Влияние неоадъювантной химиотерапии на спектр и экспрессионный профиль дисрегенераторных изменений в слизистой бронха при немелкоклеточном раке легкого

В настоящее время многое известно о морфологических изменениях бронхиального эпителия, которые предшествуют развитию инвазивного плоскоклеточного рака. К ним относятся базальноклеточная гиперплазия (БКГ), плоскоклеточная метаплазия (ПМ) и диспластические (неопластические)

изменения (Д) [2–7, 9–11]. Данные типы дисрегене-рации встречаются и в смежных с опухолью участках слизистой оболочки бронхов. Однако сведения о влиянии неоадъювантной химиотерапии (НАХТ) на дисрегенераторные процессы в бронхиальном эпителии в доступной литературе отсутствуют.

Цель исследования – оценить влияние неоадъювантной химиотерапии на характер дисрегене-раторных процессов, развивающихся в смежных с опухолью участках слизистой бронха, и их иммунофенотип.

Материал и методы

В исследование вошли 112 больных в возрасте от 41 до 73 лет, прооперированных в клинике НИИ онкологии СО РАМН по поводу немелкоклеточного рака легкого T1–4N0–ХM0стадии. В исследуемой выборке преобладали мужчины – 96 (88,1 %), женщин было 13 (11,9 %).

В предоперационном периоде 48 (42,8 %) больным было проведено 2–3 курса НАХТ по схеме: паклитаксел 175 мг/м2 в/в 1-й день + карбоплатин AUC 6 в/в в 1-й день, интервал между курсами – 3 нед. Во время радикальной операции 30 (27,5 %) пациентам проведен сеанс интраоперационного облучения в однократной дозе 10–15 Гр, из них 18 (60 %) – перед облучением вводили цисплатин или гемзар в радиосенсибилизирующих дозировках.

Морфологический диагноз рака легкого устанавливался согласно «Гистологической классификации опухолей легкого» (ВОЗ, Женева, 2003). Пренеопластические (ДI степени) и неопластические процессы (Д II–III степени) оценивались согласно критериям, изложенным S. Lantué ,joul et al. [8]. В 72 (64,3 %) случаях был диагностирован плоскоклеточный рак, в 40 (35,7 %) – аденокарцинома легкого различной степени дифференцировки. Плоскоклеточный рак чаще всего имел центральную локализацию (65,2 % случаев), аденокарцинома – периферическую (70 % случаев). Плоскоклеточный рак чаще встречался у мужчин – в 69 (61,6 %) наблюдениях. У всех женщин, вошедших в исследование, была выявлена аденокарцинома различной степени дифференцировки.

Материалом для морфологического исследования были опухоль и находящиеся от нее на расстоянии 4–5 см фрагменты ткани удаленного легкого. Ткань фиксировалась в нейтральном формалине, проводилась по стандартной методике и заливалась в парафин. Срезы бронхов толщиной 5–6 мкм окрашивались гематоксилином и эозином. Морфологическое исследование осуществлялось с помощью светового микроскопа «Axiostar plus» фирмы «К. Zeiss», Германия.

Иммуногистохимическое исследование проводилось по общепринятой методике. Демаскировку антигенов осуществляли путем инкубации срезов в микроволновой печи в течение 20 мин в цитратном буфере или ЭДТА-8. В качестве хромогена применяли диаминобензидин (ДАБ). Визуализацию реакции антиген – антитело осуществляли с помощью системы «Super Sensitive Polymer – HRP Detection System» (Bio Genex, США). Для подтверждения неметастатической природы аденокарцином легкого использовалась панель антител, включающая TTf-1 (clone Dako), CK7 (clone OV-TL 12/30, Novocas-tra), CK20 (clone Ks 20.08, Novocastra), CEA (clone AMT28, Novocastra), CDX2 (clone AMT28, Novo-castra). Для исследования респираторного эпителия в смежных с опухолью участках использовались моноклональные антитела к белкам р53 (clon CM1, рабочее разведение 1:150, «Novocastra»), выявляющий «дикий» и «мутантный» варианты протеина, bcl-2 (clon bcl-2/100/D5, рабочее разведение 1:80, «Novocastra») и Ki 67 (clon MIB – 1, RTU, «Daco»). Результаты иммуногистохимической реакции оценивали по процентному содержанию окрашенных клеток при любой степени положительной экспрессии маркера в разных участках препарата, соответствующих различным морфологическим процессам – гиперплазии бокаловидных клеток (ГБГ), БКГ, ПМ, пренеоплазии (дисплазии I степени) и неоплазии (дисплазии II–III степени).

