Вакцина «ЭнцеВир» - современный препарат для профилактики клещевого энцефалита

E-mail: viriontomsk@mail.ru

ВАКЦИНА «ЭНЦЕВИР» – СОВРЕМЕННЫЙ ПРЕПАРАТ ДЛЯ ПРОФИЛАКТИКИ КЛЕЩЕВОГО ЭНЦЕФАЛИТА

• *    Филиал ФГУП «НПО «Микроген» в г. Томск НПО «Вирион», г. Томск, Россия;

• * * ЦА ФГУП «НПО «Микроген» МЗ РФ, г. Москва

  В 2009 году исполняется 105 лет со дня открытия первого в Сибири бактериологического института имени Ивана и Зинаиды Чуриных, созданного при Томском императорском университете, имя которого сегодня – НПО «Вирион». Важнейшими задачами объединения всегда были и остаются разработка, производство и усовершенствование иммунобиологических и химико-фармацевтических препаратов. Одним из наиболее значимых препаратов в номенклатуре предприятия можно назвать вакцину для профилактики клещевого энцефалита (КЭ) «ЭнцеВир».

Производство вакцины начато в 1954 г. Это был препарат, приготовленный на основе штамма вируса КЭ восточного типа «Софьин». Он обладал высокими иммуногенными свойствами, но в то же время был достаточно реактогенным, причиной чего являлась мозговая ткань белых мышей. Указанный фактор являлся существенным недостатком и уменьшал практическую ценность вакцины.

В 1960 г. учеными Е.Н. Левкович, Г.Л. Засухиной и А.К. Шубладзе было выявлено и экспериментально подтверждено [1, 2], что наиболее полное освобождение препарата от мозговой ткани мышей достигается при культивировании вируса в клеточных культурах, например клетках куриного эмбриона.

В 1962 г. Томский НИИВС приступил к разработке вакцины на основе вируса, продуцированного на культуре клеток фибробластов эмбриона курицы (ФЭК). В производстве использовали штамм «Пан» западного генотипа. Вирус инактивировали формалином, сорбировали на геле алюминия гидроксида. Вакцину выпускали в лиофилизированном виде. Итогом этой большой комплексной работы стала разработка технологии изготовления инактивированной сорбированной культуральной вакцины против КЭ.

К 1981 г. Томский НИИ вакцин и сывороток стал основным производителем и центром исследований по совершенствованию технологии вакцины против КЭ в стране, ежегодно выпуская 4-5 млн доз препарата. При этом продолжалось изучение иммунологической и эпидемиологической эффективности препарата. Выявленные факты недостаточной эпидемиологической эффективности вакцины, изготовленной на основе штамма западного варианта вируса КЭ «Пан», особенно в восточных регионах страны, предопределили следующую задачу – поиск новых штаммов.

С 1983 г. технология вакцины претерпела значительные изменения: в производство был внедрен штамм вируса КЭ «205» восточного антигенного типа [3, 4], внесены коррективы в режимы культивирования вируса. Эта работа положила начало выпуску вакцины против КЭ новой модификации.

В 1985-1987 гг. в соответствии с Программой МЗ СССР были проведены комиссионные испытания разных вакцин против КЭ, существовавших в те годы. На основании результатов испытаний был сделан вывод о том, что вакцина Томского НИИВС, изготовленная на основе штамма «205», характеризуется высокой антигенной активностью: частота сероконверсий у привитых достигала 89,5% [4, 5, 6]. По этому показателю наша вакцина превосходила концентрированные вакцины других производителей.

Томская вакцина долгие годы оставалась основным препаратом для профилактики КЭ в нашей стране. Ее массовое применение позволило значительно снизить заболеваемость КЭ и уменьшить число случаев развития тяжелых осложнений и инвалидизации больных КЭ [7, 8]. Однако новое время требовало новых качественных характеристик вакцинных препаратов: изменились международные требования к качеству вакцин, этические нормы вакцинации, изменилась эпидемиологическая характеристика КЭ, изменился и сам человек как объект вакцинации [9].

В 1997 г. Экспертным комитетом по биологической стандартизации ВОЗ были введены международные руководящие указания к производству и контролю качества белковых вакцин BS /96.1855, которые описывают требования, предъявляемые к инактивированным вакцинам против КЭ. Особое внимание в них уделено вопросам бактериологической стерильности всех составляющих вакцин, га- рантированной инактивации вируса, методам, применяемым для очистки, требованиям к консервантам, антибиотикам и вспомогательным веществам, используемым при производстве вакцин. Согласно этим требованиям, современные вакцины против КЭ должны представлять собой очищенную вирионную фракцию вируссодержащей культуральной жидкости, инактивированную раствором формальдегида [10].

