Видовая принадлежность возбудителя фомопсиса подсолнечника в выборке изолятов, собранных на некоторых полях в окрестностях Краснодара

Введение. Фомопсис распространен на подсолнечнике ( Helianthus annuus L.) во всех странах мира, возделывающих эту культуру [1; 2] . Вредоносность болезни зависит от погодных условий. Потери урожая могут составлять от 5 до 35 %, а в годы эпифитотий – до 10 %. С 1986 г . возбудитель этой болезни Phomopsis helianthi Munt.-Cvetk. Mihaljc. & M. Petrov входит в «Единый перечень карантинных объектов, ограниченно распространенных на территории Евразийского экономического союза» [2].

Впервые возбудитель фомопсиса был обнаружен в США в 1932 г. и определен как Phomopsis arctii Lasch на видах подсолнечника: H. annuus и H. giganteus [3]. В 1933 г. Вехмайер, основываясь на морфологии и ассоциации с растениями - хозяевами, высказал предположение, что возбудителем болезни может быть комплекс видов Diaporthales [4].

По результатам таксономической ревизии в международной базе данных по фитопатогенам возбудителем фомопсиса подсолнечника зарегистрирован гриб Phomopsis helianthi Munt.-Cvetk. Mihaljc. & M. Petrov с телеоморфной стадией Diaporthe helianthi Munt.-Cvetk. Mihaljc. & M. Petrov [5] . Этот вид возбудителя долгое время считался единственным, вызывающим фомопсис подсолнечника в регионах РФ [6] . Позже из семян и стеблей подсолнечника был выделен Phomopsis arctii Lasch , который ранее был обнаружен на сорных растениях в Краснодарском крае [6; 7].

С обнаружением новых видов возбудителя фомопсиса на подсолнечнике, которые были представлены анаморфами Diaporthe ( Ascomycota, Diaporthales,

Valsaceae ), предложено сохранить название возбудителя Diaporthe, которое озвучено в литературе раньше всех потенциальных синонимов [8; 9].

Филогенетический анализ, проведенный в некоторых странах, выявил новые виды возбудителя фомопсиса, которые в GenBank ошибочно числились как D. helianthi: D. gulyae Shivas, D. kochmanii Shivas, D. kongii Shivas [10], D. longicolla (Hobbs), D. stewartii Harrison [12; 13; 14] и другие.

Установлено, что виды фомопсиса D. helianthi и D. gulyae доминируют по распространенности в мире [12; 13; 14] . По сравнению с другими видами D. helianthi чаще встречается в странах Европы и Южной Африки и поражает дикорастущий и культурный подсолнечник, а также Xanthium strumarium , Arctium lappa и Vitiss vinifera, но не был обнаружен в Австралии [12]. D. gulyae распространен в США и Канаде, поражает, кроме подсолнечника, сою ( Glycine max L.) и чертополох ( Carduus tribulus ) [13; 14].

Симптомы болезни при поражении стеблей подсолнечника видом D. gulyae идентичны, вызываемым D. helianthi: пятно неправильной формы от бледно - до темно - коричневого цвета с центром в листовых узлах с повреждением сердцевины и с часто встречающимся переломом в этом месте [12; 13] . Однако разная видовая принадлежность была подтверждена анализом нуклеотидной последовательности ДНК [15].

Подробное описание культуральных характеристик D. helianthi было сделано югославскими учеными в 80-е годы прошлого столетия [5]. Позже проведено сравнительное исследование географических изолятов из разных стран [6]. Изоля-ты из Югославии, Болгарии, Украины, юга РФ в культуре на КГА (картофельноглюкозный агар) формировали белый, компактный, порошистый, полупогру-женный в субстракт мицелий с темной пигментацией в центре колонии. Изолят из Франции имел слабый, белый воздушный мицелий и выделялся крупными, высокими пикнидами. В пикнидах гео- графических изолятов присутствовали только β-споры [5; 6].

