Влияние сухого гомогената дождевых червей на физиолого-биохимический статус лабораторных животных

Использование

биологически

активных веществ открывает широкие возможности для модуляции физиологических процессов в организме. Использование природных субстанций, содержащих биологически активные вещества, повышает резистентность организма, облегчает клиническое течение многих экологически обусловленных заболеваний и практически не имеет негативных побочных эффектов. В настоящее время ведется интенсивный поиск новых биологически активных веществ, способных поддерживать гомеостаз [1, 4].

Отличительной чертой наших дней является повышенный интерес к дождевым червям, как к альтернативному источнику белка. В их целомической жидкости, находится более проявляющих    ряд эффектов: протеолитический, гемагглютинирующий, противоопухолевый, антибактериальный, иммуногенный,

40 протеинов, биологических цитолитический, гемолитический, митогенный, антиоксидантный, липополисахарид

связывающий и др. [6, 8, 14].

Белок, полученный из червей, используется с высокой эффективностью для всех видов животных, птицы, рыбы, как в сыром, так и в переработанном виде. В результате получают мясо высокого товарного качества [9].

Анализы гомогенатов тканей дождевого червя (Eisenia foetida) выявили смесь гликолипопротеинов, известную как G-90, которую можно применять в медицине и ветеринарии. G-90 обладает сильной фибринолитической и антикоагулянтной активностью, способной лизировать фибриновые сгустки. Влияние G-90 на свертываемость крови очень похоже на влияние известного антикоагулянта гепарина. G-90 также может действовать как антиоксидант, проявлять антимикробную активность in vitro и in vivo [5, 7, 13].

За природным лекарственным сырьем животного и растительного происхождения, созданными на их основе фармацевтическими препаратами, биологически активными пищевыми добавками в настоящее время большое будущее [2, 3, 11].

Целью данных исследований являлось изучение влияние сухого гомогената дождевых червей на физиологобиохимический статус лабораторных животных .

Материал и методы исследований.

Дождевых червей породы Владимирский старатель выращивали в вермикомпостере на органических отходах в условиях лаборатории ФГБОУ ВО Пензенский ГАУ. Анализ массы дождевых червей проводили в ЦАС «Пензенский» по аккредитованным методикам. Для подготовки сухого гомогената дождевых червей отбирали взрослых половозрелых особей. Очищение массы дождевых червей от органических остатков и подготовку препарата осуществляли по экспериментальной методике.

Изучение сухого гомогената дождевых червей проводили в условиях вивария Пензенского ГАУ в течение 30 суток на аутбредных белых крысах линии Вистар (Wistar) в 2019-2020 гг. Для эксперимента были сформированы группы лабораторных животных (самцов) в возрасте 18 месяцев по 5 голов массой 230260 г. Животных отбирали по принципу аналогов с учетом возраста и живой массы. В период проведения исследований животные опытной и контрольной групп находились в одинаковых условиях кормления и содержания. Животные опытной группы получали сухой гомогенат дождевых червей перорально в составе основного рациона из расчета 100 мг/100 г массы тела. Общая суточная норма кормления на группу животных составляла 300 г/сутки. Крысы имели свободный доступ к воде и кормам. При ежедневных наблюдениях учитывали общее состояние, аппетит, динамику прироста живой массы по общепринятым методикам.

В начале эксперимента и после его завершения определялись биохимические и гематологические показатели крови в условиях межфакультетской биохимической лаборатории Пензенского ГАУ.

Для определения общего белка использовали биуретовый метод, концентрации альбумина – унифицированный колориметрический метод с бромкрезоловым зеленым, мочевины в плазме крови – уреазный/фенол-гипохлоритный метод по конечной точке, общего холестерина в плазме крови – энзиматический колориметрический метод, глюкозы – глюкоозооксидазный метод.

Гематологические исследования проводили с помощью автоматического гематологического ветеринарного анализатора BC-2800Vet. В крови определяли: количество эритроцитов, концентрацию гемоглобина, тромбоцитов, количество лейкоцитов и лейкоцитарную формулу.

Полученные экспериментальные данные обрабатывали на персональном компьютере с использованием программы Microsoft Office Excel. Проводили вычисление cpеднeго знaчeния, стaндаpтнoгo (cpеднeквадpатичного) oтклoнeния и стaндapтной ошибки среднего. Значимость различий между двумя средними оцeнивaлaсь по критерию Стьюдента (t ). Выборочные параметры, приводимые далее в таблицах, имеют следующие обозначения: М – среднее, m – ошибка среднего, n – объем анализируемой подгруппы, р – достигнутый уровень значимости.

