Влияние кормовых добавок с содержанием фитаз грибного и бактериального происхождения на биохимические показатели крови японских перепелов (Coturnix japonica)

Птица — важный источник животного белка, на долю которого приходится 30 % мирового потребления мяса (1). По сравнению с говядиной и свининой мясо птицы содержит меньше жира, натрия и холестерина и характеризуется высоким содержанием ненасыщенных жирных кислот (2, 3). Возрастающая потребность населения в диетическом мясе диктует необходимость динамичного развития новой отрасли птицеводства — перепело-водства, которое обеспечивает получение такой важной птицеводческой продукции, как яйца и мясо перепелов. Этот вид птицы обладает высокой яичной продуктивностью и быстрой скороспелостью, а мясо перепелов отличается нежной консистенцией, сочностью и ароматом (4). Наибольшее развитие яичное направление перепеловодства получило в Японии и странах Дальнего Востока, где перепелиные яйца в основном используют для лечебного и диетического питания (5), в то время как в странах Европы наиболее развито мясное направление перепеловодства. Продукция этой отрасли в ряде стран используется не только в пищевых целях, но и как сырье в парфюмерной промышленности для приготовления высококачественных кремов, шампуней и другой косметической продукции (6).

Успешное рентабельное разведение перепелов возможно только при создании производства с учетом биологических особенностей птицы, новейших разработок в области кормления и технологии содержания (7, 8). Для получения высоких показателей продуктивности сельскохозяйственной птицы, в том числе перепелов, необходимо использовать сбалансированные корма, в составе которых содержится фосфор.

В клетках всех живых организмов фосфор присутствует как в виде орто- и пирофосфатов, так и в составе фосфопротеинов, фосфолипидов, нуклеиновых кислот, гексозофосфатов и др. У позвоночных животных фосфор наряду с кальцием содержится в костной ткани. Основной формой депо органического фосфора в растительных компонентах кормов птицы служит мио-инозитол гексакисфосфорная, или фитиновая кислота — производное мио-инозитола, циклического спирта, фосфорилированного по всем 6 гидроксильным группам (9, 10). Отрицательно заряженные остатки фосфорной кислоты в молекуле фитиновой кислоты образуют соли (фитаты) с катионами железа, цинка, кальция, магния и других элементов, а также реагируют с белками, крахмалом, липидами с образованием нерастворимых конгломератов. В растениях большая часть фосфора представлена трудно растворимыми фитатами, содержащими Ca2+ и Mg2+. Наиболее богаты фитатами зерна злаков, семена подсолнечника, хлопка, тыквы, бобовых, в которых в составе фитатов присутствует более 60 % общего фосфора (11).

Фосфор фитатов, а также мио-инозитол становятся доступными для усвоения только после отщепления фосфата под действием ферментов фитаз. В зернах хлебных злаков и бобовых, семенах масличных культур, которые и составляют основу кормов, их содержится 60-88 % от общего фосфора. Вследствие отсутствия фитаз в пищеварительных секретах моногастричных животных основная часть фосфора, входящего в состав растительных кормов, не усваивается организмом. В свою очередь, недостаток фосфора приводит к выраженным нарушениям в формировании скелета животных. При ограниченном количестве доступного фосфора в кормах возрастает содержание фитинового фосфора, который усваивается взрослой птицей на 50 %, молодняком — только на 30 % (12).

В последнее время все большее внимание уделяется использованию в кормлении сельскохозяйственной птицы различных препаратов фитазы (13). Так, до 90 % комбикормов обогащаются ферментными препаратами, которые расщепляют неусвояемые фитат-содержащие комплексы (14, 15). Их применение обусловлено не только влиянием на фитатный комплекс растительных ингредиентов кормов, но и снижением ввода неорганических фосфатов в рационы, а также уменьшением экскреции фосфора с пометом в окружающую среду (16-18). Использование в птицеводстве и животноводстве кормовых добавок с содержанием фитаз позволяет эффективно снизить удельный расход корма, который затрачивается на получение единицы продукции, а значит, уменьшить количество образующихся отходов, тем самым повышая рентабельность сельскохозяйственного производства.

