ВЭЖХ-МС-анализ сверхмалых количеств лекарственных препаратов

Развитие фармацевтической науки привело к созданию новых лекарственных препаратов, даже ничтожные количества которых обладают сильным биологическим действием [1]. Соответственно возрастают и требования к отечественным приборным комплексам, позволяющим как качественно, так и количественно анализировать эти лекарственные препараты.

В настоящей работе с помощью приборного комплекса, состоящего из времяпролетного масс-спектрометра с ортогональным вводом и ионизацией электрораспылением МХ 5310 и жидкостного хроматографа Милихром А-02, произведен анализ состава лекарственных препаратов, находящихся как в оптовой, так и в розничной продаже.

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫЕ РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Возможности высокоэффективного жидкостного хроматографа Милихром А-02 как отдельного аналитического прибора неоднократно демонстрировались как при выявлении "брака", так и в поиске поддельных лекарств, что подтверждается наличием аттестованных методик [1, 2]. Подключение же в качестве дополнительного детектора времяпролетного масс-спектрометра МХ 5310 позволит значительно расширить диапазон решаемых с помощью Милихрома А-02 задач с точки зрения чувствительности.

В данной работе с помощью указанного приборного тандема решалась задача анализа состава такого лекарственного средства, количества компонентов которого находятся ниже предела обнаружения УФ-детектора хроматографа. Для этого была приготовлена модельная смесь лекарств (па- рацетамол, кофеин, анальгин и кодеин), содержащая не более 0.1 нг каждого вещества. В качестве растворителя использовался метанол, а в качестве элюента — ацетонитрил и 0.25 %-й раствор муравьиной кислоты.

На рис. 1 представлен участок суммарного масс-спектра модельной смеси, снятого за все время прохождения хроматограммы. Следует отметить, что компоненты смеси УФ-детектором хроматографа не регистрировались.

Анализ масс-спектра позволил идентифицировать компоненты смеси, причем было выявлено, что анальгин присутствует в растворе в виде фрагментов с массами 217.1 Да и 203.1 Да (пики 3), что было подтверждено специальным экспериментом с чистым анальгином.

Аналогичный результат был получен при анализе второй модельной смеси лекарств, содержащей ранитидин, кофеин, ампициллин, ципрофлак-син, кетопрофен и диклофенак, приготовленной в тех же количествах, что и предыдущая смесь.

Cуммарный масс-спектр, снятый в режиме online, легко идентифицировался, несмотря на то что на хроматограмме пики искомых веществ не наблюдались (рис. 2).

Для определения чувствительности приборного тандема была произведена серия измерений интенсивности пика бацитрацина А (C 66 H 10 N 17 O 16 S ⁺ ) массой 1422.757 при различных концентрациях раствора. На рис. 3 представлены данные этих экспериментов.

В области количеств бацитрацина А, отмеченной на рис. 3 штриховкой, хроматографический спектр отсутствует, т. е. такие количества вещества находятся ниже предела детектирования УФ-детектора хроматографа. Но при этом присутствует масс-спектр бацитрацина А. В незаштри-хованной области детектируются оба спектра.

Интенсивность

218.1746

—

152,1008

140        160

195,1339

1.87'1 ^1 ^0,205.13-

219,179

221, '228,011

246,1824

24 251,0324    269,041? 281.22

H1 । 1», ।

300 m / z

Рис. 1. Участок полного масс-спектра.

1 — парацетамол (151.2 Да), 2 — кофеин (194.2 Да), 3 — анальгин (333.1 Да), 4 — кодеин (299.4 Да)

Интенсивность

диклофенак

Рис. 2. Фрагмент полного масс-спектра смеси лекарств

m / z

Следует отметить, что для иных веществ эти облас- ти могут быть несколько сужены либо расширены.

ВЫВОДЫ

Таким образом, эксперименты показали, что отечественный приборный тандем (Мили-хром А-02—МХ 5310) позволяет идентифицировать отдельные компоненты смеси лекарственных препаратов на уровне 100 фмоль, — тем самым расширены возможности использования жидкостного хроматографа и ESI-масс-спектрометра.

дицинской масс-спектрометрии ИАП РАН. Все спектры получены в режиме детектирования положительных ионов.

Хроматографическое разделение проводилось на микроколоночном жидкостном хроматографе Милихром А-02 ("Эконова", Новосибирск) с использованием хроматографической колонки размером 2 × 75 мм, заполненной сорбентом Prontosil AQC18.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