Твердофазный иммуноферментный анализ (прямой вариант) для выявления токсигенных холерных вибрионов О1, О139 серогрупп
Автор: Алексеева Л.П., Якушева О.А., Евдокимова В.В., Яговкин М.Э., Зюзина В.П.
Журнал: Вестник Пермского университета. Серия: Биология @vestnik-psu-bio
Рубрика: Микробиология
Статья в выпуске: 4, 2022 года.
Бесплатный доступ
В результате проведённых исследований оптимизирован метод прямого твёрдофазного иммуноферментного анализа (ТИФА) для выявления токсигенных штаммов холерных вибрионов О1, О139 серогрупп на основе моноклональных и поликлональных антитоксических иммуноглобулиновых пероксидазных конъюгатов. Установлены оптимальные параметры его постановки: сенсибилизация планшета токсинсодержащими препаратами, разведёнными в фосфатно-солевом буфере (ФСБ) рН 7.4 до титра 1:2-1:4, их адсорбция на твёрдой фазе планшета в течение 2 ч. при 37°С, блокировка свободных сайтов связывания 1%-ным раствором бычьего сывороточного альбумина (БСА) - 30 мин. (37°С), время контакта исследуемого образца с моно- или поликлональным пероксидазными конъюгатами - 30 мин. (37°С). Испытания на гомологичных и гетерологичных штаммах показали высокую специфичность иммуноферментного анализа и возможность его использования для обнаружения токсигенных холерных вибрионов.
Холерный токсин, поликлональный и моноклональный пероксидазные конъюгаты, иммуноферментный анализ, лабораторная диагностика холеры
Короткий адрес: https://sciup.org/147239678
IDR: 147239678 | DOI: 10.17072/1994-9952-2022-4-280-287
Список литературы Твердофазный иммуноферментный анализ (прямой вариант) для выявления токсигенных холерных вибрионов О1, О139 серогрупп
- Алексеева Л.П. и др. Современные методические приемы очистки холерного токсина // Вестник биотехнологии и физико-химической биологии им. Ю.А. Овчинникова. 2019. Т. 15, № 1. С. 5-9.
- Ашмарин И.П. Воробьев А.А. Статистические методы в микробиологических исследованиях. Л.: Медгиз, 1962. 180 с.
- Баранова Е.В. и др. Конструирование иммунохроматографического теста на основе моноклональных антител для выявления холерного токсина // Вестник биотехнологии и физико-химической биологии имени Ю.А. Овчинникова. 2020. Т. 16, № 2. С. 18-27.
- Егоров А.М. Теория и практика иммуноферментного анализа. М.: Высш. шк., 1991. 288 с.
- Курчева С.А. и др. Разработка диагностической тест-системы для выявления специфических антител к возбудителю бруцеллеза в непрямом методе иммуноферментного анализа // Современные проблемы науки и образования. 2016. № 2. URL: http://www.science-education.ru/ru/article/view?id=24244.
- Михеева Е.А. и др. Получение и характеристика антителопродуцирующих гибридом и моноклональных иммуноглобулинов к энетеротоксину Vibrio cholerae // Биотехнология. 2014. Т. 30, № 3. С. 49-54.
- Петрова Е.Э. и др. Получение и характеристика моноклональных антител к холерному токсину // Биоорганическая химия. 2009. Т. 35, № 3. С. 357-367.
- Шашкова А.В. и др. Фенотипический и молекулярно-генетический анализ генетически измененного токсигенного штамма V. cholerae 301 биовара Эль Тор, изолированного в 2011 г. в России // Проблемы особо опасных инфекций. 2011. № 14. С. 61-64.
- Якушева О.А. и др. Характеристика и оценка диагностической значимости поли и моноклональ-ных пероксидазных конъюгатов к холерному токсину // Вестник биотехнологии и физико-химической биологии им. Ю.А. Овчинникова. 2020. Т. 16, № 2. С. 37-43.
- Ahn-Yoon S. et al. Ganglioside-liposome immunoassay for the ultrasensitive detection of cholera toxin // Analytical Chemistry. 2003. Vol. 75, № 10. P. 2256-2261. doi: 10.1021/ac026428t.
- Bayat M. et al. Corrigendum to "Development of IgY-Based Sandwich ELISA as a Robust Tool for Rapid Detection and Discrimination of Toxigenic Vibrio cholera // Canadian Journal of Infectious Diseases and Medical Microbiology. 2019. doi: 10.1155/2019/4164982.
- Crowther John R. Molecular Biology Techniques, ELISA Guide. Second edition. Humana Press, part of Springer Science + Business Media, LLC 2009.
- Greig D.R. et al. A real-time multiplex PCR for the identification and typing of Vibrio cholerae // Diagnostic Microbiology and Infectious Disease. 2018. Vol. 90, № 3. P. 171-176. doi: 10.1016/j.diagmicrobio.
- Hossain Z.Z. et al. Quantitative Analysis of Nucleic Acid Extraction Methods for Vibrio cholerae Using Real-time PCR and Conventional PCR // Mymensingh Medical Journal. 2018. Vol. 27, № 2. P. 327-335.
- Iwanaga M., Kuyyakanond T. Large production of cholera toxin by Vibrio cholerae O1 in yeast extract peptone water // Journal of Clinical Microbiology. 1987. Vol. 25, № 1. P. 2314-2316.
- Jin D. et al. Quantitative detection of Vibrio cholera toxin by real-time and dynamic cytotoxicity monitoring // Journal of Clinical Microbiology. 2013. Vol. 51, № 12. P. 3968-3974. doi: 10.1128/JCM.01959-13.
- Mehrabadi J.F. et al. Detection of toxigenic Vibrio cholerae with new multiplex PCR // Journal of Infection and Public Health. 2012. Vol. 5, № 3. P. 263-267. doi: 10.1016/j.jiph.2012.02.004.
- Meza-Lucas A. et al. Comparison of DOT-ELISA and Standard-ELISA for Detection of the Vibrio cholerae Toxin in Culture Supernatants of Bacteria Isolated from Human and Environmental Samples // Indian Journal of Microbiology. 2016. Vol. 56, № 3. P. 379-382. doi: 10.1007/s12088-016-0596-2.
- Shlyapnikov Y.M. et al. Rapid simultaneous ultrasensitive immunodetection of five bacterial toxins. // Analytical Chemistry. 2012. Vol. 84, № 13. P. 5596-6603. doi: 10.1021/ac300567f.
- Tuteja U. et al. Simultaneous direct detection of toxigenic and non-toxigenic Vibrio cholerae from rectal swabs and environmental samples by sandwich ELISA // Journal of Medical Microbiology. 2007. Vol. 56, № 10. P. 1340-1345. doi: 10.1099 / jmm.0.47166-0.
