Влияние лекарственных средств и микробного антигена на антимикробную активность эритроцитов

Для исследования регуляторного влияния микробных антигенов и лекарственных средств на активность факторов иммунной системы широко используются способы количественной оценки Т- и В-лимфоцитов [О ранней специфической …, 1980; Лазарева, Алехин, 1985], а также методы, основанные на определении уровня фагоцитарной активности лейкоцитов [Лазарева, Алехин, 1985]. В то же время основная часть микробных антигенов связывается с эритроцитами [Каплин, Софронова, Рочев , 1976], что отражает реальную картину антимикробной активности крови. В связи с этим обоснованной представляется возможность применения методик, основанных на определении способности связывать микробные антигены, для оценки влияния лекарственных средств на естественную активность этих клеток.

В литературе имеются данные, указывающие на возможность специфического усиления антиген-связывающей активности эритроцитов (АСАЭ) при их взаимодействии с различными антигенами [Каплин, 1980, 1982; Кузнецов, 1982; Каплин, Ро-чев, 1983]. Авторами установлено, что эта специфическая реакция воспроизводится in vitro как с цельной кровью, так и c отмытыми эритроцитами. Помимо оценки естественной антимикробной резистентности [Каплин, Софронова, Рочев, 1976] и специфической реакции эритроцитов (СРЭ), подобные методики могут быть применены и для прогнозирования изменения АСАЭ под влиянием лекарственных средств. Однако в последние годы в связи с высокой трудоемкостью методика определения величины АСАЭ не используется.

Целью настоящего исследования является влияние лекарственных средств и микробного антигена на антимикробную активность эритроцитов.

Материал и методы исследований

Исследования проведены с кровью 32 доноров. К 1.1 мл стабилизированной лимонно-кислым натрием крови добавляли по 0.5 раствора аденоз-интрифосфорной кислоты (АТФ) или аскорбиновой кислоты в диапазоне концентраций 0.001-1.0 мг/мл, а также глюкозу в дозе 10-500 мг/мл. В контрольные пробы вносили такое же количество физиологического раствора хлористого натрия.

После 30 мин. инкубации СРЭ индуцировали антигеном шигелл Ньюкестл активностью 0.2 АЕ/мл в реакции торможения пассивной гемагглютинации (РТПГА). Антигенная единица отражает способность микробного антигена нейтрализовать (блокировать) одну антительную единицу или величину одного титра антител или четыре креста. Уровни АСАЭ оценивали по методике, описанной в литературе [Каплин, 1980, 1982; Кузнецов, 1982 и др.].

При статистической обработке результатов исследований с использованием программ «Ехсеll» вычисляли среднюю арифметическую (М), среднюю ошибку (±m), достоверность различий по Стьюденту (Р).

Результаты исследованийи их обсуждение

Как видно из табл. 1, под влиянием различных концентраций АТФ отмечается повышение АСАЭ к микробным антигенам. Однако уровни повышения АСАЭ зависят от концентрации препарата: при малых и средних концентрациях ( 0.001–1.0 мг/мл) они выше, чем при больших (1.0 мг/мл).

В контрольных пробах при индукции СРЭ в условиях взаимодействия интактной крови с антигеном отмечается значительное повышение АСАЭ (по средним данным на +67%). Однако под влиянием различных концентраций АТФ разница показателей реакции между активированными антигеном и контрольными эритроцитами снижается. Малые и средние концентрации АТФ в сравнении с относительно большими концентрациями более существенно снижают эту разницу.

В табл. 2 показана взаимосвязь уровней изменения АСАЭ под влиянием АТФ и АСАЭ к антигену шигелл Ньюкестл в зависимости от исходных величин АСАЭ. Как видно из таблицы, уровни индуцируемой АТФ неспецифической реакции и СРЭ антигеном шигелл Ньюкестл повышаются, по средним данным, статистически значимо. При этом фиксируется прямая корреляционная связь (r = +0.59±0.20, Р < 0.05) между изменениями обоих показателей. В то же время отмечается обратная зависимость между степенью нарастания АСАЭ под влиянием АТФ, СРЭ к микробному антигену и величинами исходных (контрольных) показателей (соответственно r = –0.96±0.02, Р < 0.05) и –0.72 ± 0.15, Р < 0.05).

Таблица 1

Влияние аденозинтрифосфорной кислоты на антигенсвязывающую активность эритроцитов (числитель) и их специфическую реакцию к антигену шигелл Ньюкестл (знаменатель)

Статистические показатели	Активность связанного антигена в АЕ
	контрольными эритроцитами	эритроцитами, активированными аденозинтрифосфорной кислотой в мг/мл
		0.001	0.01	0.1	1.0
М ± m	0.9	1.6 ± 0.27*	1.5 ± 0.23*	1.5 ± 0.20*	1.3 ± 0.12*
	1.5*	1.7 ± 0.18	1.7 ± 0.14	1.7 ± 0.15	1.6 ± 0.09
М в % к контролю	-	178	167	167	144
		113	113	113	107
Количество проб	15	12	13	13	15
	15	12	13	13	15

Примечание. * Р < 0.05 при сравнении с контрольными эритроцитами.