В 2018 г. были описаны характерные культуральные признаки для D. helianthi , паразитирующего на подсолнечнике в США: колонии на картофельно - декстрозном агаре (КДА) имеют белый мицелий наряду с узкими зеленовато желтыми участками. На обратной стороне цвет культуры от белого до коричневого со светло - коричневыми рассеянными пятнами вначале, которые позже становятся темно - коричневыми. Образовавшиеся пикниды обычно агрегированные, реже одиночные. Показано, что изоляты этого вида могут отличаться содержанием разного типа спор в пикнидах. В некоторых присутствуют только одноклеточные, нитевидные β - споры. В других встречаются два типа спор: β - и одноклеточные, бесцветные, эллиптические α - споры [14; 15] . Например, у изолятов D. helianthi из штатов США Миннесота, Северная Дакота и Южная Дакота в пикнидах культур формировались только β - споры, которые не прорастали в лабораторных условиях, перитеции D. helianthi формируются на перезимовавших растительных остатках. Аски бесцветные, 8 - споровые, мешковидные, аскоспоры бесцветные, эллиптические [15] . Колонии изолятов D. gulyae на КДА имели скудный воздушный мицелий и несколько более темные центры. Пикниды часто разбросаны по поверхности мицелия, почти шаровидные, до 3 мм в диаметре, иногда с носиками до 1 мм длиной, α - споры шаровидные, полушаро-видные, эллипсоидные, овальные или обратнояйцевидные, гиалиновые, β - споры не наблюдались в культуре на КДА [15].

В Российской Федерации в последние два десятилетия распространение болезни было локальным и не достигало 40 % [1]. Однако из 14 видов Diaporthe, которые могут быть потенциальными возбудителями фомопсиса подсолнечника в РФ, кроме D. helianthi, обнаружено еще два вида: D. phaseolorum и D. gulyae [16; 17]. В 2022 г. на подсолнечнике выявлены еще три вида Diaporthe: D. eres, D. monetii sp. и D. vangoghii sp. [18]. Частота встречаемости этих видов в регионах РФ не изучена. Велика вероятность их распространения зараженными семенами.

В связи с обнаружением в РФ новых видов возбудителя фомопсиса на подсолнечнике стала необходимой идентификация видовой принадлежности грибов рода Diaporthe в посевах подсолнечника окрестностей г. Краснодара с применением традиционных и современных молекулярных методов.

Цель нашей работы – определить видовую принадлежность возбудителя болезни, выделенного из растений и семян подсолнечника с полей ВНИИМК с признаками поражения фомопсисом.

Материалы и методы. Исследования проводили в 2021–2022 гг. в лаборатории иммунитета центральной экспериментальной базы ФГБНУ ФНЦ ВНИИМК.

На полях подсолнечника с разных генотипов в окрестностях Краснодара в период налива семян было собрано 37 фрагментов стеблей и два образца семянок с различными симптомами поражения фомопсисом. Высечки (длиной 1 см) из фрагментов пораженных стеблей подсолнечника промывали водопроводной водой в течение 2 мин и стерилизовали в 95%- ном спирте, ополаскивали стерильной водой, обжигали в пламени спиртовки, раскладывали в чашки Петри (диаметр 9 см) на КДА с добавлением антибиотика ампициллина. Инкубировали в термостате при температуре 26 ^оС до начала образования пикнид. Диаметр колонии измеряли на 3 - й и 7 - й дни культивирования, на 14 - й день подсчитывали количество образовавшихся пикнид. Тип спор определяли микроскопированием экссудата пикнид с помощью цифрового микроскопа Motic.

Идентификация видовой принадлежности 17 изолятов возбудителя фомопси-са была проведена на коммерческой основе в Федеральном государственном бюджетном научном учреждении «Всероссийский научно-исследовательский институт сельскохозяйственной биотехнологии» (ЦКП «Биотехнология» ВНИИСБ, Москва). Для идентификации патогена были использованы области внутренних транскрибируемых спейсеров рДНК (ITS-локус). Секвенирование образцов проводили по методу Сэнгера на генетическом анализаторе 3500 (Applied Biosystems, США). Нуклеотидные последовательности участков генов изучаемых изолятов были проанализированы с помощью программного обеспечения «BioEdit» и базы данных.

Результаты и обсуждение. В условиях одного и того же года распространенность и интенсивность болезней связаны с разной степенью индивидуальной устойчивости растений и разнообразием генотипов подсолнечника. Типичные симптомы поражения вегетирующих растений подсолнечника возбудителем фо-мопсиса в 2021 г. представлены на рисунке 1.

а              б              в

г        д        е        ж

Рисунок 1 – Поражение подсолнечника фомопсисом ( Diaporthe helianthi Munt.-Cvetk. Mihaljc. &  М. Petrov ): а , б, в – обширные участки поражения стебля, различаются по цвету; г, д, е – небольшие участки поражения у основания стебля; ж – перелом стебля в средней части (ориг.)

