Влияние глатирамера ацетата на патогенетические механизмы ремиттирующей формы рассеянного склероза

Лечение рассеянного склероза (РС) является сложной задачей, несмотря на активное изучение патогенеза этого заболевания [1, 4, 5]. В последние годы произошли значительные перемены в понимании природы этого тяжелого заболевания, которое стало рассматриваться не только как воспалительный, но прежде всего как нейродегене-ративный процесс [8, 12]. Данное положение обусловило поиск препаратов, обладающих не только клинической эффективностью, но и замедляющих прогрессирование нейродегенерации. Одним из таких препаратов является глатирамера ацетат, который, несмотря на достаточно хорошо изученный клинический эффект, нуждается в уточнении механизмов действия у больных ре-миттирующей формой рассеянного склероза [4, 5, 8, 10].

Материалы и методы.

В режиме мониторирования нами были обследованы 69 больных ремиттирующим рассеянным склерозом (РРС). Общая продолжительность исследования составила 2 года. Диагноз РС установлен на основании использования критериев McDonald с соавт. [11].

Все больные РРС были разделены на две группы: 46 пациентов получали глатирамера ацетат в комплексе лечебных мероприятий (группа наблюдения) и 23 – обычный комплекс лечения (группа сравнения).

Для решения поставленных задач нами использован комплекс биохимических и биофизических методов исследования, а в качестве модели – эритроцит периферической крови (стабилизатор – гепарин в количестве 25 ЕД на 1 мл крови). Мембранный комплекс (тени эритроцитов) получали методом осмотического гемолиза [2].

Исследовали следующие биохимические параметры:

• 1.    Уровень антиоксидантной защиты (на основании определения содержания альфа-токоферола – жирорастворимого антиоксиданта [ 7 ] , исследования активности: супероксиддисму-тазы - фермента антирадикальной защиты, каталазы – фермента антиперекисной защиты, а также глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы [6]).

• 2.    Структуру липидной фазы эритроцитарных мембран оценивали на основании определения содержания фосфолипидов в мембранах эритроцитов методом тонкослойной хроматографии на силикагеле и определения холестерина методом, основанном на реакции Златкиса [ 2 ] .

• 3.    Активность процессов перекисного окисления липидов оценивали на основании изучения содержания продуктов ПОЛ в мембранах эритроцитов: концентрации диеновых конъюгатов полиненасыщенных жирных кислот фосфолипидов и концентрации шиффовых оснований [ 2, 6 ] .

Специальные исследования проведены у каждого больного группы сравнения дважды (в начале исследования и по прошествии 2 лет наблюдения). У каждого больного основной группы специальные исследования проведены в первые 6 месяцев исследования – один раз в месяц, в дальнейшем – каждые три месяца (всего 11 исследований у каждого больного в течение 2 лет).

Статистический анализ проведен с помощью стандартного пакета программ SAS 8,0 (SAS Inc., США). Использовали критерии t и χ2. Результаты считали достоверными при р<0,05.

Результаты и обсуждение. В процессе двухлетнего наблюдения двух групп больных РРС мы проанализировали клиническую эффективность глатирамера ацетата. Полученные результаты аналогичны имеющимся литературным данным о клинической эффективности препарата [3, 4, 5, 8, 9, 10]. Средняя частота обострений на 1 больного за 2 года в группе, получавшей глати- рамера ацетат, составила 0,78, в то время как в группе сравнения – 2,91. Средний балл инвалидизации после двухлетнего лечения глатирамера ацетатом составил 2,15 балла, то есть практически не изменился по сравнению со степенью инвалидизации до лечения. В группе сравнения этот показатель за двухлетний период наблюдения увеличился с 2,21 до 3,26.

Наряду с анализом клинической эффективности глатирамера ацетата, мы изучили влияние препарата на состояние основных звеньев системы антиоксидантной защиты, активность процессов перекисного окисления липидов у больных РРС во взаимосвязи со структурой липидной фазы мембран эритроцитов.

Анализ состояния отдельных звеньев системы антиоксидантной защиты у больных РРС позволил выявить ряд изменений: при исходно сниженном уровне активности ферментов антиоксидантной защиты и истощении пула альфа-токоферола в мембранах эритроцитов у больных РРС, на фоне применения глатирамера ацетата мы установили повышение активности глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы, супероксиддисмутазы, каталазы. В этой же группе пациентов показано также постепенное повышение содержания аль-фа-токоферола в мембранах эритроцитов. В то же время в группе сравнения нами установлен низкий уровень активности ферментов антиоксидантной защиты и истощение пула альфа-токоферола как в начале, так и в финале исследований (через 2 года).

