Сравнительный анализ общетоксического действия препарата «Седатин, быстрорастворимая пленка, 0,2 мг»

Введение . Современная ветеринарная медицина и фармакология нуждаются в изучении новых лекарственных форм адресной доставки терапевтических веществ в патологический очаг [1, 3, 8, 14]. Традиционные лекарственные средства и биологически активные препараты не показывают высокой эффективности в восстановлении постоянно нарушающегося баланса, а также сами по себе многие лекарственные формы являются провоцирующими факторами развития стресса, новообразований в организме животных [4, 11, 13]. В связи с этим создание инновационных терапевтических систем в виде быстрорастворимых пленок как средств адресной доставки действующего вещества лекарственного препарата направлено на повышение биодоступности, снижение проявления побочных эффектов, а также постинъекционных осложнений, так как использование общепринятых лекарственных форм (таблетки, суппозитории, инъекционные формы) не всегда результативны, а чаще всего носят негативный характер [2, 5, 7, 20].

Олигопептиды, используемые нами в быстрорастворимых пленках, играют важную роль в формировании механизмов тревоги, депрессии и защиты от стресса и обладают анксиолитическим действием, а внедрение в терапевтическую практику новых лекарственных форм, более удобных в лечении животных по сравнению с инъекциями, таблетками и суппозиториями, – быстрорастворимых пленок (БРП) требует до-

Ветеринария и зоотехния полнительного изучения развития возможных токсических эффектов [15, 22, 23].

Цель исследования : провести доклиническое токсикологическое изучение действия лекарственного препарата «Седатин» (быстрорастворимая пленка, 0,2 мг) на основе отечественного олигопептида.

Материалы и методы исследования. В экспериментах на лабораторных животных (мыши (самцы) – 72 голов, кролики (сам- цы/самки) – 60 голов) изучено однократное и многократное введение лекарственного препарата «Седатин» (быстрорастворимая пленка, 0,2 мг) производства ЦКП (НОЦ) РУДН (Россия) в сравнении с препаратом «Седатин» (раствор для внутримышечных инъекций, 1 мг/мл) производства ООО «Фарма БИО» (Россия). В опытах по острой токсичности на мышах исследовали влияние однократного введения высоких токсических доз с целью установления среднелетальной дозы препарата «Седатина», вызывающей гибель 50 % животных в подопытных группах. В опытах по установлению подострой токсичности на кроликах исследовали влияние многократного введения доз, превышающих терапевтическую дозу в несколько раз, с целью установления токсических эффектов препарата «Седатина». Гематологические, биохимические показатели крови, а также метаболические исследования проводили для определения изменения состояния организма кроликов и выявления токсического воздействия лекарственного вещества.

Гематологические исследования: для определения гематологических параметров исследование проводилось по стандартной методике отбора проб. Далее анализ проводился на автоматическом гематологическом анализаторе PCE 90 VETHTI, ERMA (Япония).

Биохимия сыворотки крови: для определения биохимических параметров исследование проводилось по стандартной методике отбора проб. Далее анализ проводился на автоматическом биохимическом анализаторе крови ILAB 650 (CША) при помощи наборов фирмы Biosistems (Испания).

Обработка данных: статистический анализ проводили с использованием программы Statistica ver. 12.0. Достоверность отличий оценивали с применением t-критерия Стьюдента.

Различия считали достоверными при p < 0,05. Определение значения показателей среднелетальных доз (LD 50 ) изучаемого препарата и препарата сравнения после однократного введения лабораторным животным осуществляется при помощи метода пробит-анализа по Литчфилду и Вилкоксону (М.Л. Беленький, 1963) с определением величины стандартной ошибки показателя LD 50 . Статистический анализ данных и оформление результатов проводились с использованием пакета Microsoft Excel 2007 [10, 17, 19].

Методы описательной статистики . Полученные экспериментальные данные подвергаются статистической обработке с помощью пакета Microsoft Excel 2007 для персонального компьютера.