Выделенные из пораженных участков стеблей подсолнечника изоляты возбудителя фомопсиса различались по скорости роста мицелия в культуре и формирования пикнид. В таблице 1 представлены характерные культуральные признаки, свойственные изученным изолятам возбудителя болезни. Колонии большинства изолятов имели белый, порошистый мицелий, а у двух – войлочный (рис. 2).

Таблица 1

Характерные культуральные признаки изолятов возбудителя болезни, выделенных из растений с симптомами поражения DiaporthehelianthiMunt.-Cvetk.Mihaljc.& M. Petrov на 14 - й день выращивания

Характеристика культуры	Диаметр колонии, мм		Количество пикнид, шт. на 14-й день
	3-й день	7-й день
Мицелий порошистый, пикниды простые и сложные, в стадии формирования	25	85	40
Мицелий порошистый, пикниды мелкие, простые, расположены на поверхности и в субстрате, в стадии формирования	30	85	~ 1000
Мицелий порошистый, тянется вверх, пикниды простые и сложные, зрелые	25	85	30
Мицелий порошистый, пикниды простые и сложные расположены на поверхности, зрелые	35	85	80
Мицелий войлочный, пикнид нет	15	40	0
Мицелий войлочный, пикниды простые и сложные	25	80	40
Мицелий порошистый, пикниды простые и сложные, в начальной стадии формирования	20	75	20

30.3 \

б

а

Рисунок 2 – Колонии изолятов гриба Diaporthe helianthi Munt.-Cvetk. Mihaljc. & M. Petrov , выделенного из фрагментов стеблей подсолнечника на питательной среде: а, б – войлочный мицелий;

в – порошистый мицелий (ориг.)

в

Размер колоний на третьи сутки составлял от 15 до 35 мм. На 7 - й день колонии большинства изолятов выровнялись и составили 80–85 мм. Пикниды формировались простые и сложные (многокамерные) (рис. 3 ). На 14 - й день у многих изолятов наблюдался выход пикноспор, что указывало на их зрелость, тогда как у других пикниды были в стадии формирования. В основном количество пикнид варьировало от 20 до 60, а у восьми изо-лятов их было больше 1000 штук. Выделялся изолят, который отличался отсутствием пикнид в культуре.

а                      б

Рисунок 3 – Пикниды простые (а) и сложные многокамерные (б), образовавшиеся в культурах изолятов фомопсиса на картофельно - декстрозном агаре (ориг.)

Известно, что для изолятов D. helianthi из разных географических зон характерно присутствие в пикнидах либо только β -, либо в разном соотношении β - и α - спор [2; 10; 13] . Как уже отмечено выше, у D. gulyae на КДА в пикнидах формируются только α - споры, а у других видов присутствуют как α - , так и β - споры [14; 15] . В пикнидах всех изученных нами изолятов фомопсиса присутствовали только β - спо - ры (рис. 4)

Рисунок 4 – Выход β - спор Diaporthe helianthi Munt.-Cvetk. Mihaljc. & M. Petrov из пикнид ( ориг .)

Для образования совершенной стадии спороношения гриба, после хранения фрагментов стеблей при -20 ^оС, их поместили во влажную камеру, где на 20 - е сутки образовались перитеции с аскоспорами. Перитеции образовались и на семянках подсолнечника, которые не подвергались замораживанию (рис. 5).

Рисунок 5 – Перитеции Diaporthe helianthi Munt.-Cvetk. Mihaljc. & M. Petrov на семянке и фрагменте стебля подсолнечника (ориг.)

Аски и вышедшие из них аскоспоры были типичными для D. helianthi. Один изолят отличался от всех остальных отсутствием пикнид в культуре. Вместо них на колонии появились очень похожие на перитеции образования (рис. 6).

Рисунок 6 – Колония гриба, выделенного из стебля подсолнечника с признаками поражения Diaporthe helianthi Munt.-

Cvetk. Mihaljc. & M. Petrov (ориг.)

По изученным культуральным характеристикам изоляты возбудителя болезни, кроме одного, у которого отсутствовали пикниды, можно отнести к Diaporthe helianthi.

