Влияние крезацина на физиологические показатели крыс

Цель : изучить влияние крезацина на физиологические показатели крыс.

Задачи : 1. Исследовать действие крезацина на индивидуальное поведение крыс;

• 2.    Определить влияние крезацина на биохимические показатели крыс;

• 3.    Выявить воздействие крезацина на морфологические показатели крови.

Материалы и методы . Камера для изучения двигательной активности и эмоциональной реактивности, устройство для изучения “норочного” рефлекса, индивидуальные пеналы для фиксации животных, камера для исследования методом “открытого поля”; фотоколориметр концентрационный, тип: КФК-2МП; микроскоп бинокулярный, тип: “Биолам”; камера Горяева; дозаторы автоматические.

Реактивы : гематоксилин; эозин; спирт этиловый ректификованный; натрий хлористый (ч.д.а.); натрий лимоннокислый (ч.д.а.); уксусная кислота ледяная (ч.д.а.); гепарин раствор.

Ход определения. Испытание препарата крезацин проводили в лабораторных условиях на беспородных белых крысах массой тела 180200 г, содержавшихся в виварии МГАВМ и Б им. К. И. Скрябина в стандартных условиях и на одинаковом рационе. Животные были разделены на 4 опытные группы по (10 крыс в каждой), также была сформирована группа контроля, в которой находилось 10 крыс. В группы отбирали животных по следующим признакам: порода, возраст, масса тела, клиническое состояние. 1 группа-контроль; 2 группа - крезацин в дозе 15мг/кг; 3 группа - крезацин в дозе 20мг/кг; 4 группа – крезацин в дозе 25мг/кг. При изучении влияния крезацина на состояние крыс половину животных, убивали через 24 часа после введения препарата, другую половину - на 14 сутки. Все болезненные процедуры выполнялись в соответствии с положениями Хельсинской декларации о гуманном отношении к животным и методическими рекомендациями по их выведению из эксперимента и эвтаназии (Западнюк И. П. и др., 1984). Влияние препарата крезацин на индивидуальное поведение экспериментальных животных оценивалось с помощью теста «открытое поле» (Антрошенко О. Н. и др., 1999). Главным критерием являлась интенсивность ориентировочно-исследовательской активности животных, дополнительными критериями – коэффициент подвижности и эмоциональная тревожность. Исследования проводятся в ярко освещенной камере 100х100 см с высотой стенок 40 см. На пол камеры краской нанесена решетка, делящая поле на 25 (5х5) равных квадратов. Визуально за 2 минуты подсчитывают количество пересеченных квадратов 4 лапами и количество вертикальных вставаний.

Для изучения «норкового рефлекса» у крыс проводили метод «открытой площадки», результатом которого оценивается количество заглядываний в специально приготовленные норки. Животное (крыса) помещается в центр горизонтально установленной площадки размером 60х60, на которой равномерно расположены 16 отверстий диаметром 4 см. В течение 2 минут, визуально подсчитывают количество заглядываний в отверстия - норки. Для получения сыворотки отбирали кровь, выдерживали 30 мин, центрифугировали при 1500 об./мин в течение 15 мин.

Кровь у испытуемых животных брали тотально из яремной вены, в сроки, предусмотренные экспериментом, через 14 дней по общепринятой методике. При биохимическом исследовании крови определялось содержание билирубина, глюкозы, белка, мочевины.[3,4]

В цельной крови крыс определяли количество эритроцитов, лейкоцитов, уровень гемоглобина.

Результаты . Полученные данные показывают, что эффект от введения в рацион животных крезацина зависит от дозы. Через 24 часа после введения крезацина в корм гибели животных не наблюдали.

Общее состояние крыс всех групп после 14 дней введения крезацина с кормом не отличалось от контроля. Опытные животные набирали массу так же, как и контрольные имели нормальные клинические показатели. Во всех группах она через 14 суток опыта варьировала в пределах 207,93±3,78 -210,9± 7,24 г. Двигательная активность, исследовательский рефлекс и эмоциональный статусу крыс при всех исследуемых дозах крезацина не нарушалась (рис.1-3).

