Связь между эффектом гетерозиса у гибридов и генетическими дистанциями между родительскими линиями подсолнечника
Автор: Усатов А.В., Горбаченко Ф.И., Азарин К.В., Горбаченко О.Ф., Тихобаева В.Е., Маркин Н.В.
Рубрика: Селекция и семеноводство
Статья в выпуске: 2 (155-156), 2013 года.
Бесплатный доступ
Исследовали эффект гетерозиса у гибридов F 1, генетическое разнообразие родительских линий на основе SSR маркеров, а также связь генетических дистанций и комбинационной способности подсолнечника. Десять элитных инбредных линий (3 Rf-линии и 7 ЦМС-линии) и их гибриды были исследованы по высоте растений, урожайности, массе 1000 семян, масличности и лузжистости семянок. Полевые испытания проводили в течение 5-6 лет. Генетическое расстояние между родительскими линиями подсолнечника варьировало от 0,45 до 0,74. Обнаружена достоверная положительная корреляция между эффектом гетерозиса по урожаю семянок у гибридов (r = 0,79, р
Подсолнечник, гибрид, гетерозис, ssr маркеры, генетические дистанции
Короткий адрес: https://sciup.org/142151152
IDR: 142151152
Текст научной статьи Связь между эффектом гетерозиса у гибридов и генетическими дистанциями между родительскими линиями подсолнечника
Введение. В литературе приведен ряд гипотез о механизмах гетерозиса, но ни одна из них не дает полного представления о молекулярно-генетической природе этого эффекта [10]. С введением ДНК-маркеров в практику биологических исследований, появились новые возможности исследования природы гетерозиса в селекционном процессе, в частности для подбора родительских форм с высокой комбинационной способностью [10]. Возможность применения молекулярных маркеров для прогнозирования эффекта гетерозиса у гибридов, исходя из уровня генетического разнообразия родительских линий, была продемонстрирована на рисе [16], пшенице [9], рапсе [11] и кукурузе (Shieh and Thseng, 2002). Однако зачастую результаты, полученные различными авторами, неоднозначны в отношении связи между генетическими дистанциями и эффектом гетерозиса [12; 6; 14; 7]. В данной работе были исследованы уровень гетерозиса у гибридов F 1 , генетическое разнообразие родительских линий, основанное на SSR маркерах, а также связь генетических дистанций между родительскими генотипами и специфической комбинационной способностью у подсолнечника.
Материалы и методы. В конкурсных испытаниях в течение 5–6 лет изучали 7 гетерозисных гибридов, а также их родительские линии (селекционный материал Донской опытной станции им. Л.А. Жданова ВНИИМК). Исследовали следующие показатели: высоту растений (см); уро- жайность семянок (ц/га); массу 1000 семянок (г); масличность (%) и лузжистость семянок (%). Уровень гетерозиса у гибридов по каждому признаку рассчитывали по формуле:
ГРС = ((Vг – (Vп+Vм)/2)/(Vп+Vм)/2 × 100 %, где Vг – признак гибрида;
Vп – отцовский признак;
Vм – материнский признак.
Геномную ДНК выделяли из молодых листьев подсолнечника по методу Р. Бума c нашими модификациями [1]. При проведении ПЦР использовали 12 SSR праймеров: Ha 432, Ha 514, Ha 1442, Ha 1608, Ha1287, IUB6, ORS6, ORS 509, IUB4, HNCA1, OSU-1, HNCA2. Данные праймеры были отобраны нами ранее [2]. По матрице состояний с помощью компьютерной программы WinBoot (Yap and Nelson, 1996) рассчитывали генетические дистанции между родительскими линиями (коэффициент Жаккарда).
Индекс полиморфного информационного содержания (PIC) SSR маркеров вычисляли по формуле:
PICi = 1 - ∑nj=1Pji2, где Р – частота j паттерна для локуса i и суммирование распространяется на n паттернов.
