Структурные изменения клеток крови под влиянием цитостатиков у больных с рецидивами и метастазами рака шейки матки (in vitro)

Автор: Неродо Г.А., Левченко Н.Е., Гуськова Е.А., Гуськова Н.К.

Журнал: Сибирский онкологический журнал @siboncoj

Статья в выпуске: 4 (24), 2007 года.

Бесплатный доступ

Проведено изучение влияния химиопрепаратов на структурно-функциональные характеристики клеток крови в условиях in vitro. Исследованы объем, электрическая проводимость и величина лазер-индуцированного светорассеяния популяций лейкоцитов (нейтрофилов, лимфоцитов, моноцитов, эозинофилов) на гематологическом анализаторе LH-500 (Beckman Coulter) с использованием VCS-технологии. Выявлены значительные изменения VCS-показателей лейкоцитов периферической крови больных с рецидивами и метастазами рака шейки матки, характеризующиеся увеличением объема клеток, снижением проводимости и интенсивности светорассеяния, что может свидетельствовать о дестабилизации клеточных мембран и процессов внутриклеточного метаболизма. При проведении больным аутогемохимиоиммунотерапии (АГХИТ) от курса к курсу интенсивность изменений структурно-функциональных свойств нейтрофилов и лимфоцитов снижается, что свидетельствует о снижении гематологической токсичности химиотерапии на аутокрови, сочетанной с иммуностимулирующей терапией, а также о возможности использования VCS-показателей лейкоцитов для оценки эффективности АГХИТ и степени выраженности гематологической токсичности.

Еще

Аутогемохимиоиммунотерапия, vcs-показатели, объем, электрическая проводимость, светорассеяние

Короткий адрес: https://sciup.org/14054612

IDR: 14054612

Текст научной статьи Структурные изменения клеток крови под влиянием цитостатиков у больных с рецидивами и метастазами рака шейки матки (in vitro)

В последнее десятилетие объектом детального и разностороннего изучения среди онкоги-некологической патологии является рак шейки матки (РШМ). Наряду с ростом числа больных настораживает факт омоложения данного контингента пациенток и увеличение частоты запущенных форм заболевания. Несмотря на совершенствование методов диагностики и лечения, каждая вторая больная при распространенной форме РШМ погибает в течение первых 2 лет после установления диагноза [1]. Подавляющее большинство больных указанной категории подлежит проведению лекарственной цитостатической терапии. Однако известно, что противоопухолевая химиотерапия вызывает ряд побочных реакций, связанных с токсическим действием цитостатических препаратов на активно обновляющиеся клеточные системы организма [2, 3, 4, 7]. Практически все противоопухолевые препараты обладают значительной гепато- и гематологической токсичностью [5, 6, 8]. Такая особенность противоопухолевой терапии диктует необходимость поиска новых режимов химиотерапии в сочетании с методами иммунологического сопровождения, что требует, в свою очередь, проведения исследований по изучению влияния комбинаций химиопрепаратов как на саму опухоль, так и на нормальные ткани. Немаловажное значение имеет изучение влияния химиопрепаратов на клетки крови, прежде всего, для выяснения механизма терапевтического действия используемых препаратов, а также для уточнения патогенеза формирования токсических реакций, поиска критериев эффективности лечения и для своевременной разработки мер профилактики развития побочных реакций.

Целью настоящего исследования явилось изучение в условиях in vitro структурных изменений лейкоцитов у больных с рецидивами и метастазами РШМ.

Материал и методы

Объектом исследования служили образцы крови 19 больных с рецидивами и метастазами рака шейки матки, ранее не подвергавшихся химиотерапии. Средний возраст больных составил 49 лет с возрастным интервалом 39–60 лет. Контрольную группу составили 50 здоровых женщин-доноров аналогичной возрастной группы.

Забор крови осуществляли утром натощак. Аутогемохимиоиммунотерапию (АГХИТ) проводили в день забора аутокрови. Кровь в объеме 150–200 мл смешивали с химиопрепаратами с последующей инкубацией в течение 40 мин при температуре 370С. Использована комбинация химиопрепаратов: цисплатин+циклофосфан в дозах, соответствующих терапевтической. Исследования проводили до и после инкубации аутокрови с химиопрепаратами в начале каждого курса.

Изучение количественного и качественного состава периферической крови осуществляли на гематологическом анализаторе LH-500 (Beckman Coulter) с использованием VCS-технологии. Изучена структура популяций лейкоцитов: нейтрофилов, лимфоцитов, моноцитов, эозинофилов по объему –V (Volume) составляющих их клеток, электрической проводимости – C (Conductivity) и величине лазер-индуцированного светорассеяния – S (Light Scatter).

По всем индивидуальным пробам крови для определения степени вариабельности всех измене- ний в каждой популяции лейкоцитов для каждого исследуемого параметра вычислялось стандартное отклонение – SD (Standard Deviation).

Полученные результаты отражены в таблице и на диаграмме распределения лейкоцитов, где на оси X показана величина светорассеяния, на оси Y – значения объема.

Статистический анализ проводили с использованием пакета программ Statistica, версия 6. Достоверность различий оценивали по t-критерию Стьюдента.