Учитывая современные требования ВОЗ, в 1998 г. в НПО «Вирион» были организованы научно-исследовательские работы по очистке препарата. Эффективность очистки в конечном продукте оценивали по содержанию общего белка, остаточного формальдегида, антибиотика канамицина [11, 12, 13, 14]. А главным критерием оценки степени его очистки стало содержание белков куриного эмбриона на уровне не более 0,5 мкг в дозе.

В результате многочисленных экспериментов технологическая схема производства вакцины была дополнена новыми стадиями [10, 11, 15] – концентрации полуфабриката и его очистки и состояла из следующих этапов:

• •    репродукция вируса КЭ в культуре клеток куриных эмбрионов;

• •    инактивация вируса КЭ формальдегидом;

• •    очистка инактивированного вирусного сбора, в свою очередь, состоящая из стадий:

  – осаждение клеточного детрита протаминсульфатом,

  – проточное центрифугирование с последующей микрофильтрацией,

  – концентрирование полуфабриката методом ультрафильтрации,

  – очистка концентрата от низкомолекулярных примесей методом гель-хроматографии на модифицированных макропористых кремнезёмах;

• •    приготовление вакцины, которая включает в себя следующие операции:

  – стандартизация полуфабриката по концентрации вирусного антигена,

  – стабилизация вирусного антигена,

  – стерилизующая фильтрация полуфабриката,

  – сорбция на геле алюминия гидроксиде.

Вновь введенные в технологию процессы позволили достичь значительной чистоты вакцины: • в одной дозе вакцины, то есть в 0,5 мл, содержание куриного белка не превышает 0,5 мкг, а содержание общего белка не превышает 65 мкг;

• •    в вакцине отсутствуют формальдегид и антибиотик кана-мицин, что подтверждается контрольными тестами.

Новый препарат получил коммерческое название «ЭнцеВир®» – вакцина клещевого энцефали- та культуральная, очищенная, концентрированная, инактивированная, сорбированная, жидкая. Технология вакцины «ЭнцеВир» приоритетна и защищена патентом № 2203089 [16]. Промышленное производство вакцины было начато в 2001 г.

Усовершенствованная технологическая схема позволила выпускать высокоэффективную вакцину, качество которой соответствует современным международным требованиям [17, 18], значительно улучшив ее потребительские свойства:

• •    максимально сохранить антигенную активность;

• •    значительно снизить вероятность побочных реакций на введение препарата, а также развитие возможных аллергических реакций;

• •    изменить способ введения препарата на внутримышечный (в дельтовидную мышцу), что обеспечивает большую биодоступность и этим увеличивает иммуногенность (по сравнению с подкожным способом введения);

• •    уменьшить дозу до 0,5 мл ввиду более высокой концентрации антигена вируса КЭ в препарате,

• •    изменить схему вакцинации – перейти от громоздкой 4-кратной схемы вакцинации к 3-кратной: основной 0-5-12 мес. и экстренной 0-2-12 мес. и отдалёнными ревакцинациями через каждые три года;

• •    ввиду высокой степени очистки использовать препарат для вакцинации как взрослых, так и детей и подростков;

• •    выпуск вакцины по одной дозе в ампуле дает ряд преимуществ: точность дозирования при вакцинации, гарантию соблюдения правил асептики, сокращение манипуляций медицинским персоналом. Клинические испытания вакцины «ЭнцеВир» проводились в соответствии с Законом о лекарственных средствах, в два этапа [15, 16, 17, 18]. На первом этапе исследовалась эффективность вакцинации у взрослых – лиц от 18 лет и старше [9, 19]. На втором этапе изучались результаты иммунизации вакциной детей и подростков в возрасте от 3 до 18 лет [20]. В качестве препарата сравнения была назначена вакцина клещевого энцефалита производства ИПВЭ им. М.П. Чумакова (г. Москва). Необходимо отме-

• Таблица 1

Уровень титров антител в ИФА через 1 месяц после второй вакцинации

Контингент вакцинированных (лет)	Уровень титров антител в ИФА, %
	100-200	400-1600	3200-12800	25600 и более	Всего
Дети					100
От 3 до 6	7,9±4,4	15,8±5,9	76,3±6,9	–
От 7 до 14	1,5±1,5	29,8±5,6	67,2±5,7	1,5±1,5
От 15 до 18	6,2±3,0	34,4±5,9	57,8±6,2	1,6±1,6
Взрослые
От 18 и старше	2,1±0,2	28,9±1,1	66,9±1,7	2,1±0,1

тить, что по условиям клинических испытаний участие в них принимали волонтеры только с серонегативным по КЭ фоном.

