Сравнительное изучение способов заражения

Биологический метод исследования при туберкулезе, широко применяемый с момента открытия возбудителя этой инфекции, не потерял своей ценности и в настоящее время.

Успехи научных исследований при туберкулезе невозможны без широкого моделирования этого заболевания на различных лабораторных животных.

Биологическая проба на животных остается наиболее чувствительным диагностическим методом выявления туберкулезных микобактерий. Этот метод служит основным в исследованиях по определению типов микобактерий, их вирулентности, изучению патогенности атипичных культур. При этом морских свинок, как правило, заражают подкожным способом введения микобактерий, суспендировав их в физиологическом растворе. Как показали многочисленные опыты в этом направлении, при этом способе заражения на месте инъекции микобактерий образуется воспалительная инфильтрация с переходом на абсцесс, по мере созревания который вскрывается наружу с выделением большого количества казеозной массы с содержанием высоковирулентного возбудителя. В дальнейшем, вскрывшийся абсцесс превращается в глубокую незаживающую язву до гибели животного, которая происходит через 45 – 60 и более дней после развития клинических признаков.

Указанные недостатки естественно удлиняют сроки постановки научно-обоснованного диагноза на туберкулез, что небезразлично при проведении противотуберкулезных мероприятий с одной стороны и способствуют рассеиванию высоковирулентного возбудителя во внешней среды с другой. В связи с этим, совершенствование существующих и разработка новых, более эффективных методов диагностики, с использованием лабораторных животных, при туберкулезе весьма актуальна.

В целях сокращения сроков постановки биопробы и недопущения чрезмерного обсеменения объектов внешней среды возбудителем туберкулеза нами разработана методика постановки биопробы путем введения исследуемого материала в брюшную полость, суспендировав его в стабилизированной крови крупного рогатого скота.

Материалы и методы исследования. Объектом исследований послужили морские свинки в количестве 9 голов, которых, после предварительного исследования на туберкулез внутрикожным методом разделили на 3 группы по 3 головы в каждой.

Животных первой группы заразили путем подкожного введения в область паха в дозе по 1 мг нативной культуры микобактерий в 1 мл физиологического раствора. Животным второй группы суспензию микобактерий вводили в брюшную полость в дозе по 1,0 мг в 5 мл физиологического раствора.

Животных третьей группы заразили таким же методом, как и животных второй группы, но суспендировав микобактерий в стабилизированной крови крупного рогатого скота 3% - ным растворам цитрата натрия из расчета 10 мл на 100 мл крови и вводили в брюшную полость морским свинкам в дозе по 5мл.

Заражение в брюшную полость, морских свинок осуществляли, фиксировав животных головой вниз. Во всех опытах степень вирулентности культуры оценивали по срокам гибели зараженных животных, по снижению массы тела и по интенсивности поражения внутренних органов.

Результаты исследований. При любом методе заражения морских свинок вирулентной культурой микобактерий туберкулеза у них развивается генерализованный туберкулезный процесс, сопровождающийся гибелью животного.

• 1 .Показатели продолжительности жизни у морских свинок при разных методах заражения микобактериями.

  Группы животных	продол. жизни (дн.)	ИП
  I – ая группа , зараженные подкожно M. bovis (физ. р-р).	65,3±8,5	24,2±1,8
  II – группа , зараженные внутрибрюшинно M. bovis (физ. р-р).	35,8±3,8	29,0±2,8
  III – группа , зараженные внутрибрюшинно M. bovis (стабилиз. кровь).	30,8±2,6	30,0±0,8

• 2 . Показатели массы тела морских свинок в зависимости от методах заражения микобактериями

  Группы животных	МАССА ТЕЛА (В ГР)
  	до заражения	при вскрытии
  I – ая группа , зараженные подкожно M. bovis (физ. р-р).	328 ±4,1	280±5,6
  II     –     группа ,     зараженные внутрибрюшинно M. bovis (физ. р-р).	326±2,5	255±1,6
  III     –     группа ,     зараженные внутрибрюшинно M. bovis (стабилиз. кровь).	325±3,7	224±2,7

Анализ продолжительности жизни и индекса пораженности заражения животных микобактериями туберкулеза бычьего вида (табл.1) показал, что при введении их в брюшную полость суспендировав в стабилизированной крови продолжительность жизни морских свинок значительно сокращался и составил 30,8±2,6 дней, индекс пораженности по Тогуновой – 30,0±0,8; при подкожном методе заражения эти показатели соответственно составляли 65,3±8,5 и 24,2±1,8.

Эти показатели согласуются и со схемой по оценке интенсивности поражения органов и лимфатических узлов по Ю. К. Весфейлеру. При этом максимальный индекс поражения был равен к 20 у животных зараженных внутрибрюшинным методом, при отсутствии абсцесса на месте инъекции прививочного материала и к 14 – при подкожном методе заражения.

Кроме этого, у зараженных свинок микобактериями туберкулеза бычьего вида, в процессе заболевания отмечали значительное снижение массы тела. У погибших животных масса тела оказалось на 22-31% ниже уровня фактической массы тела, установленного перед заражением.

После введения вирулентных культур микобактерий в брюшную полость морских свинок, у них проявляется лихорадка, сопровождающаяся незначительными колебаниями до одного месяца. На 6-9 день после заражения наблюдали увеличение обоих паховых лимфатических узлов, которые через 21 – 25 дней, после заражения достигали величину фасоли. Развивался тяжелый прогрессирующий туберкулезный процесс, сопровождающийся сильным истощением животных. На вскрытии павших животных обнаруживали тяжелый генерализованный туберкулез внутренних органов. Селезенка сильно увеличена с крупными и мелкими туберкулезными узелками, печень увеличена, содержит специфические узелки. В легких милиарные специфические узелки. Легочные лимфатические узлы увеличены, плотные с наличием казеозной массы, паховые лимфатические узлы увеличены, плотные с наличием казеозной массы, паховые лимфатические узлы увеличены с казеозным распадом.

При посеве патологического материала от морских свинок, зараженных внутрибрюшинно, высеваемость микобактерий всех штаммов бычьего вида, использованных в опыте, оказалось значительно выше, чем при заражении подкожным методами.

Проведенные наши исследования показали преимущество внутрибрюшинного метода заражения, суспендированного посевного материала в стабилизированной крови. При этом обязательным условием является только то, что предпосевную обработку биоматериала перед заражением в целях устранения неспецифического перитонита, необходимо проводить по методу Мазура.

Таким образом, заражение морских свинок при экспериментальном туберкулезе в брюшную полость туберкулезными микобактериями, предварительно суспендированными в стабилизированной крови, является наиболее перспективным методом, так как кроме значительного сокращения     продолжительности     туберкулезного     процесса, сопровождающегося гибелью животных, предотвращается рассеивание высоковирулентного возбудителя туберкулеза во внешней среде через образовавшуюся язву на месте инъекции прививочного материала при подкожном методе заражения.

СРАВНИТЕЛЬНОЕ ИЗУЧЕНИЕ СПОСОБОВ ЗАРАЖЕНИЯ

Трубкин А.И., Харитонов М.В

Резюме

Сравнительное изучение способов заражения. Казанская государственная академия ветеринарной медицины им. Н.Э. Баумана.

Биологический метод исследования при туберкулезе, широко применяемый с момента открытия возбудителя этой инфекции, не потерял своей ценности и в настоящее время.

COMPARATIVE STUDY OF WAYS OF INFECTION

Trubkin AI, Kharitonov M.V