Современный рынок предлагает широкий ассортимент фитазных препаратов, в основном на основе фитаз микробного происхождения класса A (PhyA) и класса С (PhyC) (19). Однако при прохождении таких препаратов через желудочно-кишечный тракт птицы происходят существенные потери фермента вследствие кислотной денатурации и протеолиза. Технология инкапсуляции фитазы в клетках дрожжей-продуцентов в качестве микроконтейнеров позволяет существенно сократить потери фермента, а также увеличить его термостабильность. Экстремофильные дрожжи Yarrowia lipolytica — перспективный объект современной биотехнологии, в частности для получения инкапсулированной фитазы, главным образом, за счет полного сиквенса ее генома и наличия специального инструментария, позволяющего создавать высокоэффективные штаммы-продуценты рекомбинантных белков (20).

В наших предыдущих исследованиях (21) был проведен анализ фитазной активности трансформанта Y. lipolytica Po1f рИУ3-Ор, продуцирующего внутриклеточную (инкапсулированную) фитазу из Obesumbacterium proteus (ОРФ). При культивировании в слабощелочных условиях (рН 8,0), приближенных к рН содержимого кишечника птиц, у трансформанта Y. lipolytica Po1f рИУЗ-Ор активировался синтез ОРФ, что сопровождалось повышением активности фермента (22).

Проблемы несоответствия качества мяса промышленным стандартам, высокой вероятности появления дефектного мяса и возможного возникновения патологий у птицы в процессе роста приводят к огромным экономическим потерям и ограничивают развитие мировой мясной промышленности. С целью предупреждения заболеваний или обнаружения их на начальном этапе, а также мониторинга эффективности кормовых технологий следует своевременно проводить гематологический анализ для выявления патологических процессов.

Известно, что биохимические показатели крови отражают интенсивность процессов обмена веществ, которые происходят в организме животных под влиянием кормовых факторов, а также обеспечивают стабильность ионного состава, без чего невозможна нормальная деятельность органов (23).

В ряде исследований (24-26) были оценены различные аспекты влияния фитаз на морфологические и биохимические характеристики перепелов, свойства их яиц и мяса. Однако крайне ограничены данные о влиянии препаратов фитаз на гематологические показатели птиц.

Ранее мы оценили эффективность пищевой добавки ОРФ, инкапсу- лированной в рекомбинантные дрожжи Y. lipolytica (в концентрации 500 ед. фитазной активности/кг корма). Показано, что добавление инкапсулированной фитазы в рацион перепелов повышало живую массу птицы, прирост массы тела и уменьшало показатель конверсии корма по сравнению с контрольными группами, не получавшими фитазу, и группами, использующими коммерческую фитазу из Aspergillus ficuum (27).

Однако для понимания механизма действия фитазных препаратов на организм перепелов необходимо учитывать физиологические особенности птиц, которые характеризуют общее состояние их здоровья. Для мониторинга и оценки состояния животных одним из важных критериев, помимо динамики зоотехнических характеристик, принято считать гематологические показатели крови и гистологическую картину тканей и органов. Эти показатели характеризуют общее состояние здоровья, в том числе влияние кормовых добавок в рационе (28).

В настоящей работе впервые представлены доказательства высокой усвояемости японскими перепелами породы маньчжурские золотистые фитат-содержащих продуктов в присутствии инкапсулированной ОРФ относительно контроля и коммерческого препарата фитазы Ладозим прокси.

Целью работы была оценка влияния кормовых добавок с содержанием фитаз грибного и бактериального происхождения на биохимические показатели японских перепелов.

Методика. Исследования проводили в 2022 году на базе СГЦ «Загорское ЭПХ» — филиала ФНЦ ВНИТИП РАН (г. Сергиев Посад, Московская обл.) на перепелах ( Coturnix japonica ) породы маньчжурские золотистые, занесенной в Международную регистрационную книгу пород и линий перепелов.

Самцов и самок выращивали в общих клеточных батареях для молодняка с 1 -суточного до 42-суточного возраста. В возрасте 42 сут перепела были разделены по полу на самцов и самочек и переведены в клеточные батареи для взрослой птицы, где содержались до 60-суточного возраста при половом соотношении 1:4. В 1-ю нед выращивания температура в помещении составляла 30 °С, во 2-ю — 28 °С, в 3-ю — 26-25 °С, в 4-ю и далее — 23-22 °С. Влажность поддерживалась на уровне 65±5 %.

В рационе перепелов использовали наработанные пилотные партии кормовой добавки, содержащей микроинкапуслированную фитазу O. proteus , и коммерческую фитазу Ладозим прокси из A. ficuum (ООО «Биопрепарат», Россия) с активностью соответственно 500 и 4500 ед. фитазы/г.