В ходе исследования было выявлено (табл. 1), что через 1 месяц после вакцинации уровень титров антител в интервале 3200-12800 был отмечен у 76,3% детей в возрасте от 3 до 6 лет, у 67,2% детей в возрасте от 7 до 14 лет, у 57,8% подростков в возрасте от 15 до 18 лет и у 66,9% взрослых. В целом через 1 месяц после вакцинации 100% волонтеров имели защитные титры.

Результаты клинических испытаний вакцины «ЭнцеВир» свидетельствовали о выраженной иммуногенности вакцины во всех возрастных группах. На основании полученных данных вакцина была рекомендована к использованию для проведения профилактики КЭ детям с 3-летнего возраста, подросткам и взрослым.

Сегодня на российском рынке имеются вакцины для профилактики КЭ четырех производителей. Это: • вакцина клещевого энцефалита производства Ин ститута ПВЭ им М.П. Чумакова РАМН (Москва, Россия);

• •    «ЭнцеВир» – вакцина клещевого энцефалита производства НПО «Вирион», ФГУП «Микроген» (Томск, Россия);

• •    ФСМЕ-Иммун Инжект производства Компании «Бакстер» (США – Австрия);

• •    «Энцепур» – вакцина детская и взрослая производства Фирмы «НОВАРТИС» (Германия).

По оценке Национального органа контроля ГИСК им. Л.А. Тарасевича, все представленные вакцины соответствуют современным требованиям, предъявляемым ВОЗ к вакцинным препаратам и яв- ляются взаимозаменяемыми [21, 22, 23, 24]. Все вакцины изготовлены по принципиально сходным технологиям и представляют собой очищенную концентрированную стерильную взвесь инактивированного формалином вируса, полученного путем его репродукции в культуре клеток куриных эмбрионов и сорбированного на геле алюминия гидроксиде. Полный курс вакцинации обеспечивает выработку специфических антител не менее чем у 90% привитых, что является хорошим показателем эффективности. Основные качественные характеристики вакцин представлены в таблице 2.

Из таблицы видно, что инактиватор вируса формальдегид в отечественных вакцинах в готовом препарате отсутствует, в импортных препаратах его остаточное содержание одинаково – менее 5 тысячных мг на дозу.

Содержание сорбента – алюминия гидроксида – в трех вакцинах фактически одинаково, и только в немецкой вакцине содержание сорбента выше фактически в два раза.

Сахароза используется в технологии в качестве стабилизатора. В вакцине Института полиомиелита – ее содержание до 38 мг на дозу, в вакцинах «Энце-Вир» и «Энцепур» – не более 30 мг в дозе. Технология производства австрийской вакцины не предполагает использование сахарозы в качестве стабилизатора.

Содержание следующего компонента – альбумина человека, используемого в качестве стабилизатора, в отечественных вакцинах одинаково – около 0,3 мг на дозу. В австрийской вакцине – 0,6 мг на дозу. Технология производства немецкой вакцины «Энцепур» не предполагает использование стабилизаторов протеиновой природы.

Таблица 2

Характеристика вакцин против клещевого энцефалита

Показатель	Вакцина КЭ ИПВЭ им. М.П. Чумакова РАМН, Россия, Москва	«ЭнцеВир» ФГУП «Микроген» НПО «Вирион», МЗ, Россия, Томск	ФСМЕ-Иммун Инжект «Бакстер АГ», Австрия	«Энцепур», детская и взрослая «Навартис», Германия
Формальдегид (мг/доза)	—	—	<0,005	<0,005 (0,0025)
Алюминия гидроксид (мг/доза)	0,27-0,53	0,3-0,5	0,25-0,38	1,0 (0,5)
Сахароза (мг/доза)	37,0-38,0	20-30	—	20-30 (10-15)
Альбумин человека (мг/доза)	0,2-0,3	0,20-0,25	0,6	—
БСА (мкг/доза)	<0,5	—	—	<0,5
Белок куриного эмбриона (мкг/доза)	Не определяется	<0,5	Не определяется	Не определяется
Протаминсульфат (мкг/ доза)	<5,0	<10,0	Не определяется	Не определяется
МИД 50 (< 0,0125 мл)	0,006±0,001	0,005±0,001	0,003±0,001	0,01±0,02
Другие технологические примеси	Желатин 5±0,5 мкг	—	Следы неомицина, гентамицина	Следы неомицина, гентамицина, хлортетрациклина

Бычий сывороточный альбумин в московской и немецкой вакцинах содержится в количестве, не превышающем 0,5 мкг в дозе. Технология производства вакцин «ЭнцеВир» и ФСМЕ-Иммун Инжект не предполагает использование бычьего сывороточного альбумина.