Результаты и обсуждение

Из 72 больных с плоскоклеточным раком легкого НАХТ получали 32 (44,4 %) человека. Из 40 пациентов с аденокарциномой легкого НАХТ проводилась – 16 (40 %) (табл. 1). В этих группах рассматривался спектр дисрегенераторных изменений, встречающихся в участках респираторного эпителия, смежного с опухолью. По результатам микроскопического исследования гистологического материала в респираторном эпителии бронхов, пограничном с опухолью, наблюдались разные варианты дисрегенераторных изменений – ГБК, БКГ, ПМ и дисплазия различной степени выраженности. Данные дисрегенераторные изменения встречались в наших наблюдениях как самостоятельные процессы, так и в различных сочетаниях в пределах исследуемого фрагмента ткани. При сопоставлении различных вариантов сочетаний дисрегенераторных процессов, наблюдаемых в смежных с опухолью участках слизистой бронха, обнаружено, что частота их встречаемости не зависела от проведения НАХТ как при плоскоклеточном

Таблица 1

Частота встречаемости различных типов сочетаний дисрегенераторных процессов в зависимости от полученного лечения и гистотипа опухоли

Вариант дисрегенерации	Количество больных в группах
	Плоскоклеточный рак		Аденокарцинома легкого
	I. НАХТ-	II. НАХТ+	III. НАХТ-	IV. НАХТ+
БКГ+ПМ+	13/23	10/23	4/6	2/6
	χ2I–II=0,01;    р=0,91		χ2III–IV=0,01;   р=0,92
БКГ+ПМ-	14/30	16/30	13/22	9/22
	χ2I–II=1,65;   р=0,19		χ2III–IV=0,04; р=0,84
БКГ-ПМ+Д+	8/10	2/10	-	-
	χ2I–II=1,78;   р=0,18
БКГ-ПМ-	5/9	4/0	7/12	5/12
	χ2I–II=0,13;   р=0,71		χ2III–IV=0,04; р=0,83

Таблица 2

Зависимость экспрессии исследуемых маркеров от вида лечения и характера дисрегенераторных изменений при плоскоклеточном раке легкого