Результаты и обсуждение

Результаты проведенных исследований свидетельствуют о существенных различиях VCS-параметров лейкоцитов периферической крови у больных с рецидивами и метастазами РШМ и у доноров.

Для больных характерно статистически достоверное увеличение объема нейтрофилов (р=0,0000), снижение показателей проводимости (р=0,0436) и, в большей степени, светорассеяния (р=0,0001), в сравнении с данными контрольной группы (таблица). При этом значительно увеличены значения стандартного отклонения (SD) для каждого из изучаемых показателей, что свидетельствует о гетерогенности нейтрофилов и о присутствии в популяции молодых клеточных форм, т.е. о «левом сдвиге». Общеизвестно, что снижение проводимости непосредственно связано с повышением сопротивления. Полагаем, что повышение сопротивления гранулоцитов при увеличении их объема обусловлено увеличением плотности внутренней среды клеток вследствие усиления гранулярности цитоплазмы и/или нарушения проницаемости клеточных мембран (как внешних, так и внутренних), то есть их дестабилизации. Известно также, что величина светорассеяния зависит от размеров клеток, их формы, характера клеточной поверхности, состояния внешней клеточной мембраны, то есть от величины светопоглощения. Так, клетки сферической формы имеют хорошее светорассеяние. Слабая интенсивность светорассеяния нейтрофилов крови на фоне увеличения их объема может быть следствием изменения формы и архитектоники клеточной поверхности, нарушения проницаемости клеточной мембраны, а также увеличения светопоглощения, которое, в

Г.А. НЕРОДО, Н.Е. ЛЕВЧЕНКО, Е.А. ГУСЬКОВА, Н.К. ГУСЬКОВА

Таблица

Влияние полихимиотерапии на структурно-функциональные показатели лейкоцитов: нейтрофилов (NE), лимфоцитов (LY), моноцитов (MO), эозинофилов (EO) (in vitro)

Группы, исследуемые показатели		NE		LY		MO		EO
Группы, исследуемые показатели		MEAN	SD	MEAN	SD	MEAN	SD	MEAN	SD
Контроль	V	142 + 0,790	18,82 + 0,360	85,0 + 0,398	14,99 + 0,369	165,3 + 1,685	18,2 + 0,856	163,6 + 1,266	19,82 + 0,456
n=50	C	140,2 + 0,463	6,19 + 0,164	110,9 + 0,540	11,63 + 0,349	118,9 + 0,856	4,68 + 0,117	143,0 + 1,569	6,69 + 0,127
	S	142,5 + 0,591	6,23 + 0,106	64,05 + 0,456	10,96 + 0,752	85,8 + 0,908	9,65 + 0,328	198,3 + 1,6	3,58 + 0,11
		164,0 + 2,90	28,67 + 2,40	94,16 + 1,10	18,38 + 1,03	188,3 + 3,05	27,25 + 2,40	169,8 + 1,70	26,03 + 3,91
До инкубации	V	р=0,0000	р=0,00065	р=0,0000	р=0,0094	р=0,0000	р=0,0010	р=0,0050	р=0,0128
с химио-		138,16 + 0,80	10,41 + 0,98	119,0 + 3,01	17,26 + 1,47	114,1 + 2,22	12,72 + 1,46	255,0 + 3,16	13,17 + 2,77
препаратами	C	р=0,0436	р=0,0003	р=0,0101	р=0,0117	р=0,0103	р=0,0000	р=0,0031	р=0,0181
		118,0 + 4,40	12,89 + 0,80	69,05 + 2,25	16,55 + 0,56	82,16 + 1,49	10,92 + 0,482	238,16 + 2,15	9,52 + 0,63
n=19	S	р=0,0001	р=0,0000	р=0,0288	р=0,0001	р=0,0271	р=0,0424	р=0,0430	р=0,0000
		146,0 + 3,00	20,64 + 0,77	81,5 + 0,76	16,7 + 0,66	170,5 + 2,44	22,08 + 1,744	167,1 + 1,37	20,26 + 1,08
После инкубации с хими-	V	р=0,0323 р₁=0,0043	р₁=0,0099	р=0,0024 р₁=0,0000	р=0,0318 р=0,0269	р₁=0,0010	р=0,0287	р=0,0111 р₁=0,0001	р₁=0,0310
После инкубации с хими-		151,87 + 4,13	8,23 + 0,63	125,16 + 1,24	12,9 + 1,33	127,3 + 2,56	8,72 + 1,192	177,0 + 1,34	11,8 + 1,27
опрепара-тами	C	р=0,0015 р₁=0,0026	р=0,0040 р₁=0,0243	р=0,0000 р₁=0,0315	р=0,0031	р=0,0056 р₁=0,0218	р=0,0020	р=0,0000	р=0,0005
n=19		133,0 + 2,21	10,27 + 0,71	77,83 + 2,25	14,1 + 0,711	93,16 + 2,05		200,3 + 2,02	9,19 + 0,46
	S	р=0,0006 р₁=0,0401	р=0,0232 р₁=0,0000	р=0,0000 р₁=0,0197	р=0,0043 р₁=0,0383	р=0,0015	10,05 + 0,458	р₁=0,0183	р=0,0000

Статья научная