Т-лимфоциты большого сальника при серозных пограничных опухолях яичников

Введение. Пограничные опухоли яичников характеризуются атипичным эпителием пролиферативного типа, отличными друг от друга ядрами клеток, повышенным количеством митозов и папиллярными разрастаниями. Однако заболевание протекает без деструктивной стромальной инвазии, занимая промежуточное место между доброкачественными и злокачественными опухолями. Пограничные опухоли имеют благоприятный прогноз, но иногда могут рецидивировать и в редких случаях имплантационно распространяться по серозным оболочкам. Следовательно, данные новообразования рассматриваются как особенная патология женских половых органов [1]. Отметим, что распространенность заболевания в последнее время возрастает и составляет 15–20 % всех эпителиальных опухолей яичников.

Большой сальник выполняет различные функции в организме: предотвращает бактериальную инвазию, регулирует водно-электролитный баланс, участвует в регенерации, метаболизме, иммунологических реакциях. В нем имеются специфические образования – млечные пятна, которые характеризуются не только стабильной структурой (их строму составляют ретикулярные и мезотелиальные клетки), но и динамичным клеточным составом. Наиболее часто обнаруживаемые и изменяющие свою численность клетки – это лимфоциты и макрофаги. Млечные пятна большого сальника имеют свою капиллярную сеть, характеризуются округлой формой, их диаметр варьируется от 300 до 800 мкм.

Одну из основных ролей в иммунных процессах, происходящих в большом сальнике, играют Т-лимфоциты. Они являются частью млечных пятен и составляют около 21 % общего количества клеток [2]. Такие Т-лимфоциты имеют диаметр до 10 мкм. Лимфоциты относятся к группе мигрирующих клеток [3]. Среди Т-лимфоцитов встречаются CD4+ и CD8+ клетки, которые могут располагаться хаотично [4]. Клетки CD4+ участвуют в выработке IL-10 и CD36 (мембранного белка, который экспрессируется на поверхности макрофагов и связывает жирные кислоты и фосфолипиды) [5]. Уровень IL-10, который поддерживают CD4+ Т-супрес-соры, может повлиять на экспрессию матрикс-ных металлопротеиназ и их тканевых ингибиторов. Матриксные металлопротеиназы играют одну из важнейших ролей в развитии злокачественного опухолевого процесса в яичниках [6]. Также описаны особенности ряда других иммунокомпетентных клеток, наличие которых характерно для большого сальника. Они могут замедлять развитие опухоли либо, наоборот, способствовать ее распространению.

Воздействие лимфоидных клеток врожденного иммунитета, например ILC2, на опухолевый рост может иметь многовекторную направленность. Это тканерезидентные иммунные клетки, которые могут обеспечивать врожденные защитные механизмы за счет регенерации ткани. Запуску продукции клеток ILC2 и их активации способствует интерлейкин-33 (IL-33). Экспрессия IL-33 в клетках опухоли увеличивает потенциальную способность антигена инициировать иммунный ответ через активацию Т-лимфоцитов (СD8+). В то же время экспрессия IL-33 в стромальных клетках оказывает иммуносупрессивный эффект. В этих процессах принимают участие регуляторные Т-лимфоциты [7, 8]. Среди регуляторных Т-лимфоцитов CD4+ в большом сальнике можно выделить отдельную группу клеток, которые связаны с жировой тканью [9]. Они экспрессируют хемокиновые рецепторы CCR1 и CCR2 (рецепторы C-C-хемоки-нов 1,2), синтез которых сопровождается повышенной продукцией иммуносупрессивного и противовоспалительного цитокина интерлейкина-10 и выделением белков CD36, принимающих участие в реакциях с жирными кислотами. Развитие регуляторных Т-лимфоцитов, находящихся в жировой ткани, обеспечивается воздействием на них регуляторов транскрипции BATF, IRF4, PPAR-γ, IL-33 [10, 11]. В случае, если рецептор IL-33 находится в неактивном состоянии, нарушается развитие регуляторных Т-клеток в висцеральной жировой ткани. Это повышает восприимчивость жировой ткани к инсулину, вследствие чего могут возникать изменения в метаболизме, оказывающие косвенное влияние на системные иммунные процессы. T-хелперы 17 (Th17), которые подвергаются дифференцировке под действием супрессорных клеток (CD33+), могут нарушать функционирование T-клеток (CD8+), а также в дальнейшем связываться в большом сальнике с клетками-супрессорами (CD33+), в связи с чем увеличивается риск прогрессирования опухолевого заболевания [12].

Цель исследования. Описать субпопуляции Т-лимфоцитов CD4+, CD8+ большого сальника при серозной пограничной опухоли яичников.

Материалы и методы. Иммуногистохимическими методами проводилось определение субпопуляций Т-лимфоцитов CD4+ и CD8+ большого сальника при серозной пограничной опухоли яичников. В исследование были включены 30 женщин с серозными пограничными опухолями яичников: 15 чел. с имплантами и 15 чел. без них. Пациенткам проводилось хирургическое лечение с оментэктомией, которая применялась в связи с подозрением на злокачественное новообразование. Возраст пациенток составлял от 20 до 45 лет, у всех участников исследования отсутствовали тяжелые сопутствующие заболевания.