ДРИ (НАХТ-/ НАХТ+) % клеток с позитивной экспрессией в исследуемых группах Ki 67 р53 Bcl-2 CD 138 I. НАХТ- II. НАХТ+ I. НАХТ- II. НАХТ+ I. НАХТ- II. НАХТ+ I. НАХТ- II. НАХТ+ «норма» n=14 (6/8) 10,4 ± 7,9 16,3 ± 2,5 pI–II=0,06 6,0 ± 1,7 5,1 ± 2,2 pI–II=0,43 8,8 ± 2,8 7,9 ± 5,16 pI–II=0,71 9,9 ± 5,2 6,2 ± 2,3 pI–II=0,13 ГБК n=4 (2/2) 11,5 ± 0,7 10,0 ± 5,6 pI–II=0,74 6,5 ± 2,1 7,0 ± 1,4 pI–II=0,81 5,0 ± 4,2 10,5 ± 2,1 p I-II=0,24 7,1 ± 1,8 рI–II=0,03 5,8 ± 3,1 pI–II=0,63 БКГ n=53 (27/26) 31,5 ± 16,1 26,1 ± 13,8 pI–II=0,30 14,3 ± 5,6 13,2 ± 6,3 pI–II=0,57 11,0 ± 4,8 9,1 ± 4,4 pI–II=0,21 3,9 ± 2,2 5,3 ± 3,1 pI–II=0,15 ПМ n=33 (21/12) 61,2 ± 12,1 57,4 ± 10,6 pI–II=0,39 30,5 ± 6,5 27,4 ± 9,2 pI–II=0,32 21,4 ± 4,2 18,0 ± 6,7 pI–II=0,11 - - Д n=10 (8/2) 73,5 ± 16,3 84,0 ± 12,7 pI–II=0,42 40,3 ± 13,5 46,5 ± 2,1 pI–II=0,55 28,3 ± 8,1 33,0 ± 11,3 pI–II=0,51 - - раке, так и при аденокарциноме легкого (табл. 1). Представлял интерес анализ влияния НАХТ на экспрессионный профиль дисрегенераторных процессов, встречающихся в смежных с опухолью участках бронхиального эпителия. Исследовались факторы, отражающие уровень пролиферативной активности и участвующие в апоптозе (Ki 67, p53, bcl-2). Изучалась экспрессия маркера syndican-1 (CD 138), тесно связанного с сохранением дифференцировки клеток плоского эпителия. Как отмечалось выше, в разных участках слизистой бронха одновременно наблюдались неодинаковые дисрегенераторные процессы. Поэтому для оцен- ки влияния НАХТ на характер дисрегенерации сравнивали экспрессию показателей пролиферативной активности, апоптоза и дифференцировки плоского эпителия в клетках каждого варианта дисрегенераторных изменений, независимо от наличия или отсутствия других форм патологии. Например, для оценки параметров БКГ в одну группу объединяли все случаи с наличием этого варианта изменений без учета других форм дисрегенерации (табл. 2, 3).

При плоскоклеточном раке легкого в группе без НАХТ экспрессия изучаемых маркеров зависела от характера дисрегенераторных процессов. Показа-

Таблица 3

Зависимость экспрессии исследуемых маркеров от вида лечения и характера дисрегенераторных изменений при аденокарциноме легкого

ДРИ (НАХТ-/ НАХТ+)	% клеток с позитивной экспрессией в исследуемых группах
	Ki 67		р53		Bcl-2		CD 138
	I. НАХТ-	II. НАХТ+	I. НАХТ-	II. НАХТ+	I. НАХТ-	II. НАХТ+	I. НАХТ-	II. НАХТ+
«норма» n=17 (12/5)	11,1 ± 3,5	16,2 ± 7,1 pI–II=0,06	4,9 ± 1,7	6,4 ± 1,8 pI–II=0,14	6,5 ± 4,8	7,2 ± 3,7 pI–II=0,77	7,6 ± 4,2	7,8 ± 1,7 pI–II=0,92
ГБК n=6 (3/3)	11,5 ± 0,7	10,0 ± 5,6 p I–II =0,74	6,5 ± 2,1	7,0 ± 1,4 pI–II=0,81	5,0 ± 4,2	10,5 ± 2,1 p I–II =0,24	7,1 ± 1,8	5,8 ± 3,1 pI–II=0,63
БКГ n=28 (17/11)	23,1 ± 12,2	28,1 ± 21,8 pI–II=0,52	12,6 ± 5,8	12,3 ± 5,6 pI–II=0,92	9,9 ± 5,3	10,3 ± 7,6 pI–II=0,52	4,7 ± 1,6	5,6 ± 2,5 pI–II=0,33
ПМ n=6 (4/2)	67,0 ± 5,6	66,0 ± 15,5 p I–II =0,93	29,0 ± 7,0	26,0 ± 11,3 p I–II =0,78	25,0 ± 4,2	26,5 ± 12,0 p I–II =0,88	-	-

Таблица 4

Экспрессия исследуемых маркеров в зависимости от характера дисрегенераторных изменений и эффекта НАХТ при немелкоклеточном раке легкого

