Влияние потенциированных растворов полиоксидония на иммунную систему организма животных

Иммунная система высших животных и человека выполняет важную функцию, обеспечивая сохранение постоянства внутренней среды организма. Механизм этого процесса заключается в распознавании и элиминации чужеродных антигенов, как эндогенно возникающих (клетки, измененные вирусами, злокачественные клетки и др.), так и экзогенно проникающих (различные микроорганизмы, ксенобиотики и др.). Осуществление сохранения постоянства внутренней среды происходит за счет факторов врожденного (NK- и T-NK-лимфоциты, моноциты/макрофаги, нейтрофилы, дендритные клетки), так и приобретенного или адаптивного (Т- и В-лимфоциты) иммунитета. Поэтому при нарушении численности и функциональной активности клеток иммунной системы в организме возникают различные заболевания: иммунодефициты, аутоиммунные и лимфопролиферативные процессы и др. [5].

Иммуномодуляторы как лекарственные средства различного происхождения оказывают разнонаправленное действие на иммунную систему в зависимости от ее исходного состояния. Изменение иммунореактивности в организме в ответ на введение иммуномодулятора зависит от множества факторов (структуры препарата, дозы, схемы введения, исходного состояния организма и др.). При анализе фармакологического действия иммуномодулятора необходимо учитывать особенность функционирования иммунной системы в организме, заключающейся в том, что на введение препарата она отвечает комплексно, и изменение отдельных показателей иммунитета приводит к реагированию сложного механизма всей системы [4]. Из этого следует, что независимо от направленности действия иммуномодулятора в той или иной степени изменяется функциональная активность всей иммунной системы в целом. В частности, отдельный иммуномодулятор может обладать избирательностью действия на конкретный компонент иммунитета, но конечный эффект его влияния на иммунную систему будет всегда характеризоваться многогранностью.

Одним из перспективных иммуномодуляторов, применяемых в нашей стране, является полиоксидоний [1, 2]. Представитель нового поколения синтетических иммуномодуляторов -полиоксидоний (производное сополимера К-окси-1,4-этиленпиперазина и (N-карбокси)- 1,4-этиленпиперазина бромида) обладает широким спектром действия. Иммуномодулятор стимулирует функциональную активность фагоцитов, что проявляется в повышенной способности фагоцитов поглощать и переваривать микробы, повышает активность нейтрофилов и др. Суммарным следствием активации факторов естественного иммунитета является повышение устойчивости к бактериальным и вирусным инфекциям. Полиоксидоний повышает также функциональную активность Т- и В-лимфоцитов, NK- клеток, а также является мощным детоксикантом, так как обладает способностью сорбировать на своей поверхности различные токсические вещества и выводить их из организма. В силу своих иммуномодулирующих, детоксирующих, антиоксидантных и мембраностабилизирующих свойств полиоксидоний имеет положительные результаты от его применения в различных областях клинической медицины и ветеринарии [3].

Целью проведенных исследований являлось изучение влияния иммуномодулятора полиоксидоний на организм белых крыс в сравнительном аспекте после введения аллопатической дозы и его потенциированных растворов в различной концентрации.

Материал и методы исследований. Биологические свойства растворов полиоксидония были изучены на белых беспородных крысах-самцах массой 180200 г, содержавшихся в виварии кафедры фармакологии и токсикологии ФГБОУ ВПО КГАВМ согласно зоотехнических требований. Работа проводилась в соответствии с требованием «Правил проведения работ с использованием экспериментальных животных (1977)», а контрольные и подопытные белые крысы получали сбалансированный по питательным веществам рацион и имели свободный доступ к питьевой воде. По принципу аналогов было сформировано 5 групп животных по 5 особей в каждой из них. Первая группа была контрольной, вторая-пятая - подопытными и получали инъекции иммуномодулятора в различных дозах и концентрациях при его разведении бидистиллированной водой. Во 2-й подопытной группе определение количества вводимого препарата проводили согласно рекомендуемой дозы, отраженной в инструкции по применению полиоксидония, а далее проводили ее перерасчет на крысу средней массой 200 г. Доза препарата для животных этой группы составляла 0,1 мг/кг массы тела (аллопатическая доза). Иммуномодулятор после растворения в бидистиллированной воде в объеме 1 мл вводили внутримышечно с внутренней поверхности бедра, животным 3-й группы препарат вводили в виде высоко разбавленного раствора 10 -8 мг/мл, в 4-й – 10 -11 и в 5-й – 10 -16 мг/мл. Различные концентрации водных растворов полиоксидония предварительно готовились методом последовательных серийных разбавлений с использованием бидистиллированной воды. Контрольным животным бидистиллированную воду в дозе 1 мл вводили в ту же область тела, что и подопытным крысам. Продолжительность опыта составляла 25 суток и включала 5 серий инъекций препарата и бидистиллированной воды последовательно через каждые 5 суток. Контрольных и подопытных животных из опыта выводили в соответствии с требованиями Европейской конвенции по защите экспериментальных животных 86/609/ЕЕС путем декапитации под эфирным наркозом. Взятие крови у животных для исследования осуществляли из шейной вены. Для определения гематологических показателей в периферической крови подсчитывали общее количество лейкоцитов (•109 /л), абсолютное и относительное количество нейтрофилов и лимфоцитов. Содержание лейкоцитов и лейкограмму определяли общепринятым методом с использованием клавишного механического счетчика крови (ЗАО «ЛОиП», СПб, 1999) и камеры Горяева. В сыворотке крови определяли уровень общего белка (г/л) рефрактометрическим методом. Статистическую обработку полученных в опыте цифровых данных обрабатывали методом вариационной статистики с помощью программного обеспечения "Microsoft Excel – 2003". Полученные различия в цифровых данных считали статистически значимыми при Р < 0,05.

