 8.    A global perspective on h9n2 avian influenza virus / T. P. Peacock, J. James, J. E. Sealy, M. Iqbal // Viruses. – 2019. – Vol. 11, No. 7. – P. 620. – DOI 10.3390/v11070620. – EDN CRZZFS.

• 9.    Avian influenza vaccines: a practical review in relation to their application in the field with a focus on the Asian experience / M. Peyre, G. Fusheng, S. Desvaux, F. Roger // Epidemiol. Infect, 2009. – 137 (1). – Р. 1-21. – DOI 10.1017/S0950268808001039

• 10.    Comparison of the Effectiveness of Two Different Vaccination Regimes for Avian Influenza H9N2 in Broiler Chicken / S. Talat, R. R. Abouelmaatti, R. Almeer, M. M. Abdel-Daim, W. K. Elfeil // ANIMALS, 2020. – T. 10. – № 10. –DOI 10.3390/ani10101875

• 11.    Evaluation of vaccination strategies to control an avian influenza outbreak in French poultry production networks using EVACS tool / C. Hautefeuille, B. Azzouguen, S. Mouchel, G. Dauphin, M. Peyre // Preventive veterinary medicine, 2020. – T. 184. – DOI: 10.1016/j.prevetmed.2020.105129

• 12.    Spackman, E. Practical aspects of vaccination of poultry against avian influenza virus / E. Spackman, M. J. Pantin-Jackwood // Veterinary Journal, 2014. – Vol. 202. – No 3.

  – P. 408-415. – – DOI 10.1016/j.tvjl.2014.09.017.

• 13.    Status and Challenges for Vaccination against Avian H9N2 Influenza Virus in China / J. Dong, Y. Zhou, J. Pu, L. Liu // Life, 2022. – 12. – 1326. – DOI: 10.3390/life12091326

• 14.    The molecular basis of antigenic variation among a(H9N2) avian influenza viruses / T. P. Peacock, W. T. Harvey, J. R. Sadeyen, R. Reeve, M. Iqbal // Emerg Microbes Infect, 2018. – № 7;7 (1): 176. – DOI 10.1038/s41426-018-0178-y.

СРАВНИТЕЛЬНОЕ ИЗУЧЕНИЕ ФОРМИРОВАНИЯ ИММУННОГО ОТВЕТА, ВЫЗЫВАЕМОГО ВАКЦИНАМИ ПРОТИВ ГРИППА ПТИЦ (Н9) КУР, ВКЛЮЧАЮЩИХМИ РАЗНЫЕ ШТАММЫ

Баннов Д.В., Журавель Н.А., Мифтахутдинов А.В.

Резюме

Представлено сравнительное изучение формирования иммунного ответа, вызываемого вакцинами против гриппа птиц (Н9) кур, включающих штаммы A/chicken/UAE/415/99 сублинии G1-like и A/chicken/Amursky/03/12/H9N2 сублинии Y280-like. Установлено, что применение вакцины против гриппа птиц (Н9N2), включающей штамм A/chicken/UAE/415/99 сублинии G1-like, позволяет обеспечить 100 % формирование иммунного ответа. В сравнении с вакциной против гриппа птиц (Н9N2), включающей штамм A/chicken/Amursky/03/12/H9N2 сублинии Y280-like, ее применение позволяет увеличить напряженность иммунитета в среднем на 45,2 % и однородность титров антител на 24,8 %. Иммунизация птицы против гриппа птиц вакциной против гриппа птиц (Н9N2), включающей штамм A/chicken/UAE/415/99 сублинии G1-like на каждые 100000 голов за счёт повышения сохранности птицы и более высокого уровня вывода цыплят позволяет получить положительный экономический эффект на уровне 5010446,38 руб., экономическая эффективность ветеринарных мероприятий составляет 8,08 руб. на один рубль затрат.

COMPARATIVE STUDY OF THE FORMATION OF THE IMMUNE RESPONSE CAUSED BY VACCINES AGAINST AVIAN INFLUENZA (H9) OF CHINS, INCLUDING DIFFERENT STRAINS

Bannov D.V., Zhuravel N.A., Miftakhutdinov A.V.