Для получения кормовой добавки на основе микроинкапуслирован-ной фитазы O. proteus была проведена модификация методики получения биомассы клеток дрожжей Yarrowia lipolytica Polf pUV3-Oр, трансформированных геном фитазы из O. proteus в составе вектора pUVLT2 с промотором митохондриального порина VDAC (Voltage Dependent Anion Channel), индукция которого происходит при стрессовых условиях. При ферментации трансформанта использовали отходы бойни (куриный бульон из кожи, костей, химуса).

При модификации методики была исследована активность фитазы штамма Y. lipolytica Polf pUV3-Oр . При культивировании в слабощелочных условиях (рН 8,0), приближенных к рН содержимого кишечника птиц, происходила активация промотора VDAC в составе генетической конструкции pUV3-Oр у трансформанта Y. lipolytica Polf pUV3-Oр, что сопровождалось повышением активности фитазы.

Возможности рН-статирования позволили достигнуть оптимальной индукции промотора VDAC при слабощелочных значениях рН, что приво- дило к 2-кратному возрастанию активности фитазы. Была также отмечена высокая устойчивость внутриклеточной фитазы трансформанта Y. lipolytica pUV3-Op к термической обработке при применении распылительной сушилки. На основании проведенных пилотных экспериментов в лабораторном ферментере и выбранных параметров культивирования был разработан модифицированный состав питательной среды с использованием отходов бойни с целью увеличения выхода биомассы и удешевления технологии получения инкапсулированной фитазы с максимальной ферментативной активностью.

Модификацию среды проводили с помощью полного факторного эксперимента, в результате которого было показано, что гомогенат и бульон на базе куриных отходов (кожи, кишечника, жира) в сочетании с техническим глицерином оказывали положительное влияние, в то время как дрожжевой экстракт влиял на фитазную активность отрицательно. Однако дрожжевой экстракт нельзя было полностью исключить из питательной среды, поскольку этот компонент оказывал существенное влияние на выход биомассы. В результате эксперимента самая высокая фитазная активность была получена при культивировании на среде, содержащей 3 % бульона и 1 % глицерина. Удельная активность составила 11,17 мкмоль/(мин • мг белка), что в 5,8 раз превышало значения, полученные на среде, принятой за базовую. При этом количество биомассы составило 0,814 г/100 мл. Так была оптимизирована культуральная среда для ферментации трансформанта Y. lipolytica Po1f pUV3-Oр, позволяющая значительно увеличить фитазную активность.

Полученную в процессе модифицированной ферментации биомассу подвергали высушиванию на распылительной сушилке и вносили в состав рациона перепелов, которые получали корма с содержанием общего фосфора ~0,6 % (доступный фосфор 0,31-0,33 %). Кормовой набор включал: первый рацион корма для перепелят с 1-суточного до 4-недельного возраста; второй рацион корма для перепелят с 5- до 6-недельного возраста; третий рацион корма для взрослых перепелов начального периода яйценоскости с 42- до 60-суточного возраста (29). Корма были изготовлены из растительного сырья (кукуруза, пшеница, соевый шрот, соя полножирная, подсолнечный жмых, витаминный премикс) с добавлением синтетических кормовых аминокислот лизина, метионина и треонина, но без использования сырья животного происхождения. Содержание общего фосфора во всех трех типах корма составляло 0,6-0,8 %/кг корма, доступного фосфора — 0,350,45 %/кг корма, что было на 20-25 % ниже рекомендованных для перепелов значений.

Было сформировано шесть групп 1-суточных перепелов по 25 гол. в каждой, которые получали следующие типы корма: I контрольная группа (контроль+) — корм с содержанием общего фосфора 0,8 % (0,45 % доступного фосфора) без добавок; II контрольная группа (контроль-) — корм с содержанием общего фосфора 0,6 % (0,35 % доступного фосфора) без добавок; III опытная группа — корм с добавкой микроинкапсулированной фитазы O. proteus в дозе 500 ед. фитазы/кг корма и содержанием общего фосфора 0,6 % (0,35 % доступного фосфора); IV опытная группа — корм с добавкой микроинкапсулированной фитазы O. proteus в дозе 500 ед. фитазы/кг корма и содержанием общего фосфора 0,8 % (0,45 % доступного фосфора); V опытная группа — корм с добавкой, содержащей искусственно внесенную коммерческую фитазу Ладозим прокси из A. ficuum в дозе 4500 ед. фитазы/кг корма, и содержанием общего фосфора 0,8 % (0,45 % доступного фосфора); VI опытная группа — корм с добавкой, содержащей искус- ственно внесенную коммерческую фитазу Ладозим прокси из A. ficuum в дозе 4500 ед. фитазы/кг корма, и содержанием общего фосфора 0,6 % (0,35 % доступного фосфора).