С применением анализа ДНК изолят, который выделялся отсутствием пикнид в культуре, был определен как Xylaria ellisii J.B. Tanney, Seifert & Y.M. Ju. X. Ellissi относится к эндофитным грибам семейства Xylariaceae, часто выделяемым из Picea и Pinus, а также разлагающихся ветвей или стволов Acer saccharum [19]. Из вегетирующего растения подсолнечника с симптомами фомопсиса X. ellisii выделен нами впервые.

Результаты идентификации части образцов в отделе секвенирования ЦКП «Биотехнология» представлены в таблице 2.

Шестнадцать изолятов вобудителя болезни с 99– 100%- ной вероятностью были отнесены к виду Diaporthe helianthi Munt.-Cvetk. Mihaljc. & M. Petrov . У остальных 22 изолятов анализ нуклеотидных последовательностей ДНК не проводился. Однако их культуральные признаки (в частности, наличие в пикнидах только β - спор) совпадают с представленными в таблице 1. Поэтому мы полагаем, что и эти изоляты можно отнести к виду Diaporthe helianthi Munt.-Cvetk. Mihaljc. & M. Petrov.

Заключение. Симптомы проявления фомопсиса на вегетирующих растениях подсолнечника в полях окрестностей г. Краснодара характерны для Diaporthe helianthi Munt.-Cvetk. Mihaljc & M. Petrov. Выделенные из пораженных фомопсисом стеблей и семянок подсолнечника изоля-ты различались в культуре на КДА скоростью роста мицелия и количеством сформированных пикнид. Однако в пикнидах у всех изолятов не было α - спор и присутствовали только β - споры, что является характерным признаком D. helianthi. Анализ нуклеотидных последовательностей ДНК 16 изолятов возбудителя подтвердил с 99– 100%- ной вероятностью принадлежность их к виду Diaporthe helianthi Munt.-Cvetk. Mihaljc. & M. Petrov.

Таблица 2

Нуклеотидные последовательности ДНК исследуемых изолятов возбудителя болезни, выделенных из вегетирующих растений и семян подсолнечника с симптомами поражения Diaporthe helianthi Munt.-Cvetk. Mihaljc. & M. Petrov

Отдел секвенирования ЦКП «Биотехнология»