• 1.    Влияние крезацины на массу тела крыс (ряд 1-через 24 часа; ряд 2 –через

• 2.    Число исследуемых отверстий крысами после применения крезацина (ряд 1-через 24 часа; ряд 2 –через 14 суток)

  

• 3.    Число вертикальных стоек сделанных крысами через сутки и 14 суток после введени крезацина

• 2.    Влияние крезацина на весовые коэффициенты внутренних органов крыс (n=40; М ± m)

  Группы животных	Сроки исследо вания	Весовые коэффициенты , %
  		сердце	легкие	печень	селезенка	почки
  1 группа контроль	через 24 часа	0,41 ± 0,01	0,61 ± 0,02	3,51 ± 0,09	0,35 ± 0,04	0,63 ± 0,03
  	через 14 суток	0,40 ± 0,03	0,60 ± 0,06	3,74 ± 0,10	0,38 ± 0,03	0,65 ± 0,03
  2 группа крезацин в дозе 15 мг / кг	через 24 часа	0,41 ± 0,02	0,52 ± 0,03	3,64 ± 0,11	0,38 ± 0,03	0,62 ± 0,01
  	через 14 суток	0,43 ± 0,02	0,53 ± 0,04	3,72 ± 0,23	0,35 ± 0,02	0,59 ± 0,03
  3 группа крезацин в дозе 20 мг / кг	через 24 часа	0,42 ± 0,03	0,63 ± 0,03	3,61 ± 0,09	0,37 ± 0,03	0,63 ± 0,02
  	через 14 суток	0,40 ± 0,01	0,50 ± 0,03	3,70 ± 0,09	0,41 ± 0,02	0,65 ± 0,02
  4 группа крезацин в дозе 25 мг / кг	через 24 часа	0,41 ± 0,02	0,51 ± 0,05	3,56 ± 0,07	0,36 ± 0,03	0,62 ± 0,03
  	через 14 суток	0,43 ± 0,03	0,52 ± 0,05	3,27 ± 0,33	0,37 ± 0,03	0,63 ± 0,02

14 суток)

Более того, эти показатели в некоторых случаях превышали контрольные, но это связано с различными дозами препарата. Возможно, что крезацин оказывает влияние на центральную нервную систему животных улучшая метаболизм. В тоже время из таблицы видно, что с увеличением дозы снижается количество пересеченных квадратов и одновременно с увеличением дозы повышается показатель исследуемых отверстий и вертикальных стоек.

■ Ряд1

■ Ряд2

В гемограмме крыс, получавших крезацин в дозе 25 мг/кг, в конце опыта отмечено статистически достоверное снижение количества эритроцитов. Незначительно, через 14 дней опыта, с увеличением дозы препарата в крови крыс повышается содержание лейкоцитов и эритроцитов. Наиболее оптимальной дозой является 20 мг/кг, т. к. в морфологической картине крови мы наблюдали незначительное повышение уровня гемоглобина 145,38 ± 2,44 г/л, тогда как в контрольной группе гемоглобин находился на отметке 140,13 ± 2,72 г/л. Уровень эритроцитов спустя 14 дней эксперимента находился в пределах 6,79 ± 0,31 млн/мкл , в свою очередь количество лейкоцитов составило 6,90 ± 0,72 тыс/мкл . Прочих изменений в морфологической картине крови животных не обнаружено. В лейкограмме крыс в конце опыта зарегистрированы незначительные различия в содержании лейкоцитов между группами. Биохимические показатели крови (общий белок, мочевина, глюкоза) опытных групп животных существенно не отличались от контроля. Уровень билирубина находился в пределах 8,51 ± 0,33мкмоль/л, тогда как в контрольной группе данный показатель на уровне 8,01 ± 0,3; глюкоза – 6,84 ± 0,43ммоль/л, в контрольной группе - 6,43 ± 0,32ммоль/л; мочевина -4,90 ± 0,43ммоль/л, в контроле - 4,41 ± 0,21ммоль/л.

В тоже время видно, что содержание общего белка в крови увеличивалось соответственно увеличению дозы крезацина: общий белок был в пределах 75,01 ± 3,81г/л, в контрольной группе - 68,62 ± 3,64.

1. Влияние крезацина на диурез крыс (n=40; M±m)

Группы животных и доза препарата	Сроки исследования	Количество мочи , ml			Всего мочи , ml
		Через 1 час	Через 2 часа	Через 3 часа
1 группа контроль	через 24 часа	1,62 ± 0,51	0,52 ± 0,23	-	2,23 ± 0,61
	через 14 суток	3,11 ± 0,60	0,54 ± 0,30	-	3,71 ± 0,74
2 группа крезацин в дозе 15 мг / кг	через 24 часа	1,83 ± 0,53	0,51 ± 0,21	-	2,34 ± 0,60
	через 14 суток	2,30 ± 0,34	0,24 ± 0,14**	-	2,61 ± 0,32
3 группа крезацин в дозе 20 мг / кг	через 24 часа	2,73 ± 0,51*	0,50 ± 0,12	-	3,30± 0,63
	через 14 суток	3,13 ± 0,73*	0,24 ± 0,10**	-	3,64± 0,91*
4 группа крезацин в дозе 25 мг / кг	через 24 часа	2,51 ± 0,44	0,51 ± 0,22	-	2,70 ± 0,42
	через 14 суток	2,90 ± 0,31	0,24 ± 0,31**	-	2,52 ± 0,31