Статистическую обработку экспериментальных данных проводили с помощью программы Excel пакета Microsoft Office, корреляционный анализ – по Спирмену (Доспехов, 1985).
Результаты и обсуждение. В таблице 1 суммированы значения коэффициента гетерозиса (ГРС, %) семи гибридных комбинаций относительно среднего значения признаков родительских форм.
Для получения первых шести гибридов из таблицы 1 использовали две отцовские линии: ВД 541 RF (первая группа – гибриды Донской 151, Партнер, Донской 22) и ВД 62 RF (вторая группа – гибриды Гарант, Престиж, Донской 1448), в то время как материнская форма у каждого гибрида была уникальна. В связи с чем данные гибридные комбинации представляют
Эффект гетерозиса у гибридов относительно среднего значения признака родительских форм, %
Скрещивание нескольких материнских форм с определенными отцовскими линиями привело в F 1 к гетерозису по селекционным признакам в различной степени (табл. 1). В первой группе гибридных комбинаций наибольший эффект был получен по признаку урожайности у гибрида Партнер (283 % превышения над средним значением родительских форм), а наименьший – у гибрида Донской 22 (207 %). Во второй – наименьшим эффектом гетерозиса по урожайности отличался гибрид Донской 1448 (120 %), в то время как гибриды Гарант и Престиж имеют более высокие значения (150–160 % превышения над средним значением родительских форм). Схожие результаты показаны для высоты растений и массы 1000 семян. Как и по урожайности, в первой и во второй группе наибольший эффект гетерозиса по данным признакам продемонстрировали гибриды Партнер и Гарант соответственно. В общем, гибриды из первой группы проявляют больший эффект гетерозиса по всем исследованным признакам, за исключением высоты растений, по которому большего эффекта достигли гибриды второй группы. Этот факт можно объяснить наличием у гибридов в группе единой генетической основы, определяемой отцовской формой. Гибрид Сигнал, относящийся к третьей группе, исходя из уровня гетерозиса по исследованным признакам, занимает промежуточное положение.
Изучаемые гибриды и родительские линии подсолнечника были генотипиро-ваны по системе SSR маркеров. Для каждой формы определены специфические, хорошо воспроизводимые индивидуальные SSR-спектры, различающиеся числом ампликонов и их подвижностью на электрофореграммах. При исследовании по 12-и микросателлитным маркерам данной группы генотипов было выявлено 42 аллеля. Число аллелей варьировало от 2 до 8 на локус. Размер детектируемых ДНК-фрагментов был от 110 до 900 пар нуклеотидов. Для анализа данных амплификации микросателитной ДНК был определен индекс полиморфного информационного содержания (PIC). Индекс полиморфного содержания, отражающий информативность маркеров, варьировал от 0,1 для праймера IUB 4 до 0,9 для праймера Ha 1287. Среднее значение индекса полиморфного информационного содержания для изученной группы генотипов составило 0,48.
На основании полученных данных SSR-анализа были рассчитаны генетические дистанции, отражающие генетическое расстояние между изученными генотипами родительских линий гибридов подсолнечника.
Как видно из таблицы 2, по данной системе маркеров был обнаружен высокий уровень генетического разнообразия между ЦМС- и Rf-линиями подсолнечника. В целом гибриды из первой группы, как и в случае эффекта гетерозиса по урожайности, демонстрируют большие значения генетического разнообразия родительских линий по сравнению с гибридами из второй группы.
Таблица 2
Генетические дистанции между родительскими линиями подсолнечника, рассчитанные по результатам SSR-анализа
№ |
Отцовская линия |
Материнская линия |
Генетическая дистанция |
Гибрид |
1 |
ВД 541 RF |
ВД 151 |
0,72 |
Донской 151 |
2 |
ЭД 1443 |
0,64 |
Партнер |
|
3 |
ВД 22 |
0,57 |
Донской 22 |
|
4 |
ВД 62 RF |
ЭД 931 |
0,55 |
Гарант |
5 |
ЭД 169 |
0,57 |
Престиж |
|
6 |
ВД 1448 |
0,45 |
Донской 1448 |
|
7 |
ВД 110 RF |
ЭД 236 |
0,74 |
Сигнал |
В таблице 3 суммированы результаты корреляционного анализа между генетическими дистанциями и уровнем гетерозиса по исследованным селекционным признакам.