Последовательность	Видовая принадлежность
GGAGGGATCATTGCTGGAACGCGCCCCCGGCGCACCCAGAAACCCTTTGTGAACTTATACCTATCTGTTGCCTCGGCGCAGGC CGGCCCCCCCTGGGGGCCCCCTGGGAACAGGGAGCAGCCCGCCGGCGGCCGACCAAACTCTTGTTTCTACAGTGGATCTCTGA GTTAAAAACACAAATGAATCAAAACTTTCAACAACGGATCTCTTGGTTCTGGCATCGATGAAGAACGCAGCGAAATGCGATA AGTAATGTGAATTGCAGAATTCAGTGAATCATCGAATCTTTGAACGCACATTGCGCCCTCTGGTATTCCGGAGGGCATGCCTGT TCGAGCGTCATTTCAACCCTCAAGCCTGGCTTGGTGATGGGGCACTGCCTGTGACAGGGCAGGCCCTGAAATCCAGCGGCGAG CCCGCCGGGACCCCGAGCGTAGTAGTAACTTCTCGCTCCGGAAGGCCCtGGCGGCGCCCTgCCGTTAAACCCCCAACTCCTGAA AATTTGACCTCGGATCAGGTAGGAATACCCGCTGAACTTAAG	Diaporthe helianthi KU315382.1 100 % 5 41 п.о
GAACGCGCCCCCGGCGCACCCAGAAACCCTTTGTGAACTTATACCTATCTGTTGCCTCGGCGCAGGCCGGCCCCCCCTGGGGG CCCCCTGGGAACAGGGAGCAGCCCGCCGGCGGCCGACCAAACTCTTGTTTCTACAGTGGATCTCTGAGTTAAAAACACAAATG AATCAAAACTTTCAACAACGGATCTCTTGGTTCTGGCATCGATGAAGAACGCAGCGAAATGCGATAAGTAATGTGAATTGCAG AATTCAGTGAATCATCGAATCTTTGAACGCACATTGCGCCCTCTGGTATTCCGGAGGGCATGCCTGTTCGAGCGTCATTTCAAC CCTCAAGCCTGGCTTGGTGATGGGGCACTGCCTGTGACAGGGCAGGCCCTGAAATCCAGCGGCGAGCCCGCCGGGACCCCGA GCGTAGTAGTAACTTCTCGCTCCGGAAGGCCCtGGCGGCGCCCTgCCGTTAAACCCCCAACTCCTgAAAATTTgACCTCGGATCA	Diaporthe helianthi KU315382.1 100 % 500 п.о
GCGCCCCCGGCGCACCCAGAAACCCTTTGTGAACTTATACCTATCTGTTGCCTCGGCGCAGGCCGGCCCCCCCTGGGGGCCCC CTGGGAACAGGGAGCAGCCCGCCGGCGGCCGACCAAACTCTTGTTTCTACAGTGGATCTCTGAGTTAAAAACACAAATGAATC AAAACTTTCAACAACGGATCTCTTGGTTCTGGCATCGATGAAGAACGCAGCGAAATGCGATAAGTAATGTGAATTGCAGAATT CAGTGAATCATCGAATCTTTGAACGCACATTGCGCCCTCTGGTATTCCGGAGGGCATGCCTGTTCGAGCGTCATTTCAACCCTC AAGCCTGGCTTGGTGATGGGGCACTGCCTGTGACAGGGCAGGCCCTGAAATCCAGCGGCGAGCCCGCCGGGACCCCGAGCGT AGTAGTAACTTCTCGCTCCGGAAGGCCCtGGCGGCGCCCTgCCGTTAAACCCCCAACTCC	Diaporthe helianthi KU315382.1 100 % 475 п.о
GCGCCCCCGGCGCACCCAGAAACCCTTTGTGAACTTATACCTATCTGTTGCCTCGGCGCAGGCCGGCCCCCCCTGGGGGCCCC CTGGGAACAGGGAGCAGCCCGCCGGCGGCCGACCAAACTCTTGTTTCTACAGTGGATCTCTGAGTTAAAAACACAAATGAATC AAAACTTTCAACAACGGATCTCTTGGTTCTGGCATCGATGAAGAACGCAGCGAAATGCGATAAGTAATGTGAATTGCAGAATT CAGTGAATCATCGAATCTTTGAACGCACATTGCGCCCTCTGGTATTCCGGAGGGCATGCCTGTTCGAGCGTCATTTCAACCCTC AAGCCTGGCTTGGTGATGGGGCACTGCCTGTGACAGGGCAGGCCCTGAAATCCAGCGGCGAGCCCGCCGGGACCCCGAGCGT AGTAGTAACTTCTCGCTCCGGAAGGCCCtGGCGGCGCCCTgCCGTTAAACCCCCAACTCCTgAAAATTTgACCTCGGATCA	Diaporthe helianthi KU315382.1 100 % 496 п.о