Результаты исследования . В результате настоящего исследования установлено, что препарат «Седатин» (быстрорастворимая пленка, 0,2 мг) и препарат «Седатин» (раствор для внутримышечных инъекций, 1 мг/мл) являются эквивалентными, с одинаковыми проявленными токсическими эффектами. При однократном введении было установлено, что оба препарата относятся к группе практически нетоксичных веществ, так как величину ЛД 50 достичь не удалось. Зависимые от доз летальные эффекты исследуемого препарата и препарата сравнения представлены в таблице 1.

Как следует из данных таблицы 1, LD50 для «Седатина» не установлена, что позволяет отнести оба препарата к V классу «Практически нетоксично» по «Классификации степеней токсичности по Hodge и Sterner». По наблюдениям за состоянием животных после введения препаратов в течение 5 ч и далее на протяжении 15 сут не отмечали отклонения во внешнем виде, состоянии шерстного покрова и слизистых оболочек, характере выделений, поведенческих реакциях, динамике прироста массы тела, а также не регистрировали гибель отдельных животных. В эксперименте было установлено, что применение «Седатина» в дозе 1,0 мг/кг не изменяло поведенческие реакции животных. Уже на 5-е сут после начала применения исследуемого препарата опытные животные становились более спокойными и были менее подвержены действию внешних раздражителей. Последующее наблюдение за животными не выявило каких-либо отклонений. Динамика прироста массы тела увеличилась по сравнению с исходной массой. Лишь применение «Седатина» в дозе 10,0 мг/кг в течение первых 3–4 ч вызывало угнетение подвижности и уменьшение тактильной

Вестник КрасГАУ. 2019. № 5 чувствительности. К 5-му ч эти признаки исчезали, и опытные животные не отличались от контрольных.

Таблица 1

Токсичность изучаемого препарата и препарата сравнения при однократном в/ж введении мышам-самцам (пало/всего)

Препарат	Введенная доза, мкг/кг
	250	500	1 000	5 000	10 000
Седатин (раствор смеси на основе всех ингредиентов, входящих в состав пленки)	0/6	0/6	0/6	0/6	0/6
Седатин® (раствор для внутримышечных инъекций)	0/6	0/6	0/6	0/6	0/6

В таблице 2 представлены данные массы тела и массовые коэффициенты органов подопытных животных из всех групп.

Выявлено достоверное увеличение массы тела на 7-й день исследования на 5 % в группе животных, получавших препарат «Седатин» (быстрорастворимая пленка, 0,2 мг) производства ЦКП (НОЦ) РУДН (Россия) относительно контроля. После окончания эксперимента животные были подвергнуты эвтаназии. Морфометрическую оценку параметров органов животных осуществляли с помощью весов «Пет-Вес ЕТ-Т» (Unigram, Россия), с последующим вычислением массовых коэффициентов. Результаты вычисления массовых коэффициентов приведены в таблице 2.

Таблица 2

Масса тела и массовые коэффициенты органов белых мышей при однократном внутрижелудочном введении изучаемого препарата и препарата сравнения

Показатель	Экспериментальная группа (N= 6)
	Контроль	Седатин	Седатин®
Масса тела m, г
ФП*	21,0±0,4	19,9±0,2	20,3±0,2
2-й день	21,33±0,3	20,1±0,4	20,3±0,3
7-й день	26,0±0,6	25,0±0,5	23,9±0,4
14-й день	31,3±0,7	30,2±0,6	29,9±0,5
	Массовые коэффициенты органов (МК), %
Сердце	2,91±0,11	3,11±0,10	3,18±0,11
Легкие с трахеей	1,31±0,12	1,41±0,01	1,54±0,06
Тимус	0,12±0,12	0,21±0,03	0,15±0,07
Печень	5,07±0,17	5,17±0,10	5,41±0,16
Селезенка	1,62±0,07	1,49±0,14	1,44±0,13
Почка (левая)	1,49±0,09	1,22±0,12	1,26±0,12
Надпочечник (левый)	0,05±0,01	0,05±0,03	0,06±0,03
Поджелудочная	0,08±0,03	0,09±0,02	0,07±0,03
Яички или яичники	0,5±0,01	0,6±0,02	0,49±0,06

*ФП – физиологическая норма.