Партии кормовой добавки на основе микроинкапсулированной фитазы O. proteus получали, как описано M.A. Danilova с соавт. (27).

Перепелов взвешивали каждые 7 сут. При выведении птицы из эксперимента на 42-е и 60-е сут были отобраны образцы крови и тканей у 4 особей из каждой группы и определены гематологические показатели в 3 аналитических повторностях (исследования проведены на базе ООО Независимая ветеринарная лаборатория «Шанс Био», Москва; участник Международной системы внешнего контроля качества лабораторных исследований EQAS, «Bio-Rad», США). Параметры биохимии крови были определены на автоматическом гематологическом анализаторе URIT-3020 No 3020E01663 («URIT Medical Electronic Co., Ltd.», КНР). Образцы тканей (грудные и бедренные мышцы) (толщиной 5x5 мм) фиксировали параформальдегидом и инкубировали в течение 60 мин в поддерживающей среде (OCT, Tissue-Tek, «Sakura Finetek», США), затем охлаждали до -30 °С. Замороженные срезы (12 мкм) нарезали на Cryostat Microm HM 525 («Thermo Fisher Scientific», США). Окрашивание гематоксилином и эозином проводили по стандартному протоколу (30). Криосрезы анализировали с помощью микроскопа Axio Imager D2 («Zeiss», Германия) при увеличении x400.

Полученные данные обрабатывали в программе ANOVA ( n = 3) при межгрупповом сравнении и представляли в виде средних арифметических значений ( М) и стандартных ошибок средней (±SEM). При анализе достоверности различий использовали t -критерий Стьюдента.

Результаты. Живая масса перепелят с 7- и до 28-суточного возраста между всеми исследуемыми группами значительно не различалась и была практически одинаковой. Однако в возрасте 35 сут средняя живая масса перепелят в IV опытной группе, где птица получала рацион с добавкой микроинкапсулированной фитазы O. proteus в дозе 500 ед. фитазы/кг корма и содержанием общего фосфора 0,8 %, превышала этот показатель по сравнению с I контрольной группой на 1,1 %, со II контрольной группой — на 2,1 %. При этом масса перепелов IV опытной группы была выше на 3,0 и 4,1 % по сравнению с V и VI опытными группами, в которых птица получала рацион с коммерческой фитазой Ладозим прокси из A. ficuum в дозе 4500 ед. фитазы/кг корма и содержанием общего фосфора 0,8 и 0,6 %. Сохранность поголовья во всех исследуемых группах составляла 100 % за весь период эксперимента.

В возрасте 42 сут в сыворотке крови у птицы из IV группы показатели АСТ, АЛТ, креатинина и щелочной фосфатазы уменьшались на 12-14 %, в то время как содержание глюкозы снизилось на 17 % по отношению к I контрольной группе (табл.). При этом количество холестерина и триглицеридов оставалось сопоставимым с контрольными цифрами. Интересно отметить, что в крови перепелов, получавших инкапсулированную фитазу, в отличие от контрольной группы, билирубин не был обнаружен. Кроме того, содержание общего белка в IV группе превышало показатели контрольных животных на 9 % (см. табл.). Схожие результаты были получены в V группе, за исключением того, что содержание холестерина и триглицеридов превышало показатели I контрольной группы соответственно на 33 % и в 1,9 раза (см. табл.).