CCSCCCTGGGGRCCCCCTGGGAACAGGGAGCAGCCCGCCGGCGGCCGACCAAACTCTTGTTTCTACaGTGGATCTcTGAGTTAA AAACACAAaTGAATCAAwACTTTCAACAACGGATCTCTtGGTTCTGGCATCGATGAAGAACGCAGCGAAATgCGATAAGTAAW GgTGAATTGCAGAATTCAGTGAATCATCGAATCTTTSAACGCACATTGCGCCCTCTGGTATTCCGGAGGGCATGCCKGTTCGAG CGTCATTTCAACCCTCAAGCCtGGSTTGGTGATGGGGCACTGCCKGTGACAGGGCAGGCCCYGAAATCCAGCGGCGAgCCCSCC GGGMCCCCGAGCGTAGTAGKAACTTCTcGCTCCGGAAGGCCCTGGCGGCGCCCTGCCGTTAAACCCCCACTCCTGAAAATTTG ACCTCGGATCAGGTAGGAATACCCGCTGAACTTAAGCATATCAWAAAGCGGAGGA	преобладание Diaporthe helianthi KU315382.1 99 % 473 п.о
CTTGTTTCTMCGTGGATCTCTGAKTTAWAAACACWATGAATCMAACTTTCAACAACGGATCTCTTGGKTCTGGCATCGATGAA KAACGCARCGAAATGCGATAAGTAATGTGAATTGCASAATTCAKYGAATCATCSAATCTTTGAACGCACATTGCGCCCTCTGG TATTCCGGAGGGCATGCCTGTTCAGCGYCATTTCAACCCTCARCCTGGCTTGGTGATGGGGCACTGCCTGYGACAGGGCAGGM CCTGAAATCCAGCGGCGAGCCCGCCGGGACCCCGAGCGTAGTAGTAACTTCTCGCTCCGGAAGGCCCTGGCGGCGCCCTGCCG TTAAACCCCCACTCCTGAAAATTTGACCTCGGATCAKGTASGAATACCCGCTGAACTTAAGCATATCATAAGCGGAGG	Diaporthe helianthi KU315382.1 100 % 5 41 п.о
GGAGGGATCATTGCTGGAACGCGCCCCCGGCGCACCCAGAAACCCTTTGTGAACTTATACCTATCTGTTGCCTCGGCGCAGGC CGGCCCCCCCTGGGGGCCCCCTGGGAACAGGGAGCAGCCCGCCGGCGGCCGACCAAACTCTTGTTTCTACAGTGGATCTCTGA GTTAAAAACACAAATGAATCAAAACTTTCAACAACGGATCTCTTGGTTCTGGCATCGATGAAGAACGCAGCGAAATGCGATA AGTAATGTGAATTGCAGAATTCAGTGAATCATCGAATCTTTGAACGCACATTGCGCCCTCTGGTATTCCGGAGGGCATGCCTGT TCGAGCGTCATTTCAACCCTCAAGCCTGGCTTGGTGATGGGGCACTGCCTGTGACAGGGCAGGCCCTGAAATCCAGCGGCGAG CCCGCCGGGACCCCGAGCGTAGTAGTAACTTCTCGCTCCGGAAGGCCCtGGCGGCGCCCTgCCGTTAAACCCCCAACTCCtGAA AAKTtGACCTCGGATCAGGTAGGAATACCCGCTGAACT	Diaporthe helianthi KU315382.1 100 % 410 п.о
GGAGGATCATGCTGAACGCGCCCCCGGCGCACCCAGAAACCCTTTGTGAACTTATACCTATCTGTTGCCTCGGCGCAGGCCGG CCCCCCCTGGGGGCCCCCTGGGAACAGGGAGCAGCCCGCCGGCGGCCGACCaAACTCTTGTTTCTACAGTGGATCTCTGAGTT AAAAACACAAATGAATCAAAACTTTCAACAACGGATCTCTTGGTTCTGGCATCGATGAAGAACGCAGCGAAATGCGATAAGT AATGTGAATTGCAGAATTCAGTGAATCATCGAATCTTTGAACGCACATTGCGCCCTCTGGTATTCCGGAGGGCATGCCTGTTCG AGCGTCATTTCAACCCTCAAGCCTGGCTTGGTGATGGGGCACTGCCTGTGACAGGGCAGGCCCTGAAATCCAGCGGCGAGCCC GCCGGGACCCCGAGCGTAGTAGTAACTTCTCGCTCCGGAAGGCCCtGGCGGCGCCCTgCCGTTaAACCCCCAACTCCTgAAAATT TGACCTCGGATC	Diaporthe helianthi KU315382.1 100 % 5 12 п.о