Однако при использовании дозы препарата 25 мг/кг содержание общего белка было ниже, чем в контроле и других группах. У крыс, получавших крезацин в дозе 25 мг/кг, на 14-е сутки после скармливания препарата наметилась тенденция к повышению билирубина (р < 0,05), но данный показатель не выходил за рамки физиологических норм. Это говорит о том, что не все дозы препарата однозначны для организма, изменяется и функциональная нагрузка на печень. Проведенные исследования мочи на белок, билирубин, глюкозу, мочевину дали отрицательный результат. В таблице 1 показано влияние крезацина на диурез у крыс. Можно отметить, что диурез под влиянием дозы 0,25 мг/кг крезацина несколько замедляется. Это подтверждается как почасовыми наблюдениями, так и общим количеством выделенной мочи. Тогда как другие дозы стимулируют отделение мочи.

Весовые коэффициенты внутренних органов крыс опытных групп в большинстве случаев не отличались от контроля. Через 14 суток после окончания скармливания препарата в дозе 25 мг/кг обнаружено небольшое уменьшение массы печени (табл.2).

Заключение. Крезацин в дозах 15…25 мг/ кг живой массы у крыс изменяет на 14 сутки двигательную активность по сравнению с контролем:

• -    по числу пересеченных квадратов только первая доза повышает ее на 3,57%. Вторая и третья приводит к снижению на 46,43 и 25, 27% соответственно; - число исследованных отверстий в тоже время повышается на 12,27; 67,94 и 37,17%.- число вертикальных стоек от первой дозы повышается на 33,33%, а от последующих снижается на 32, 30 и 18,75%.

• -    морфологические, биохимические показатели крови, весовые коэффициенты органов и диурез у опытных групп крыс изменяется в большинстве случаев недостоверно. По показателям двигательной активности, исследовательского рефлекса, эмоционального статуса, а также морфологических и биохимических показателей крови можно сделать вывод о том, что препарат крезацин во всех исследуемых дозах не оказывает отрицательного влияния на организм животных.

ЛИТЕРАТУРА: 1. Аганин, А.В., Демкин Г.П. и др. Справочник ветеринарного врача./ А.В. Аганин, Г.П. Демкин и др.// Ростов-на-Дону.: Феникс, 1996. - с. 608. 2. Андреева, Н.Л. Ростостимулирующие свойства иммуномодуляторов/ Андреева Н.Л. // Новые фармакологические средства в ветеринарии.: Тез. докл. науч.-практ. конф. - Л., 1990. – с. 32. 3. Антонов, Б.И. Лабораторные исследования в ветеринарии: биохимические и микологические/Антонов Б.И. //. – М.: Агропромиздат, 1991. - с.6-7, 8-9, 16-18, 37-42. 4. Гурьянов,А. М. Петуненков В. А. Прытков Ю: Н. Дугушкин Н. В. Справочник по кормовым добавкам/ Гурьянов А. М. Петуненков В. А. Прытков Ю: Н. Дугушкин Н. В. //. - Саранск.: Изд. Морд. ун-та, 1999.-с.58. 5. Кондрахин, И.П. Клиническая лабораторная диагностика ветеринарии: Справочное изд. /И.П. Кондрахин и др.//. - М., Агропромиздат, 1985. – с.287. 6. Лившиц, В.М. Биохимические анализы в клинике / В.М. Лившиц, В.И. Сидельников//.- М., Агропромиздат, 1998.- с.52. 7. Bendick A. Physiological role of antioxidants in the immune system. /. Bendick A.//J Dairy Sci, 1993.-P. 2789-2794. 8. Pathomorphology of acute and chronic stages of CCl-4-induced liver fibrosis: immunhisoche mical and in situ hybridization studies / H. Herbst, S. Milani, O. Heinrichs, D. Schuppan // Z. Gastroenterol. - 1992. - Bd. 30, № 2. - P. 21-28. 9. Singlair, H.M. Biochemical Society Symposia. - Cambrige, 1952. – p. 58.

ВЛИЯНИЕ КРЕЗАЦИНА НА ФИЗИОЛОГИЧЕСКИЕ ПОКАЗАТЕЛИ КРЫ C

Шарафутдинова А. Ф., Байматов В. Н.

Резюме

В статье идет речь о влиянии крезацина в различных дозировках на морфологические показатели организма крыс. Проводили морфологические, биохимические, этологические исследования. В результате проведенных анализов было выяснено, что крезацин в указанных дозировках не оказывает негативного эффекта на организм крыс.

INFLUENCE KREZACINI ON MORPHOLOGICAL INDICATORS OF RATS

Sharafutdinova A.F., Baymatov V. N.