В группах, получающих корм с дефицитным содержанием фосфора (0,35 %), наблюдалась иная картина: количество АСТ увеличивалось в III и VI группах, получавших инкапсулированную и коммерческую фитазу, 350

соответственно в 1,5 раза и на 13 % по отношению ко II контрольной группе (см. табл.). Активность АЛТ также увеличивалась почти в 2 раза. Содержание креатинина в III группе было сопоставимо с контрольными значениями, в то время как в VI группе оно превышало контроль на 20 %. Активность щелочной фосфатазы при этом возрастала в обеих группах примерно в 1,5 раза по отношению ко II контрольной группе. Содержание холестерина в группах, получающих фитазу, не отличалось от контрольных значений, тогда как количество триглицеридов в VI группе превышало контроль в 1,56 раза. Содержание глюкозы достоверно уменьшалось в группах, получающих фитазу, на 14 % и 20 % соответственно для III и VI групп, при этом содержание общего белка крови увеличивалось в III и VI группах примерно на 8 % (см. табл.).

Биохимические показатели сыворотки крови японских перепелов ( Coturnix japonica ) породы маньчжурские золотистые при включении в рацион кормовых добавок с содержанием фитаз грибного и бактериального происхождения в возрасте 42 и 60 сут ( n = 4 , N = 3, M ±SEM, СГЦ «Загорское ЭПХ» - филиала ФНЦ ВНИ-ТИП РАН, г. Сергиев Посад, Московская обл., 2022 год)

	Группа
	III |      IV      1       V       I VI

42-е сут

Билирубин общий,

мкмоль/л	1,3±0,08	1,0±0,04	0	0	0,9±0,04	0,9±0,07
АСТ, Ед/л	370,7±16,22*	236,7±6,89	361,5±29,51	321,0±2,00*	324,5±3,52	267,5±7,46
АЛТ, Ед/л	2,3±0,44	1,3±0,44	2,7±0,44	2,0±0,00	1,7±0,44	2,3±0,44
Креатинин,
мкмоль/л	24,7±1,11*	22,3±1,78	23,0±0,00	21,7±0,89*	22,3±1,11	27,0±0,00
Общий белок, г/л	26,1±1,16	27,1±0,55	29,2±1,09	28,5±0,69	29,1±1,00	29,1±0,53
Щелочная фосфа-
таза, Ед/л	1537,5±61,51*	736,0±52,00	1171,0±19,00	1346,0±63,00	1303,0±17,00*	1133,0±116,70
Глюкоза, ммоль/л	20,8±1,13	21,0±1,25	18,1±1,41	17,3±0,42	18,0±0,53	16,7±0,05
Холестерин,
ммоль/л	4,8±0,46*	4,9±0,67	5,4±0,64	5,1±0,27	6,4±0,38*	5,2±0,39
Триглицериды,
ммоль/л	1,1±0,04*	0,7±0,07	0,7±0,04	1,1±0,03	2,1±0,09*	1,0±0,04
		60-е сут
Билирубин общий,
мкмоль/л	1,8±0,11	1,4±0,11	1,5±0,21	1,8±0,45	1,7±0,25	0,6±0,27
АСТ, Ед/л	324,0±30,00*	286,0±12,00	236,5±22,48	258,5±14,49	268,0±6,00*	351,0±7,00
АЛТ, Ед/л	2,0±0,00	2,0±0,00	1,0±0,00	1,5±0,51	1,5±0,52	2,0±0,00
Креатинин,
мкмоль/л	27,0±3,00	22,5±1,47	25,5±1,47	26,0±1,00	26,5±2,51	24,0±1,30
Общий белок, г/л	29,7±0,61	26,2±0,75	30,4±1,25	31,6±0,15	31,3±2,32	27,2±0,09
Щелочная фосфа-
таза, Ед/л	1420,0±38,00*	937,5±225,51	1179,5±59,49	1155,0±94,00	546,0±41,00*	943,7±53,78
Глюкоза, ммоль/л	20,6±0,35*	18,6±1,11	20,0±0,70	19,7±0,35	17,6±0,31*	18,6±0,13
Холестерин,
ммоль/л	6,0±0,36*	4,3±0,28	5,2±0,12	4,7±0,88	5,5±0,34*	4,6±0,15
Триглицериды,
ммоль/л	2,20±0,280*	0,80±0,050	1,70±0,020	0,95±0,152	0,97±0,061*	1,00±0,100

Примечание. АСТ — аспартатаминотрансфераза, АЛТ — аланинаминотрансфераза. Описание групп см. в разделе «Методика».

* Различия между группами статистически значимы (р < 0,05).