Результаты исследований и их обсуждение . Проведенное исследование разных концентраций растворов в области 10^-8, 10^-11 и 10^-16 мг/мл в сравнительном аспекте с аллопатической дозой и бидистиллированной водой показало следующие результаты. Так, содержание общего белка в сыворотке крови у контрольных белых крыс составляло 51,77 ±1,77 г/л. Во всех подопытных группах отмечалось увеличение содержания общего белка в сыворотке крови. Наиболее высокие значения этого показателя отмечались в группе с разведением иммуномодулятора 10^-16 мг/мл (наноассоциаты – 5-я группа).

Значение показателя возрастало на 16,6% (Р < 0,05), по сравнению с контролем. В других группах повышение было менее значительным. Так, в подопытной группе животных с аллопатической дозой (2-я подопытная группа – 0,1 мг/кг массы тела) повышение составило 8,7%, в 3-й группе (10-8 мг/мл) – 10,2%, в 4-й подопытной группе (10-11 мг/мл) – 12,0%. Повышение уровня белка в сыворотке крови свидетельствует о нормализации клеточного метаболизма, повышении интенсивности анаболических процессов и снижении процессов протеолиза. При сравнении общего количества лейкоцитов в крови у контрольных и подопытных лабораторных животных следует отметить, что у последних также наблюдались более высокие значения этого показателя крови, но динамика изменений была несколько иной. Так, наиболее высокие результаты показателя количество лейкоцитов в крови отмечались во 2-й группе (аллопатическая доза), где увеличение составило 57,1%, по сравнению с контролем (Р < 0,05). Количество лейкоцитов у крыс этой группы в крови составило 7,13±1,23 •109/л. В других подопытных группах повышение значения этого показателя крови было более низким. Так, в 3-й группе повышение составляло 22%, в 4-й – на 18,2% и в 5-й – на 16,4%. Среди форменных элементов крови лейкоциты являются клетками, обеспечивающими иммунный статус организма. Среди различных видов лейкоцитов крови в процентном отношении преобладают лимфоциты и нейтрофилы (микрофаги). У белых крыс отмечается лимфоцитарный профиль крови, так как в процентном отношении эти клетки являются самыми массовыми среди лейкоцитов. При сравнении в различных подопытных группах и в контроле клеточного соотношения лимфоциты/нейтрофилы получили следующие результаты. Так, в контроле этот индекс клеточного соотношения составил 2,28, во 2-й группе – 4,14, в 3-й – 2,48, в 4-й – 1,89 и в 5-й - 2,47. Таким образом, анализ индекса клеточного соотношения лимфоцит/нейтрофил указывает на то, что в группе, где животным вводили аллопатическую дозу полиоксидония, происходит заметное преобладание лимфопоэза над гранулоцитопоэзом. Кроме того, в этой группе выявляется наибольшее количество лимфоцитов в крови не только в сравнении с контролем, но также и с другими подопытными группами. Так, количество лимфоцитов в крови у животных 2-й группы, по сравнению с контролем, превышало на 87,9%, в других же подопытных группах (2 - 4-я) соответственно на 23,1%, 14,4% и 17,2%. Количество нейтрофилов (2,03 - 2,80•109 /л) в крови у крыс разных групп не имело таких резких различий, по сравнению с количеством лимфоцитов. Тем не менее, в процентном отношении к другим лейкоцитам эти различия просматривались. Так, в контроле процентное содержание нейтрофилов, по отношению к другим лейкоцитам, было наиболее высоким и уступало лишь значению показателя в 4-й группе животных на 16,8%.

Выводы: 1. Состояние иммунной системы после применения аллопатической дозы полиоксидония характеризуется ее стимуляцией, в то время как у контрольных животных оно не имеет положительных изменений. Наиболее высокое процентное содержание нейтрофилов в крови отмечается у контрольных животных, а численность лимфоцитов у них - самой низкой среди результатов всех групп. 2. Наноассоциаты раствора полиоксидония 10-8 мг/мл, 10-11 и 10-16 мг/мл стимулируют обменные процессы в организме, повышая уровень общего белка и численность клеток лимфоидного ряда. Наиболее значительное повышение уровня общего белка в крови отмечалось в группе животных, которым вводили наноассоциат раствора полиоксидония 10-16 мг/мл. 3. Наиболее высокое процентное содержание лимфоцитов отмечается во 2-ой группе (аллопатическая доза - 0,1 мг/кг массы тела), также как и значение индекса соотношения лимфоциты/нейтрофилы. Среди подопытных групп животных, где вводились наноассоциаты, наиболее высокие значения показателя процентного содержания лимфоцитов в крови, по сравнению с контролем, отмечаются в группе с дозой 10-8 мг/мл (на 23,1%). 4. Полученные результаты свидетельствуют, что применение полиоксидония белым крысам в концентрации 10-8 мг/мл, 10-11 и 10-16 мг/мл можно использовать в профилактических целях для повышения иммунного статуса организма.

Резюме

Аллопатическая доза и потенциированные растворы иммуномодулятора полиоксидоний в различных концентрациях оказывают влияние на численность клеток крови и иммунное состояние организма белых крыс. Потенциированные растворы полиоксидония оказывают положительное влияние на цитогенез клеток лимфоидного ряда и обеспечивают повышение интенсивности анаболических процессов в организме.

Dordzhiyeva D.E. Summary

Allopathic dose and potentsiirovannye solutions of immunomodulator polyoxidonium in various concentrations affect the number of blood cells and immune status of the body of white rats. Potentsiirovannye solutions polyoxidonium have a positive impact on cytogenes number of lymphoid cells and provide an increase in the intensity of anabolic processes in the body.