Следующий компонент – белок куриного эмбриона, используемого в технологии производства всех вакцин в качестве субстрата для накопления вирусного материала. Содержание его регламентировано и контролируется только в вакцине «ЭнцеВир» и составляет менее 0,5 мкг в дозе.

Протаминсульфат также контролируется только в отечественных вакцинах.

Специфическая активность вакцины оценивается биологическим методом по способности препарата вызывать специфический иммунитет к вирусу КЭ у иммунизированных мышей. Выражается в мл и рассчитывается по минимальной иммунизирующей дозе, защищающей животных от летальной дозы вируса. По требованию нормативной документации МИД должна быть не более 0,0125 мл. Из данных, представленных в таблице, видно, что все вакцины, за исключением вакцины «Энцепур», имеют очень близкие показатели. «МИД» вакцины «Энцепур» больше значения, регламентированного отечественной нормативной документацией.

Из других технологических примесей, присутствующих в вакцинах, можно отметить желатин в вакцине производства ИПВЭ и следы антибиотиков в вакцинах ФСМЕ Иммун-Инжект (неомицин и гентамицин) и «Энцепур» (неомицин, гентамицин и хлортетрациклин).

По способу применения и рекомендованным схемам вакцинации вакцины разных производителей не имеют существенных различий (табл. 3): все вакцины вводятся внутримышечно, в одинаковой дозе – по 0,5 мл [23, 24].

Особенностью современного мира является интеграция и глобализация в разных сферах деятельности человека, и медицина не является исключением. Это объясняет необходимость сближения отечественных позиций медицинской науки и практики с принципами, принятыми и проверенными в других странах. При отработке схем вакцинации нами активно изучался и внедрялся опыт практического применения аналогичных вакцин в Австрии, Германии, проводились собственные исследования. Результатом этой работы был пересмотр предложенных ранее схем вакцинации.

Конечной целью вакцинации является выработка в организме человека специфических нейтрализующих антител (АТ). Вакцинные препараты должны обеспечивать активную и быструю выработку АТ и их длительную сохранность, чего можно достичь за счет правильно отработанной схемы вакцинации (это особенно важно при применении инактивированных вакцин) и ее соблюдения на практике.

Первая иммунизация является первичным представлением антигена иммунной системе, и лишь после введения второй дозы происходит повышение концентрации АТ и закрепление иммунной памяти, что в последующем обеспечивает бустерный эффект при проведении ревакцинации.

У вакцин всех представленных производителей разработаны как плановая, так и экстренная схемы вакцинации. Экстренные схемы вакцинации разработаны для более быстрого создания защиты и обеспечивают выработку иммунитета в короткие сроки, но во всех вариантах достаточный для защиты уровень сероконверсии обеспечивается спустя 14 дней после введения второй (а в случае экстренной схемы применения вакцины «Энцепур» – третьей) дозы вакцины. (Необходимо отметить, что названия этапов в схемах вакцинации разными вакцинами весьма условны и могут быть отнесены к маркетинговым приемам производителя).

Существенное различие имеющихся вакцин заключается в штаммах вируса, используемых при производстве в качестве источника активно действующего компонента вакцины – антигена вируса.

В вакцинах отечественного производства (Вакцина КЭ производства ИПВЭ и «ЭнцеВир») это штаммы дальневосточного антигенного варианта (Генотип 1), соответственно «Софьин» и «205». В зарубежных вакцинах (ФСМЕ-Иммун Инжект и «Энце-

Таблица 3

Схемы вакцинации против КЭ разными вакцинами

Вакцины против КЭ	Способ, доза	Первичный курс	Ревакцинация	Отдаленная ревакцинация	Экстренная схема
Вакцина КЭ ФГУП ИПВЭ им. М.П. Чумакова (Россия, г. Москва)	Внутримышечно по 0,5 мл	2 прививки с интервалом 1-7 месяцев	Через 12 месяцев после второй вакцинации	Каждые 3 года	Две прививки с интервалом 2 недели
«ЭнцеВир» ФГУП «Микроген» НПО «Вирион», (МЗ, Россия, г. Томск)
ФСМЕ-Иммун Инжект «Бакстер АГ» (Австрия)		2 прививки с интервалом 1-3 месяца	Через 9-12 месяцев после второй вакцинации
«Энцепур» (взрослый) «Новартис» (Германия)					Три прививки с интервалами 0-7-21 день