Продолжение таблицы 2

GGATCATAAAGAGTTCTATAACTCCCAAACCCATGTGAACaTACCTTACGTTGCCTCGGCaGGTCGCGCCTACCCCGTAACGTC CTACCCTGTAGGACCTACCCGGTAGACGCGGGTAAGCCTGCCGGCGGCCCACGAAACTCTGTTTAATATTGAATTCTGAACCT AAAACTAAATAAGTTAAAACTTTCAACAACGGATCTCTTGGTTCTGGCATCGATGAAGAACGCAGCGAAATGCGATAAGTAAT GTGAATTGCAGAATTCAGTGAATCATCGAATCTTTGAACGCACATTGCGCCCATTAGTATTCTAGTGGGCATGCCTGTTCGAGC GTCATTTCAACCCTTAAGCCTCTGTTGCTTAGTGTTGGGAGCCTACGGCACCCGTAGCTCCTCAAAGTTAGTGGCGGAGTCGGT TCACACTCTAGACGTAGTAATTCTTATCTCGCCTATCAGTTGgACCGGTCCCCTgCCGTAAAACCCCCCATTTTTAAAGGTTGAC CTCGGATCAGGTAGGAATACCCGCTGAACTAG	Xylaria ellisii MN219731.1 100 % 535 п.о
CGGAGGATCATGCTGGAACGCGCCCCCGGCGCACCCAGAAACCCTTTGTGAACTTATACCTATCTGTTGCCTCGGCGCAGGCC GGCCCCCCCTGGGGGCCCCCTGGGAACAGGGAGCAGCCCGCCGGCGGCCGACCAAACTCTTGTTTCTACAGTGGATCTCTGAG TTAAAAACACAAATGAATCAAAACTTTCAACAACGGATCTCTTGGTTCTGGCATCGATGAAGAACGCAGCGAAATGCGATAA GTAATGTGAATTGCAGAATTCAGTGAATCATCGAATCTTTGAACGCACATTGCGCCCTCTGGTATTCCGGAGGGCATGCCTGTT CGAGCGTCATTTCAACCCTCAAGCCTGGCTTGGTGATGGGGCACTGCCTGTGACAGGGCAGGCCCTGAAATCCAGCGGCGAGC CCGCCGGGACCCCGAGCGTAGTAGTAACTTCTCGCTCCGGAAGGCCCtGGCGGCGCCCTgCCGTTAAACCCCCAaCTCCTGAAA ATTTGACCTCGGATCATGYACGAATACCCGCTGAACTAG	Diaporthe helianthi KU315382.1 99 % 538 п.о
CTGGAACGCGCCCCCGGCGCACCCAGAAACCCtTTGTGAACTTATACCTATCTGTTGCCTCGGCGCAGGCCGGCCCCCCCTGGG GGCCCCCTGGGAACAGGGAGCAGCCCGCCGGCGGCCGACCAAACTCTTGTTTCTACAGTGGATCTcTGAGTTAAAAACACAAA TGAATCAAAACTTTCAACAACGGATCTCTTGGTTCTGGCATCGATGAAGAACGCAGCGAAATGCGATAAGTAATGTGAATTGC AGAATTCAGTGAATCATCGAATCTTTGAACGCACATTGCGCCCTCTGGTATTCCGGAGGGCATGCCTGTTCGAGCGTCATTTCA ACCCTCAAGCCTGGCTTGGTGATGGGGCACTGCCTGTGACAGGGCAGGCCCTGAAATCCAGCGGCGAGCCCGCCGGGACCCC GAGCGTAGTAGTAACTTCTCGCTCCGGAAGGCCCtGGCGGCGCCCTgCCGTTAAACCCCCAaCTCCTGAAAATTTGACCTCGGAT CAGGTASGAATACCCGCTGAACTTAGCA	Diaporthe helianthi KU315382.1 100 % 529 п.о
GAACGCGCCCCCGGCGCACCCAGAAACCCTTGTGAACTTATACCTATCTGTTGCSTCGGCGCAGGCCGGCCCCCCCTGGGGGC CCCCTGGGAACAGGGAGCAGCCCGCCGGCGGCCGACCAAACTCTTGTTTCTACAGTGGATCTCTgAGTTAAAAACACAAATGA ATCAAAACTTTCAACAACGGATCTCTTGGTTCTGGCATCGATGAAGAACGCAGCGAAATGCGATAAGTAATGTGAATTGCAGA ATTCAGTGAATCATCGAATCTTTgAACGCACATTGCGCCCTCTGGTATTCCGGAGGGCATGCCTGTTCGAGCGTCATTTCAACC CTCAaGCCTGGCtTGGTGATGGGGCACTGCCTGTGACAGGGCAGGCCCYGAAATCCAGCGGCGAGCCCRCCGGGACCCCGAGC GTAGTAGTAACTTCTCGCTCCGGAAGGCCCTGGCGGCGCCCTGCCGTTAAACCCCCAACTCCTGAAAATTTGACCTCGGATCAT GTASGAATACCCGCTGAACTA	Diaporthe helianthi JF430484.1 99 % 52 1 п.о