Таблица 2

Связь между изменениями неспецифической антигенсвязывающей активности эритроцитов и их специфической реакции в зависимости от исходных величин

№ проб крови доноров	Активность связанного антигена в АЕ
	интактными эритроцитами	активированными эритроцитами
		АТФ	антигеном
1	0.1	2.6	1.5
2	0.1	2.4	1.0
3	0.1	1.0	1.0
4	0.5	1.1	1.1
5	1.0	1.2	1.4
6	1.0	1.3	1.2
7	1.1	1.5	1.2
8	1.3	1.5	1.5
9	1.4	1.4	1.3
10	1.4	1.4	1.8
11	1.6	1.6	2.1
12	1.7	1.7	1.9
М±m (средние данные)	0.9	1.6±0.04*	1.4±0.17*
М в % к контролю	-	178	156

Примечание. * Р < 0.05 при сравнении с интактными эритроцитами.

При взаимодействии цельной крови с аскорбиновой кислотой также отмечается дозозависимое повышение АСАЭ к микробному антигену. Малые дозы аскорбиновой кислоты (0.001 мг/мл) несущественно стимулируют АСАЭ, с повышением дозы (0.01–1.0 мг/мл) уровень активизации АСАЭ выра- жен четче и носит статистически достоверный характер (Р <0.05). В контрольных пробах при наведении СРЭ путем взаимодействия интактной крови с антигеном шигелл Ньюкестл отмечается статистически значимое повышение АСАЭ к этому антигену. Однако при предварительном контакте крови с аскорбиновой кислотой разница между активированными антигеном и контрольными эритроцитами исчезает. В то же время отмечается обратная зависимость между исходными величинами АСАЭ и уровнями их повышения под влиянием аскорбиновой кислоты и СРЭ к микробному антигену (r соответственно равно –0.76 ± 0.15, Р <0.05 и –0.76 ± 0.15, Р <0.05). Установлена прямая зависимость между уровнями изменения АСАЭ под влиянием аскорбиновой кислоты и СРЭ к микробному антигену (r + = +0.75 ± 0.15, Р <0.05).

При взаимодействии крови с глюкозой в концентрации 10 мг/мл определяется статистически достоверное повышение АСАЭ к микробному антигену и обратная зависимость уровня их повышения от исходной АСАЭ (r = –0.89 ± 0.07, Р < 0.05). Помимо этого, отмечается прямая связь между уровнями изменения АСАЭ под влиянием глюкозы и СРЭ к микробному антигену (r + = +0.95 ± 0.04, Р < 0.05).

Таким образом, универсальный характер изменения АСАЭ под влиянием лекарственных средств и СРЭ к микробному антигену и их обратная зависимость от исходной величины АСАЭ, наличие прямой корреляции между уровнями реакции эритроцитов под влиянием лекарственных средств и СРЭ к микробному антигену позволяет прогнозировать неспецифические и специфические изменения АСАЭ.

Учитывая данные литературы [Юденкова, 1984], есть основания предполагать, что изменения АСАЭ под влиянием лекарственных средств и СРЭ к микробным антигенам детерминированы генетически и реализуются либо через рецепторный аппарат клеток красной крови, ответственный за взаимодействие с соответствующими лекарственными средствами и микробными антигенами, либо через воздействие на метаболические процессы этих клеток.

Наличие рецепторов в мембране эритроцитов к микробным антигенам и возможность этих рецепторов к специфической перестройке при взаимодействии с микробными антигенами с повышением комплементарности доказано [Каплин, 1980, 1982; Каплин, Рочев, 1983]. С другой стороны, уровни СРЭ к микробным антигенам зависят от активности метаболических процессов эритроцитов, косвенным доказательством чего является термозависимость реакции [Каплин, Рочев, 1983].

Выводы

• 1.    Выявлено, что под влиянием микробного антигена in vitro определяется СРЭ в форме специфического повышения АСАЭ доноров, а после кон-

• такта эритроцитов с микродозами лекарственных средств (АТФ, аскорбиновая кислота и глюкоза) наблюдается неспецифическое усиление АСАЭ.

• 2.    Доказана обратная зависимость между исходными величинами АСАЭ и уровнями их повышения под влиянием лекарственных средств и СРЭ к микробному антигену и прямая зависимость между уровнями неспецифического изменения АСАЭ и СРЭ к микробному антигену.

• 3.    Установлено, что у активизированных эритроцитов in vitro микроконцентрациями лекарственных средств (АТФ, аскорбиновая кислота и глюкоза) вероятность индукции СРЭ на микробный антиген носит несущественный характер.

1980. Т. 149. C. 48–51.