В возрасте 60 сут содержание АСТ снижалось на 18-20 %, АЛТ — на 25 % как в IV, так и в V группе относительно I контрольной группы (см. табл.). При этом показатель общего белка увеличивался незначительно. Активность щелочной фосфатазы уменьшалась на 20 % и в 2,6 раза в IV и V группах. Количество холестерина уменьшалось на 22 % в IV группе и на 8 % в VI группе, в то время как содержание триглицеридов снизилось более чем в 2 раза в обеих группах, получавших фитазные препараты (см. табл.).

В VI группе, получавшей корм с дефицитным содержанием фосфора, наблюдалось уменьшение содержания общего билирубина более чем в 2 раза по отношению ко II контрольной группе (см. табл.). В III группе показатель ACT снижался на 18 %, АЛТ — в 2 раза по отношению ко II контрольной группе. Также в крови животных III группы концентрация общего белка увеличивалась на 16 %. В то же время в VI группе активность АЛТ была сопоставима с контрольными значениями, а ACT — увеличивалась в 1,2 раза. Наряду с этим активность щелочной фосфатазы возрастала на 25 %, концентрация холестерина — на 20 %, триглицеридов — в 2 раза (см. табл.).

Также мы определяли содержание фосфора в сыворотке крови экспериментальной птицы. Было показано, что на 42-е сут в условиях полноценного приема фосфора (0,45 % доступного фосфора) кормовая добавка ОРФ в дозе 500 ед. фитазы/кг корма увеличивала содержание фосфора в крови на 11 %, в то время как добавка коммерческой фитазы обусловливала возрастание этого показателя на 41 % (рис., А). В то же время на 60-е сут аналогичные показатели увеличивались на 60 и 40 % для IV и V групп, соответственно (см. рис., Б).

Содержание фосфора в сыворотке крови японских перепелов ( Coturnix japonica ) породы маньчжурские золотистые при включении в рацион кормовых добавок с содержанием фитаз грибного и бактериального происхождения в возрасте 42 (А) и 60 сут (Б) ( n = 4 , N = 3, M ±SEM, СГЦ «Загорское ЭПХ» — филиала ФНЦ ВНИТИП РАН, г. Сергиев Посад, Московская обл., 2022 год).

*, ** Различия между группами статистически значимы (р < 0,05).

Другая тенденция наблюдалась при оценке содержания фосфора в крови перепелов при его дефиците в корме (0,35 % доступного фосфора). В возрасте 42 сут при добавке ОРФ количество фосфора возрастало на 20 %, а при добавке коммерческой фитазы — на 29 %. Наряду с этим, в возрасте 60 сут ОРФ обеспечивала возрастание фосфора в крови на 11 %, а фитаза Ладозим прокси не имела эффекта (см. рис., Б).

В нашем недавнем исследовании (29) мы оценили эффективность кормовой добавки на основе инкапсулированной фитазы O. proteus в концентрации 500 ед. фитазы/кг корма на прирост живой массы перепелов. На основании анализа прироста живой массы у 150 перепелов обоих полов было установлено, что добавление инкапсулированной фитазы O. proteus в рационы увеличивало абсолютную живую массу и приросты на фоне уменьшения конверсии корма по сравнению с таковыми в контрольных группах и группах, использующих коммерческую фитазу из A. ficuum . Эти данные свидетельствовали о высокой степени усвоения фитатсодержащих кормов при скармливании перепелам инкапсулированной фитазы.

В настоящей работе мы провели анализ ключевых биохимических показателей крови японских перепелов при включении в их диету фитазных препаратов бактериального и грибного происхождения на фоне полноценного приема фосфора (0,45 % доступного фосфора). Показано, что на первом этапе развития (42-е сут) введение в рацион фитаз уменьшало показатели печеночных аминотрансфераз, щелочной фосфатазы и содержание глюкозы, а также увеличивало содержание белка крови (см. табл. 2). Эти результаты свидетельствовали о благоприятном влиянии фитазных препаратов на развитие животных.

В работах других авторов (35) при исследовании клинико-морфологических показателей при болезнях органов пищеварения перепелов Cot-urnix coturnix japonica 30-суточного возраста в опытной группе было отмечено возрастание ACT и АЛТ на фоне синдрома желудочно-кишечных болезней. Также наблюдалось снижение содержания общего белка, глюкозы, повышение мочевины и щелочной фосфатазы, увеличение количества триглицеридов. Таким образом, изменение показателей печеночных ферментов, щелочной фосфатазы и компонентов биохимии крови отражают нарушение процессов пищеварения у птицы и наоборот, стабилизация этих показателей, в частности при введении в рацион фитазных компонентов, соотносится с позитивным влиянием этих ферментов на биохимическую картину крови птиц.

