Ультраструктура Mycobacterium bovis при воздействии дезинфицирующего средства "Рекодез"

Важное место в системе противотуберкулезных мероприятий занимают вопросы санации внешней среды. Однако способность микобактерий туберкулеза длительное время сохраняться в объектах ветеринарного надзора, высокая устойчи вость их к воздействиям различных неблагоприятных факторов делают эту инфекцию трудноискоренимой [1, 2, 4, б, 7]. Понимание механизмов действия дезинфицирующих средств на бактерии требует новых знаний об их структурной организа- ции и физических свойствах, как при физиологических состояниях, так и при воздействии неблагоприятных факторов. Существующие методы исследования биологической эффективности воздействия дез-осредств на популяцию микроорганизмов не в полной мере дают информацию о механизмах выживания инфекционных агентов и морфоструктурных процессах, возникающих в бактериальных клетках при дезинфекции [8].

Для подтверждения результатов бактерицидного действия препарата в лабораторных опытах, было проведено электронно-микроскопическое исследование интактной и после воздействия дезосред-ством клетки возбудителя туберкулеза.

Материалы и методы сследова-ний. Изучение ультраструктуры M.bovis проводили согласно методическому пособию «Электронная микроскопия в цитологических исследованиях» [3]. Для электронной микроскопии использовали взвесь микроорганизмов M.bovis плотностью 2 млрд.микробных тел в 1 мл физиологического раствора, которую подвергали воздействию препарата «Рекодез» в бактерицидных концентрациях 0,5% и 1% (экспозиция составила 2 часа). После окончания срока контакта препарата с микроорганизмами нейтрализацию рабо- пробы подвергали 3-х кратному отмыванию путем центрифугирования при 6000 об./мин в течение 30 мин. В качестве контроля была взята аналогичная взвесь культуры M.bovis, обработанная физиологическим раствором. Для электронно-микроскопических исследований применяли негативное контрастирование 2%-ным раствором фосфорно-вольфрамовой кислоты. Полученные препараты рассматривали в электронном микроскопе просвечивающего типа с минилинзами ПЭМ-100 при инструментальном увеличении 10 тысяч.

Результаты исследований. Изучение ультраструктуры M.bovis показало, что интактная клетка - контроль (рис.1.) имеет овальную форму, на поверхности клетки просматривается выраженная прозрачная зона - микрокапсула (1). На внутреннем слое микрокапсулы виден наружный слой клеточной стенки (2). За микрокапсулой следует, хорошо оформленная, клеточная стенка бактерии (3), за которой просматривается цитоплазматическая мембрана (4). В толще протопласта (цитоплазма) наблюдаются плотные электронно-негативные образования (5), располагающиеся по периферийной части бактериальной клетки и являющиеся, по всей вероятности, скоплениями рибосом. Ядро практически чих растворов дезосредства проводили общепринятыми методами [5]. Затем просматривается.

Рисунок 1- Ультраструктура M.bovis (контроль), негативное контрастирование, х 10000.

• 1.    Микрокапсула

• 2.    Наружный слой клеточной стенки

• 3.    Клеточная стенка

• 4.    Цитоплазматическая мембрана

• 5.    Скопление рибосом

2. Локальное размытие цитоплазматической мембраны

Изучение ультраструктуры клетки M.bovis при воздействием различных концентраций раствора препарата «Рекодез» показало, что при использовании препарата в концентрации 0,5% при экспозиции 2 часа (рис.2) наблюдаются частичные изменения микрокапсулы, контур которой не четко выражен и местами приобретает пониженную электронную плотность (1). Так же регистрируется локальное размытие цитоплазматической мембраны в виде диффузной массы (2). Цитоплазма клетки имеет участки различной электронной плотности, рибосомы не дифференцируются.

Рисунок 2 - M.bovis после воздействия 0,5%-ного раствора препарата «Рекодез», негативное контрастирование, хЮООО.

1. Частичное изменение микрокапсулы

Повышение концентрации препарата до 1% при том же сроке экспозиции (рис.З) приводит к более резким изменениям клеточной структуры микобактерии. При этом видны повреждения микрокапсулы (1) и клеточной стенки (2), локализо ванные преимущественно на апикальных концах клетки, они теряют четкие очертания и приобретают вид волокнистой массы. Электронная плотность цитоплазмы неоднородна, отмечаются места с повышенной плотностью.

Рисунок 3 - M.bovis после воздействия 1%-ного раствора препарата «Рекодез», негативное контрастирование, xlOOOO.

I.    Повреждение микрокапсулы

2.    Повреждение клеточной стенки

3.    Неоднородность цитоплазмы.

Заключение. Механизм воздействия препарата «Рекодез» на микроорганизмы заключается в том, что молекулы поверхностно-активного вещества, входящего в состав препарата, способны не только повышать проницаемость поверх- костных клеточных структур (микрокапсулы и клеточной стенки) или полностью разрушать их, но могут также денатурировать белки, включая ферменты, вырабатываемые микроорганизмом.

Полученные данные подтверждают высокую бактерицидную активность препарата «Рекодез» в отношении микобактерий туберкулеза.

Резюме

В данной работе представлены результаты воздействия дезинфицирующего средства «Рекодез» на ультраструктуру M.bovis.