Выявлено достоверное увеличение массы печени на 10 % в группе животных, получавших препарат «Седатин®» (раствор для внутримышечных инъекций, 1 мг/мл) производства ООО «Фарма БИО» (Россия), относительно контроля и увеличение массы печени на 7 % в группе животных, получавших препарат «Седатин» (быстрорастворимая пленка, 0,2 мг) производства ЦКП (НОЦ) РУДН (Россия); увеличение массы почек на 12 % в группе животных, получавших препарат «Седатин®» (раствор для внутримышечных инъекций, 1 мг/мл) производства ООО «Фарма БИО» (Россия) относительно контроля и увеличение массы почек на 20 % в группе животных, получавших препарат «Седатин» (быстрорастворимая пленка, 0,2 мг) производства ЦКП (НОЦ) РУДН (Россия). Данные увеличения массы органов свидетельствуют о токсических воздействиях повышенных доз как исследуемого препарата, так и препарата сравнения. Однако наблюдаемое изменение массы внутренних органов у животных, получавших препарат сравнения «Седатин®» (раствор для внутримышечных инъекций, 1 мг/мл) производства ООО «Фарма БИО» (Россия), показывает проявлен- ное более высокое токсическое действие, что сказалось на увеличении массы почек и печени на 32 и 10 % соответственно относительно контроля.

Картина интоксикации животных была идентична при введении обоих препаратов. Оба препарата относятся к V классу «Практически нетоксично» по «Классификации степеней токсичности по Hodge и Sterner».

При многократном введении кроликам (в течении 30 дней) препарата «Седатин» производства ЦКП (НОЦ) РУДН (Россия) и препарата сравнения «Седатин®» производства ООО «Фарма БИО» (Россия) в дозе 0,05 мг/кг не оказывали токсического действия. Состояние кожных покровов, слизистых оболочек и шерсти оставалось в норме. Изменение массы тела кроликов в течение 30 дней не отличалось от массы контрольных животных (табл. 3).

За все время проведения опыта наблюдали за испытуемыми животными, отслеживая динамику изменения массы тела, изменение количественных показателей потребление корма и воды. Динамика изменения данных показателей в течение 30 дней приведены в таблице 3.

Таблица 3

Показатели массы тела и суточного потребления корма и воды при применении изучаемого препарата «Седатин» и препарата сравнения «Седатин®»

Время наблюдения	Суточное потребление корма у кроликов, г			Изменение массы тела у кроликов, г			Суточное потребление воды, мл
	Контроль	Седа-тин	Седа-тин®	Контроль	Седатин	Седатин®	Контроль	Седа-тин	Седа-тин®
Исходная группа	205,5± 5,0	202,5± 4,52	201,5± 2,54	3530± 93,57	3400± 80,02	3540±62, 04	96,0± 2,44	94,0± 4,05	97,5± 2,67
1-я неделя	205,0± 7,45	198,37± 3,75	207,5± 4,74	3670± 88,06	3545± 63,79	3662,50± 62,06	105,0± 3,33	92,5± 4,29	98,1± 2,46
2-я неделя	201,75± 5,74	206,5± 1,67	198,5± 2,66	3860± 67,99	3708,75± 75,09	3867,5± 63,78	102,5± 2,87	95,0± 5,25	100,6± 2,93
3-я неделя	203,75± 6,40	209± 2,41	205,5± 1,77	4045± 43,33	4110,75± 69,41	4092,5± 20,54	107,5± 5,0	105,0± 2,86	106,2± 1,86
4-я неделя	203,75± 8,62	210,75± 2,69	207,6± 3,41	4211,75± 49,05	4280,11± 65,39	4209,5± 59,84	109,2± 6,21	107,8± 4,46	105,9± 3,97

Прирост массы тела у кроликов, получавших препарат «Седатин» производства ЦКП (НОЦ) РУДН (Россия), пленка быстрорастворимая, достоверно увеличивался на 2 % (3-я и 4-я неделя исследования) при сравнении с животными, получавшими препарат сравнения «Се- датин®» производства ООО «Фарма БИО» (Россия) в дозе 0,05 мг/кг в виде инъекций. Потребление корма кроликами, получавшими препарат «Седатин» производства ЦКП (НОЦ) РУДН (Россия), достоверно увеличивался на 2 и 3 % (3-я и 4-я неделя исследования соответственно). В группе животных, получавших препарат сравнения «Седатин®» производства ООО «Фарма БИО» (Россия) увеличения потребления корма не наблюдалось.