Также известно, что на рост и продуктивность японских перепелов-несушек эффективное воздействие оказало скармливание 3,5 % концентрата муки, которое приводило к увеличению количества общего белка крови, глобулина, иммуноглобулинов, снижению показателей общего холестерина (36). При этом введение коммерческой фитазы Ладозима прокси в наших экспериментах обусловливало увеличение содержания холестерина и триглицеридов (см. табл.).

Основываясь на приведенных выше данных, можно утверждать, что фитаза бактериального происхождения в составе инкапсулированного фермента оказывает более выраженный эффект на биохимический гомеостаз крови. Этот вывод подкреплялся тем фактом, что при введении в рацион птицы 60-суточного возраста коммерческого препарата при дефицитном фосфоре возрастало содержание ACT, щелочной фосфатазы, холестерина и триглицеридов, в то время как при применении ОРФ таких эффектов не наблюдалось. Напротив, мы фиксировали увеличение количества общего белка крови и снижение количества печеночных ферментов (см. табл.).

Наряду с показателями белкового и липидного обмена значимы показатели минерального обмена. Наибольший интерес представляют макроэлементы кальций и фосфор как компоненты, присутствующие во всех тканях и органах и участвующие в важнейших биохимических процессах. Содержание кальция и фосфора в сыворотке крови отражает обеспеченность ими организма птиц. Мы показали, что на 60-е сут роста перепелов в условиях полноценного приема фосфора (0,45 % доступного фосфора) кормовая добавка фитазы увеличивала содержание фосфора в сыворотке крови на 60 и 40 % для IV и V групп (ОРФ).

Ранее мы установили, что на 28-е сут эксперимента по кормлению перепелов рационом с инкапсулированной фитазой количество остаточного фосфора в фекалиях птиц снижалось по сравнению с таковыми в контрольных группах, не получавших добавку фитазы, на 10 и 7 % соответственно при нормальном и дефицитном уровне фосфора (29). При этом в группе, получавшей коммерческую фитазу Ладозим прокси из A. ficuum (PhyA) в избыточной дозе 4500 ед. фитазы/кг корма, содержание фосфора даже увеличивалось на 9,5 %. Аналогичные результаты были получены нами в экспериментах на цыплятах-бройлерах (34). В совокупности эти данные свидетельствовали о высоком усвоении фитат-содержащих веществ в присутствии инкапсулированной фитазы у перепелов и цыплят-бройлеров по сравнению как с контролем, так и с коммерческим препаратом фитазы класса PhyA, что и может обусловливать снижение уровня остаточного фосфора в фекалиях птиц и его повышение в сыворотке крови.

Микроструктурный анализ гистологических срезов грудных мышц перепелов показал, что мышечные волокна контрольного образца имели более плотное расположение пучков миофибрилл (рис. 2, А).

Рис. 2. Гистологические срезы грудных мышц японских перепелов ( Coturnix japonica ) породы маньчжурские золотистые (продольный разрез) при скармливании рациона с содержанием общего фосфора 0,8 % (0,45 % доступного фосфора) без добавок (контроль, А) и корма с добавкой микроинкапсулированной фитазы Obesumbacterium proteus в дозе 500 ед. фитазы/кг корма и содержанием общего фосфора 0,8 % (0,45 % доступного фосфора) (Б) (окрашивание гематоксилином и эозином, увеличение *400, микроскоп Axio Imager D2, «Zeiss», Германия) .

Однако диаметр волокон был больше, чем в мышцах животных, использующих фитазу бактерильного происхождения (см. рис. 2, Б). Среди вторичных пучков наблюдался хорошо развитый перимизий из рыхлой соединительной ткани, а в эндомизии — жировые клетки. Более того, в мышцах перепелов, которым скармливали фитазу, наблюдалась более упорядоченная архитектура миофибрилл с четко выраженными саркомерами и окрашенными ядрами миоцитов. Была видна поперечная исчерченность волокон, а среди мышечных волокон при большом увеличении визуализировались тонкий эндомизий и ядра фибробластов (см. рис. 2, Б). Во всех образцах между вторичными пучками можно было увидеть несколько жировых прослоек.