GCGGAGGGATCATTGCTGGAACGCGCCCCCGGCGCACCCAGAAACCCTTTGTGAACTTATACCTATCTGTTGCCTCGGCGCAGGCCG GCCCCCCCTGGGGGCCCCCTGGGAACAGGGAGCAGCCCGCCGGCGGCCGACCAAACTCTTGTTTCTACAGTGGATCTCTGAGTTAAA AACACAAATGAATCAAAACTTTCAACAACGGATCTCTTGGTTCTGGCATCGATGAAGAACGCAGCGAAATGCGATAAGTAATGTGAATTG CAGAATTCAGTGAATCATCGAATCTTTGAACGCACATTGCGCCCTCTGGTATTCCGGAGGGCATGCCTGTTCGAGCGTCATTTCAACCC TCAAGCCTGGCTTGGTGATGGGGCACTGCCTGTGACAGGGCAGGCCCTGAAATCCAGCGGCGAGCCCGCCGGGACCCCGAGCGTAG TAGTAACTTCTCGCTCCGGAAGGCCCtGGCGGCGCCCTgCCGTTAAACCCCCAACTCCTgAAAATTTGACCTCGGATCAGGTAGGAATA CCCGCTGAACTTAAG	Diaporthe helianthi KU315382.1 100 % 5 43 п.о
GGGATCATTGCTGGAACGCGCCCCCCGGCGCRCCCAGAAACCYTTGTGAACTTATACCTATCTGTTGCCTCGGCGCAGGCCGG CCCCCCCTGGGGGCCCCCTGGGAACcAGGGAGCAGCCCGCCGGCGGCCGACCaAACTCTTGTTTCTACAGTGGATCTcTGAGTT AAAAACACAAATGAATCAAAACTTTCAACAACGGATCTCTTGGTTCTGGCATCGATGAAGAACGCAGCGAAATGCGATAAGT AATGTGAATTGCAGAATTCAGTGAATCATCGAATCTTTGAACGCACATTGCGCCCTCTGGTATTCCGGAGGGCATGCCTGTTCG AGCGTCATTTCAACCCTCAAGCCTGGCTTGGTGATGGGGCACTGCCTGTGACAGGGCAGGCCCTGAAATCCAGCGGCGAGCCC GCCGGGACCCCGAGCGTAGTAGTAACTTCTCGCTCCGGAAGGCCCtGGCGGCGCCCTgCCGTTAAaCCCCCAACTCCTGAAAAT TTGACCTCGGATMGGGTACGAATACCCGCTGAAC	Diaporthe helianthi KU315382.1 100 % 534 п.о
GAGGATCATGCTGAACGCGCCCCCGGCGCACCCAGAAACCCTTTGTGAACTTATACCTATCTGTTGCCTCGGCGCAGGCCGGcC CCCCCCTGGGGGCCCCCTGGGAACAGGGAGCAGCCCGCCGGCGGCCGACCAAACTCTTGTTTCTACAGTGGATCTcTGAGTTA AAAACACAAATGAATCAAAACTTTCAACAACGGATCTCTTGGTTCTGGCATCGATGAAGAACGCAGCGAAATGCGATAAGTA ATGTGAATTGCAGAATTCAGTGAATCATCGAATCTTtGAACGCACATTGCGCCCTCTGGTATTCCGGAGGGCATGCCTGTTCGA GCGTCATTTCAACCCTCaAGCCTGGCTTGGTGATGGGGCACTGCCTGTGACAGGGCAGGCCCTGAAATCCAGCGGCGAGCCCG CCGGGACCCCGAGCGTAGTAGTAACTTCTCGCTCCGGAAGGCCCtGGCGGCGCCCTgCCGTTaAACCCCCAACTCCTgAAAATTT gACCTCGGATCAGTAGATACCCGCTGAAC	Diaporthe helianthi JF430484.1 99 % 530 п.о
GAAGTAAAAGTCGTAACAAGGTCTCCGTTGGTGAACCAGCGGAGGGATCATTGCTGGAACGCGCCCCCGGCGCACCCAGAAA CCCTTTGTGAACTTATACCTATCTGTTGCCTCGGCGCAGGCCGGCCCCCCCTGGGGGCCCCCTGGGAACAGGGAGCAGCCCGC CGGCGGCCGACCAAACTCTTGTTTCTACAGTGGATCTCTGAGTTAAAAACACAAATGAATCAAAACTTTCAACAACGGATCTC TTGGTTCTGGCATCGATGAAGAACGCAGCGAAATGCGATAAGTAATGTGAATTGCAGAATTCAGTGAATCATCGAATCTTTGA ACGCACATTGCGCCCTCTGGTATTCCGGAGGGCATGCCTGTTCGAGCGTCATTTCAACCCTCAAGCCTGGCTTGGTGATGGGGC ACTGCCTGTGACAGGGCAGGCCCTGAAATCCAGCGGCGAGCCCGCCGGGACCCCGAGCGTAGTAGTAACTTCTCGCTCCGGA	Diaporthe helianthi AJ312362.1 AJ312354.1 99.83 %