Для выявления клеток лимфоидной популяции в сальнике применялись антитела к специфическим маркерам Т-лимфоцитов: Т-хелперам (клон 4B12, антитела моноклональные мышиные к человеческим CD4), цитотоксическим Т-лимфоцитам (клон DK25, антитела моноклональные мышиные к человеческим CD8). Морфометрическое исследование изображений препаратов, которые были получены с помощью микроскопа Nikon Eclipse E200/CFI60 (×400, ×800), предусматривало подсчитывание количества позитивно окрашенных специфическими маркерами (CD8, CD4) клеток на условную единицу площади.

Статистическая обработка полученных результатов осуществлялась с помощью программы STATISTICA 10 (StatSoft). Использовались критерий Шапиро – Уилка, t-критерий Стьюдента, U-критерий Манна – Уитни. Статистически достоверными различия считались при p<0,5.

Результаты. Анализ экспрессии CD8 и CD4 продемонстрировал, что количество CD8+ Т-лимфоцитов при серозной пограничной опухоли без экстраовариальных очагов со- ставило 51,32±3,42, а при серозной пограничной опухоли с экстраовариальными очагами – 14,38±2,53; число CD4+ клеток – 17,65±7,21 и 5,73±1,1 соответственно (табл. 1, рис. 1–4).

Таблица 1

Table 1

Уровни экспрессии CD8-, CD4-маркеров в большом сальнике при серозных пограничных опухолях яичников

Expression levels of CD8 and CD4 markers in the greater omentum in serous borderline ovarian tumors

Рис. 1. Гистологический препарат большого сальника при серозной пограничной опухоли без экстраовариальных очагов. Иммуногистохимическая реакция с антителами к CD8 (клон DK25), ×800

Маркеры Markers	Серозная ПОЯ без имплантов Serous borderline ovarian tumors without implants	Серозная ПОЯ с имплантами Serous borderline ovarian tumors with implants	p
CD8	51,32±3,42	14,38±2,53	<0,5
CD4	17,65±7,21	5,73±1,1	<0,5

Fig. 1. Histological specimen of the greater omentum with serous borderline tumor without extraovarian foci.

Immunohistochemical reaction with antibodies to CD8 (clone DK25). Magnification ×800

Рис. 2. Гистологический препарат большого сальника при серозной пограничной опухоли с экстраовариальными очагами. Иммуногистохимическая реакция с антителами к CD8 (клон DK25), ×800

Fig. 2. Histological specimen of the greater omentum with serous borderline tumor with extraovarian foci.

Immunohistochemical reaction with antibodies to CD8 (clone DK25). Magnification ×800

Рис. 3. Гистологический препарат большого сальника при серозной пограничной опухоли без экстраовариальных очагов. Иммуногистохимическая реакция с антителами к CD4 (клон 4B12), ×800

Fig. 3. Histological specimen of the greater omentum with serous borderline tumor without extraovarian foci. Immunohistochemical reaction with antibodies to CD4 (clone 4B12). Magnification ×800

Рис. 4. Гистологический препарат большого сальника при серозной пограничной опухоли с экстраовариальными очагами. Иммуногистохимическая реакция с антителами к CD4 (клон 4B12), ×800

Fig. 4. Histological specimen of the greater omentum with serous borderline tumor with extraovarian foci. Immunohistochemical reaction with antibodies to CD4 (clone 4B12). Magnification ×800

Обсуждение. Среди клеток большого сальника можно выделить Т-хелперы (CD4) и цитотоксические лимфоциты (CD8). Их количество варьирует в зависимости от варианта серозной пограничной опухоли: при серозных пограничных опухолях без экстраовариаль-ных очагов число указанных клеток больше, чем при серозной пограничной опухоли с экс-траовариальными очагами.

Большой сальник принимает участие в иммунных процессах за счет популяции Т-лимфоцитов.

Повышенное количество клеток CD4+, CD8+ при серозной пограничной опухоли без имплантов свидетельствует о реализации противоопухолевого иммунитета и развитии иммунных реакций для обеспечения защитного механизма против последующего распространения опухолевых клеток по большому сальнику [13].

Уменьшение числа CD4+, CD8+ Т-лимфоцитов у пациенток с серозной пограничной опухолью с имплантационным поражением

сигнализирует о снижении их функциональной активности, что может стать причиной ослабления защитных свойств большого сальника. Так, снижение количества Т-лимфоцитов может привести к нарушению взаимодействия между лимфоцитами, что способствует уменьшению сопротивляемости тканей к негативным воздействиям, а в дальнейшем – распространению опухолевого процесса.

Заключение. Популяции Т-лимфоцитов (CD4, CD8) присутствуют в большом сальнике и сохраняют свою функциональную активность. Их численность варьируется в зависимости от варианта течения серозной пограничной опухоли яичников.

Для серозной пограничной опухоли без имплантов характерно увеличение числа клеток лимфоцитарной популяции (Т-лимфоциты), а для опухоли с имплантами – уменьшение.

Таким образом, большой сальник участвует в осуществлении иммунных реакций и обеспечении противоопухолевого иммуни-

тета за счет повышенного содержания Т-лим- свидетельствуют о реализации защитной фоцитов. Результаты данного исследования функции большого сальника.