ДРИ /эффект НАХТ (ЧР/Ст)	% клеток с позитивной экспрессией в исследуемых группах
	Ki 67		р53		Bcl-2		CD 138
	I. ЧР	II. Ст	I. ЧР	II. Ст	I. ЧР	II. Ст	I. ЧР	II. Ст
1. БКГ (ПР) n=26 (10/16)	25,8 ± 8,9	30,5 ± 14,9 pI–II=0,46	11,3 ± 4,4	13,9 ± 7,2 pI–II=0,40	10,3 ± 3,9	10,2 ± 5,1 pI–II=0,96	5,6 ± 1,8	3,5 ± 2,2 pI–II=0,05
2. ПМ (ПР) n=12 (5/7)	58,0 ± 15,9	58,6 ± 7,2 p I–II =0,93	21,2 ± 8,4	32,3 ± 8,6 pI–II=0,06	21,5 ± 9,9	16,8 ± 3,7 pI–II=0,28	-	-
3. БКГ (АК) n=11 (4/7)	16,0 ± 6,2	35,8 ± 23,7 p I–II =0,21	11,3 ± 4,6	14,8 ± 5,9 p I–II =0,42	8,6 ± 2,1	12,4 ± 7,5 p I–II =0,44	3,4 ± 1,7	5,2 ± 2,9 p I–II =0,37

Примечание: ЧР – частичная регрессия опухоли; Ст – стабилизация.

тели пролиферативной активности и апоптоза постепенно возрастали в ряду: ГБК – БКГ – ПМ – Д. В проведенном нами ранее исследовании было отмечено достоверное увеличение показателей пролиферативной активности и апоптоза по мере нарастания степени тяжести дисрегенраторных процессов (БКГ – ПМ – Д) [1]. Экспрессия CD 138 была выше в клетках неизмененного бронхиального эпителия и заметно снижалась при базальноклеточной гиперплазии. В клетках плоскоклеточной метаплазии и дисплазии экспрессия CD138 в наших наблюдениях отсутствовала (табл. 2).

В тех случаях, когда больным проводилась НАХТ, при сопоставлении экспрессионных характеристик клеток одинаковых типов дисреге-нераторных изменений при НАХТ и без таковой, статистически значимых различий ни по одному из показателей не обнаружено. Экспрессионный СИБИРСКИЙ ОНКОЛОГИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ. 2012. № 3 (51)

профиль различных типов дисрегенераторных процессов изменялся подобно группе без НАХТ. Пролиферативная активность и показатели апоптоза были низкими в неизмененном эпителии и участках ГБК, резко увеличивались при ПМ и дисплазии, а экспрессия CD138 – уменьшалась (табл. 2). Экспрессионные характеристики клеток каждого из дисрегенераторных процессов при аденокарциноме легкого изменялись аналогично направленности, обнаруженной при плоскоклеточной карциноме легких (табл. 3).

Следует отметить, что экспрессионные характеристики клеток при наиболее часто встречаемых дисрегенераторных изменениях – БКГ и ПМ (n>10) – не зависели от эффекта, оказанного НАХТ на опухоль (табл. 4). Значения показателей пролиферативной активности и апоптоза в группе с частичной регрессией немелкоклеточной карциномы не имели статистически значимых различий в сравнении с группой пациентов, у которых отмечены стабилизации или прогрессирование опухолевого процесса после НАХТ. Только экспрессия CD138 в клеточных элементах БКГ при плоскоклеточном раке легкого была выше в группе с частичной регрессией опухоли после НАХТ.

Таким образом, результаты настоящего исследования показывают, что проведение больным НАХТ при немелкоклеточном раке легкого не оказывает существенного влияния не только на частоту встречаемости дисрегенераторных изменений, возникающих в смежных с опухолью участках слизистой бронха, но и на их экспрессионный профиль. Данный факт свидетельствует в пользу того, что изучение особенностей дисрегенерацион-ных изменений, предшествующих развитию рака легкого, может осуществляться и в случаях, если проводилась неоадъювантная химиотерапия.