Таблица 3
Коэффициент корреляции (по Спирмену) между генетическими дистанциями и ГРС по исследованным признакам
Гене-тичес-кая дистанция |
Уро жай-ность, % |
Мас-личность, % |
Луз-жис-тость, % |
Масса 1000 семян, % |
Высота растения, % |
|
Генетическая дистанция |
1 |
٭0,79 |
-0,43 |
0,47 |
0,65 |
-0,56 |
٭p<0,05
Проведенный анализ показал достоверную положительную корреляцию (r = 0,79, p<0,05) между урожайностью гибридов и генетическим расстоянием между родительскими линиями. По остальным признакам корреляция между уровнем гетерозиса и генетическими дистанциями не выявлена (табл. 3).
На сегодняшний день многочисленные исследования, сфокусированные на определении взаимосвязи генетических дистанций между исходными родительскими линиями и уровнем гетерозиса у гибридов F 1 , не позволяют сделать однозначный вывод. Так, в ранних работах на кукурузе было показано, что данные генетических дистанций, основанные на RFLPs маркерах, хорошо коррелируют с данными родословных при распределении линий по гетерозисным группам [15]. Сходные результаты получены для кукурузы и по RAPD спектрам (Shieh and Thseng, 2002) . Значительная корреляция урожайности семян и высоты растений гибридов с генетическими дистанциями, вычисленными по AFLP, продемонстрирована на подсолнечнике [5]. В более поздних исследованиях показана возможность использовать генетические дистанции между родительскими линиями для прогнозирования эффекта гетерозиса у гибридов F 1 пшеницы [9] и моркови [8].
С другой стороны, в исследованиях, проведенных на горчице и люцерне, продемонстрировано отсутствие корреляции гетерозиса с генетическими дистанциями, рассчитанными на основе полиморфизма ДНК (SSR, RAPD, AFLP-маркеры) [12; 14]. Низкая корреляция между генетическими дистанциями и эффектом гетерозиса также показана на кукурузе, перце, сое, пшенице, рапсе [3; 4; 11; 6; 12].
Такое противоречие в результатах можно объяснить как различиями молекулярных маркеров, затрагивающих различные участки геномов, так и использованием различного селекционного материала, представляющего уникальные модели исследования. В свою очередь, в результате нашего исследования, проведенного на высокогетерозисных гибридах подсолнечника с помощью SSR маркеров, была обнаружена достоверная корреляция между эффектом гетерозиса по урожайности и генетическими дистанциями. Достоверная корреляция с другими исследованными селекционными признаками не выявлена.
Несомненно, данные о зависимости между генетическими дистанциями родительских линий и эффектом гетерозиса по урожайности у гибридов F 1 подсолнечника, полученные в этом исследовании, не могут быть универсальны. Они требуют более широкого анализа. Однако полученные результаты представляют ценность для формирования новых подходов в селекции. На сегодняшний день такие подходы, предшествующие полевым испытаниям и сфокусированные на разработке моделей, повышающих точность прогноза эффекта гетерозиса в различных схемах скрещивания, активно развиваются [13].
Таким образом, можно заключить, что изученная маркерная система имеет высокий дискриминационный потенциал для идентификации линий культурного подсолнечника, а данные о зависимости генетических дистанций и урожайности могут быть использованы в дальнейшем для планирования эффективных скрещиваний в селекции подсолнечника на Дон- ской опытной станции им. Л.А. Жданова ВНИИМК.
Исследование выполнено в рамках темы Министерства образования и науки РФ (№ 4.5642.2011) и при финансовой поддержке ФЦП Министерства образования и науки РФ (госконтракт № 16.740.11.0485).