Таким образом, у животных, получавших препарат «Седатин» производства ЦКП (НОЦ) РУДН (Россия) в виде быстрорастворимой пленки наблюдалась отчетливая тенденция к увеличению потребления корма и активному приросту массы тела кроликов по сравнению с подопытными животными, получавшими препарат сравнения «Седатин®» производства ООО «Фарма БИО» (Россия) в инъекционной форме.

«Седатин» – универсальный регулятор, биохимия синтеза пептидов едина для любых систем организма, препарат способен повышать пролиферативный потенциал, снижать развитие и проявление оксидантного стресса [3, 4].

Установленные универсальные механизмы действия «Седатина» заключаются в способности повышать пролиферативный потенциал, минимизировать проявление оксидативного стресса, стимулировать систему NOS-NO. Данный препарат является нейропептидом, влияющим на состояние тканевого гомеостаза [12, 22, 23].

Нами установлено, что препарат «Седатин» (L-аргинил-L-тирозил-D-аланил-L-фенилаланил-L-глицин Na-соль), разработанный в виде быстрорастворимых пленок по 0,2 мг (опытнопромышленная серия), относится к малотоксичным лекарственным веществам [9, 11]. В подо- стром эксперименте на кроликах препарат «Се-датин» и препарат сравнения «Седатин®» в дозе 0,05 мг/кг не оказывали токсического действия при введении в течение 30 дней исследуемого препарата и препарата сравнения [12]. Динамика изменения массы кроликов в течение 30 дней не отличалась от массы контрольных животных. Количество потребляемого корма и воды кроликами, получавшими изучаемый препарат и препарат сравнения, статистически не отличалось от показателей животных в контрольных группах [13]. Проведенные исследования по изучению сравнительного общетоксического действия различных лекарственных форм не выявили отклонений во внешнем виде, состоянии шерстного покрова и слизистых оболочек, характере выделений, поведенческих реакциях, прироста массы тела. При трансбуккальном применении испытуемого препарата «Седатин» и препарат сравнения «Седатин®» каких-либо различий проявления токсических эффектов у животных не было отмечено.

Выводы

• 1.    Изучение влияния однократного и многократного введения испытуемого лекарственного вещества «Седатин» в лекарственной форме «пленка быстрорастворимая» не выявило статистически значимых отклонений и отличий от аналогичных показателей у препарата сравнения «Седатин^®».

• 2.    Потребление корма в группе животных, получавших препарат «Седатин» в лекарственной форме «пленка быстрорастворимая» выросло на 3 % относительно контроля, а в группе получавших «Седатин^®» – на 1 % относительно контроля.

• 3.    Масса тела кроликов в группе животных, получавших препарат «Седатин» в лекарственной форме «пленка быстрорастворимая», выросла на 2 % относительно контроля, а в группе получавших «Седатин^®» – не отличалась от контроля.

• 4.    Гематологические и биохимические показатели у животных испытуемого препарата «Седатин» производства ЦКП (НОЦ) РУДН (Россия) не отличаются от аналогичных показателей у препарата сравнения «Седатин^®» производства ООО «Фарма БИО» (Россия), что по-

• зволяет сделать важное заключение об эквитоксичности препаратов в разных лекарственных формах при очевидных преимуществах препарата «Седатин» в лекарственной форме «пленка быстрорастворимая» за счет адресной доставки действующего вещества лекарственного препарата, направленого на повышение терапевтической эффективности, улучшения переносимости и снижение риска появления побочных эффектов, возникающих на фоне применения таблетированных и инъекционных лекарственных форм у животных.