Полученная нами гистологическая картина может свидетельствовать в пользу существенного изменения миофибриллярной структуры при добавлении в корм животных ОРФ. Мы наблюдали более упорядоченную архитектуру миофибрилл с четко выраженными саркомерами и окрашенными ядрами миоцитов на гистологической картине мышечной ткани животных (см. рис. 2, Б). Также существуют доказательства, что применение фитаз в кормах увеличивало коэффициент кажущейся перевариваемости (coefficient of apparent ileal digestibility) аминокислот отдельных кормовых ингредиентов у бройлеров в весьма выраженной степени (15). Возможно, это тоже может вносить определенный вклад в наблюдаемые нами эффекты. В целом, микроструктурный анализ грудных мышц перепелов свидетельствовал о высоких качественных и технологических свойствах мяса птицы, получавшей инкапсулированную фитазу.

Таким образом, мы доказали высокую усвояемость японскими перепелами породы маньчжурские золотистые фитат-содержащих продуктов в форме инкапсулированной фитазы как по отношению к контролю, так и по отношению к коммерческому препарату фитазы Ладозим прокси. Птенцы, получавшие кормовую добавку капсулированной фитазы на основе дрожжей Yarrowia lipolytica (ОРФ), демонстрировали хорошие показатели живой массы. Фитазные препараты благоприятно влияли на биохимический гомеостаз крови. В возрасте 42 сут в группах, получавших в составе корма фитазу и 0,45 % фосфора, показатели АСТ, АЛТ, креатинина и щелочной фосфатазы уменьшались на 12-14 %, содержание глюкозы снижалось на 17 %, а общего белка превышало показатели у контрольных животных. Однако в группе, потреблявшей корм с добавкой коммерческой фитазы Ладозим прокси из Aspergillus ficuum и содержанием доступного фосфора 0,45 %, количество холестерина и триглицеридов превышало показатели контрольной группы на 33 % и в 1,9 раза. В группах с дефицитом фосфора (0,35 %) у птицы, получавшей инкапсулированную и коммерческую фитазу, содержание АСТ увеличивалось в 1,5 раза и на 13 %. Активность АЛТ также возрастала почти в 2 раза по отношению к контролю с дефицитом фосфора. Содержание креатинина в группе, которой скармливали ОРФ и 0,45 % фосфора, было сопоставимо с контрольными значениями, в то время как в группе, получавшей Ладозим прокси, показатель превышал контрольный на 20 %. Содержание холестерина в группах, получавших фитазу, было сопоставимо с контрольными значениями, тогда как количество триглицеридов в группе с коммерческой фитазой превышало контроль в 1,56 раза. Такие эффекты коммерческой фитазы могли свидетельствовать о негативном влиянии препарата Ладозим прокси на липидный профиль крови птицы. При введении в рацион 60-суточных перепелов коммерческого препарата при дефицитном фосфоре наблюдалось возрастание количества АСТ и щелочной фосфатазы. При скармливании ОРФ таких эффектов не отмечали. Напротив, в последнем случае мы фиксировали увеличение содержания общего белка крови и снижение количества печеночных ферментов. При этом концентрация глюкозы достоверно уменьшалась в группах, получавших фитазу, на 14 и 20 %, а содержание общего белка увеличивалось примерно на 8 %, что демонстрировало высокую степень усваивания белковых продуктов корма при применении фитазных препаратов обоих типов. Кроме того, к 60-суточному возрасту перепелов в условиях полноценного приема фосфора (0,45 %) кормовая добавка фитазы увеличивала содержание фосфора в крови на 60 и 40 % для групп, потреблявших ОРФ и Ладозим Прокси, что свидетельствовало о более высокой эффективности в утилизации фитатов инкапсулированного фермента ОРФ. В мышцах перепелов, потреблявших фитазу, наблюдалась более упорядоченная архитектура миофибрилл с четко выраженными саркомерами и окрашенными ядрами миоцитов с поперечной ис-черченностью волокон, что может указывать на высокие качественные и технологические свойствах мяса. Полученные нами данные по усвояемости фосфора из фитат-содержащего корма дают основания для вывода о высокой целесообразности и перспективности применения в кормлении добавок с микроинкапсулированной фитазой класса D, обладающей наилучшими кинетическими характеристиками по сравнению с фитазами классов PhyA и PhyC при действии в желудочно-кишечном тракте перепелов.