Таблица 1

Активность ферментов антиоксидантной защиты и содержание альфа-токоферола в мембранах эритроцитов у больных РРС на фоне лечения глатирамера ацетатом в динамике наблюдения (М±m)

Анализирумые периоды наблюдения	Анализируемые показатели активности ферментов антиоксидантной защиты у больных РРС
	Г6ФДГ, мU мл (662,9±29,9)	СОД, % торм. (45,3±2,9)	Каталаза, ммоль мин. мл (3,9±0,1)	Альфа-токоферол, нмоль. мл (5,8±0,28)
до назначения глатирамера ацетата	485,3±15,6 *	42,6±1,3	3,16±0,09 *	4,4±0,17 *
через 1 месяц	607,13±14,8 */ **	48,36±1,2 **	3,19±0,09 *	4,0±0,18 *
через 3 месяца	547,2±19,6 */ **	56,4±2,0*/ **	3,70±0,08 **	5,21±0,2 **
через 6 месяцев	706,25±21,4 **	40,6±1,9	3,85±0,1 **	4,95±0,2 **
через 9 месяцев	749,2±21,6 */ **	54,9±2,8*/ **	3,82±0,08 **	4,8±0,2 *
через 12 месяцев	623,8±18,5 **	68,3±2,0*/ **	3,7±0,09 **	4,4±0,17 *
через 18 месяцев	843,1±18,9 */ **	59,9±1,8*/ **	3,25±0,09*	5,5±0,21 **
через 21 месяц	940,1±27,9 */ **	58,3±1,9 */ **	4,61±0,1 */ **	6,1±0,12 **
через 24 месяца	847,9±19,6 */ **	62,3±1,2 */ **	4,52±0,08*/ **	6,0±0,14 **

Примечание: В этой таблице и всех последующих m – ошибка среднего арифметического;

* – уровень статистической значимости различий между показателями у здоровых и больных РРС (р<0,05);

** – уровень статистической значимости различий между показателями до назначения глатирамера ацетата и на фоне глатира-мера ацетата в разные периоды наблюдения (р<0,05).

Таблица 2

Активность фосфолипазы А2 и содержание липоперекисей в мембранах эритроцитов у больных РРС (M±m)

Анализируемые периоды и клинические группы		Величины анализируемых показателей
Показатели нормы		ФЛА2, % гемолиза (4,43±0,21)	ДК нмоль/мл (48,4±3,5)	ШО у.е., флюор. (18,3±1,02)
У больных РРС при первичном обследовании n=69		19,1±0,21 *	125,37±4,1 *	28,5±3,5 *
В группе наблюдения в процессе лечения глатирамера ацетатом, n=46	через 1 месяц	9,83±0,6 */ **	107,2±5,1 */ **	20,33±1,8 **
	через 3 месяца	5,57±0,3 */ **	106,2±3,5т*/ **	21,7±1,3 */**
	через 6 месяцев	6,14±0,1 */ **	100,1±4,3 */ **	19,0±1,3 **
	через 9 месяцев	5,35±0,2 **	112,2±3,3 */ **	19,1±1,0 **
	через 12 месяцев	6,6±0,1 */ **	76,4±2,8 */ **	20,3±1,1 **
	через 18 месяцев	5,62±0,16 */ **	100,1±2,3 */ **	20,0±1,4 **
	через 21 месяц	5,35±0,2 **	98,3±3,2 */ **	19,4±1,04 **
	через 24 месяца	6,11±0,17 */**	96,6±3,4 */ **	18,8±1,01 **
В группе сравнения, n=23	через 2 года наблюдения	18,9±0,22 *	128,4±3,8 *	29,9±2,1 *

* – уровень статистической значимости различий между показателями у здоровых и больных РРС (p<0,05);

** – уровень статистической значимости различий между показателями до назначения глатирамера ацетата и на фоне глатира-мера ацетата в разные периоды наблюдения (p<0,05).

В качестве критериев для определения активности мембрано-дестабилизирующих процессов исследовали уровень функциональной активности эндогенных фосфолипаз и динамику накопления продуктов перекисного окисления липидов – диеновых конъюгатов и шиффовых оснований. Данные представлены в таблице 2.

В процессе двухлетнего динамического наблюдения нами установлена прогредиентная тенденция к снижению исходно повышенного уровня активности фосфолипазы А2 и уменьшению содержания продуктов перекисного окисления липидов (диеновых конъюгатов и шиффовых оснований) в мембранах эритроцитов у пациентов на фоне лечения глатирамера ацетатом, наиболее выраженная к концу второго года наблюдения. У больных в группе сравнения, не получавших лечения глатирамера ацетатом, сохранялись высокие показатели активности фосфолипазы и содержания продуктов перекисного окисления липидов, достоверно отличные от параметров норм ы.

Таким образом, мы можем утверждать, что применение глатирамера ацетата в комплексе лечения позволяет уменьшить проявления оксидантного стресса в организме больных РРС. Применение глатирамера ацетата препятствует истощению пула альфа-токоферола, что косвенно оказывает мембранопротекторное действие.

Заключение. В целом, в настоящей работе нам удалось установить, что применение глати-рамера ацетата в комплексной терапии больных рассеянным склерозом, наряду с позитивным клиническим эффектом, оказывает нивелирующее влияние на мембранодестабилизирующие процессы и оказывает мембранопротекторное действие при рассеянном склерозе. Полученные нами результаты являются не только доказательством клинической эффективности глатирамера ацетата у больных рассеянным склерозом, но и расширяют представления о механизме действия препарата.