Таблица 4

Эффективность вакцинации вакциной «ЭнцеВир» на различных этапах

Срок исследований	Уровень сероконверсий, %
	СГТ Ig G в ИФА доверительный интервал 95%	«ЭнцеВир»		Все вакцины против КЭ
		Клинические испытания 2001-2002 гг.	Практическое применение 2004-2005 гг.
После V1	101,94 (55,22-188,18)	93,72	79,73	14 – 59
После V2	289,71 (196,52-495,11)	100	86,49	60 – 95
После R1	1220,19 (845,58-1760,73)	100	95,95	94 – 99

Таблица 5

Эффективность вакцинации против КЭ разными вакцинами на различных этапах

Вакцины против КЭ	Уровень серопозитивных лиц (%)
	После 1 V	После 2 V	После R1
Вакцина КЭ ФГУП ИПВЭ им. М.П. Чумакова (Россия, г. Москва)	58,9±4,5	83,0±3,4	99,1±0,9
«ЭнцеВир» ФГУП «Микроген» НПО «Вирион» (МЗ, Россия, г. Томск)	74,2±5,1	84,8±4,1	98,0±1,6
ФСМЕ-Иммун Инжект «Бакстер АГ» (Австрия)	22,0±3,8	91,5±2,6	96,4±1,7
«Энцепур /взрослый/ «Новартис» (Германия)	14,0±3,2	40,0±4,5	95,0±3,2

Очевидно, что при завершенной схеме вакцинации эффективность всех вакцин приближается к 100%. При этом необходимо отметить, что уже первое введение вакцины «Эн-цеВир» у 74,2 % привитых вызывает выработку антител с титром 1/400, в случае применения других вакцин эти показатели значительно ниже.

Вакцина «ЭнцеВир» успешно применяется на практике: вакцинируются сотрудники, работающие с вирусом КЭ на производстве иммунобиологических препаратов; вакцинируются доноры плазмы для производства специфического иммуноглобулина; вакцинируются сотрудники производств и организаций, в своей деятельности связанные с лесом. Кроме того, вакцинируется население эндемичных регионов страны. Наблюдения за сотрудниками, вакцинированными против КЭ на протяжении ряда лет по производственной необходимости, а также за группой волонтеров, принимавших участие в клинических испытаниях вакцины «Энце-Вир», подтверждают сохранность высокого уровня АТ на протяжении более 3 лет, заявленных сегодня в инструкции. За весь период применения вакцины «ЭнцеВир» не было

пур») используются штаммы западного, западно-европейского антигенного варианта (Генотип 2), соответственно Neud o rf и «К-23». Каждый из генотипов имеет особенности молекулярно-генетической структуры и антигенных свойств, свой ареал распространения и своеобразие клинических проявлений заболевания.

Производство вакцины «ЭнцеВир» на предприятии наращивается с каждым годом. При этом продолжаются исследования ее иммунологической эффективности. Так, в таблице 4 представлены результаты иммунологической эффективности на различных этапах вакцинации вакциной «ЭнцеВир», полученные как в ходе клинических испытаний, так и при практическом массовом применении. И хотя условия клинических испытаний отличаются от условий обычной практики, существенных различий в результатах не выявлено [25, 26].

Исследованиями эффективности вакцинопро-филактики КЭ активно занимаются сотрудники ТУ Роспотребнадзора Свердловской области [25, 26]. В таблице 5 представлены результаты применения всех вакцин против КЭ, используемых при проведении плановой вакцинации в области.

зарегистрировано поствакцинальных осложнений либо реакций на введение, превышающих регламентированные.

Необходимо отметить, что в июле 2008 г. вступили в действие Санитарные правила СП 3.1.3.2352-08 [27], в соответствии с которыми 90% населения, проживающего в эндемичных по КЭ регионах, должно быть вакцинировано.

Профилактика инфекционных заболеваний с помощью вакцинации – реальный способ планирования как собственного здоровья, так и здоровья нации в целом. Сегодня охват населения вакцинацией против КЭ в некоторых регионах, признанных природными очагами КЭ, не превышает 5-15%. При этом доказано, что достижение 50% уровня вакцинации населения способно обеспечить снижение заболеваемости КЭ в два раза, а увеличение уровня вакцинации до 80% – снизить заболеваемость в 4-5 раз и практически исключить смертность [28]. Такой подход к профилактике КЭ можно отнести к стратегии, при которой дополнительные затраты оправданы дополнительными преимуществами, что приобретает особую социальную значимость.