Результат исследований. В результате исследования химического состава дождевых червей установлено, что они содержат 77-80 % воды. Энергетическая ценность дождевых червей колеблется в пределах 19,3-22,6 кДж/г сухой массы. В сухом веществе содержится значительное количество протеина (более 50 %) и зольных элементов (23 %), незначительное количество жиров и углеводов.

В ходе научного эксперимента на лабораторных крысах установлено изменение живой массы самцов опытной группы, получавших сухой гомогенат дождевых червей, в сторону увеличения в течение всего эксперимента, что говорит о стимулирующем действии изучаемого препарата (Рисунок 1).

Живая масса самцов контрольной группы, получавших рацион без сухого гомогената дождевых червей, варьировала на протяжении 4-х недель опыта значительнее, чем живая масса опытных самцов, причем к концу эксперимента она даже снизилась в среднем по группе с 257 до 210 г, тогда как, в опытной группе этот показатель увеличился с 236 до 310 г. Абсолютный прирост живой массы в опытной группе самцов так же достоверно был выше, чем у контрольных и составил 48,8±0,15 г, а у самцов контрольной группы всего 34,6±0,01 г. Аналогичная картина наблюдается по изменениям среднесуточных и относительных приростов живой массы лабораторных животных по периодам эксперимента.

Hill

□ опытная группа

□ контрольная группа

Рисунок 1 – Динамика пророста живой массы лабораторных крыс в течении эксперимента, г

Данные наших исследований согласуются с экспериментальными данными, полученными Parolini M. (2020), в которых эффективность белка дождевых червей оценивали по таким параметрам животных, как прирост живой массы, скорость роста, потребление корма и коэффициент конверсии корма. Установлено, что включение муки дождевых червей в рационы позволяет повысить продуктивные показатели животных, при этом, не влияя на качество конечных пищевых продуктов. Включение в рацион кормления перепелов 1 % и 1,5 % порошка дождевых червей позволило улучшить продуктивные и репродуктивные показатели. [6]. Применение размолотых дождевых червей в кормлении рыбы также способствовало повышению живой массы, по сравнению с рыбой, получавшей корм с добавлением рыбной и соевой муки соответственно [12].

Полученный нами экспериментальный материал позволяет утверждать, что введение в рацион самцов сухого гомогената дождевых червей в количестве 0,3 % к рациону, повышает массу животных в ходе эксперимента с их 100 % сохранностью.

Кроме того, после завершения эксперимента, полная сохранность животных опытной группы наблюдалась в течение года, в контрольной группе она составила менее 50 %, что говорит не только об эффективности препарата, как кормовой добавки, но и о его лечебных свойствах.

Кровь является защитной внутренней средой всевозможных организмов. Состав способен изменятся в зависимости от различных внутренних и внешних факторов. Поэтому, проанализировав состав крови, можно увидеть изменения, происходящие в организме. Результаты проведенных исследований свидетельствуют о том, что все гематологические показатели лабораторных животных находились в пределах физиологической нормы (Таблица 1).

В результате эксперимента установлено повышение уровня гемоглобина в крови лабораторных крыс опытной группы на 7,87 % относительно животных контрольной группы.

Установлено повышение числа эритроцитов в крови животных опытной группы. Их концентрация в конце эксперимента составила 7,7±0,377*1012/L, что на 13,2 % выше по сравнению с контрольной группой. Отмечена тенденция снижения числа тромбоцитов в крови лабораторных крыс опытной группы. Если в начале эксперимента уровень тромбоцитов в опытной группе был 766±135*109/L, то в конце значение данного показателя уменьшилось на 3,65 % и составило 738±129*109/L. Можно предположить, что сухой гомогенат дождевых червей содержит биологически активные вещества, которые способствуют нормализации уровня тромбоцитов в крови, снижая вероятность тромбоза сосудов, и тем самым могут служить средством для профилактики тромбоцитозов.

Группой ученых под руководством Wang X.M. (2019) установлено, что протеаза дождевого червя участвует в процессе антитромбоза за счет своей фибринолитической активности и ингибирования агрегации тромбоцитов, что дает возможность применения гомогената дождевых червей в тромболитической терапии.

Сравнительный анализ биохимических показателей сыворотки крови лабораторных животных показал, что исследуемые параметры находились в пределах референтных значений (Таблица 2).

Таблица 1 – Гематологические показатели лабораторных животных

Показатель	Начло эксперимента		Конец эксперимента
	контрольная группа	опытная группа	контрольная группа	опытная группа
WBC *109/L	18,6±0,978	17,5±0,879	19,2±1,101	15,7±0,957*
Lymph *109/L	9,9±0,638	10,1±0,744	10,7±0,938	10,8±0,738
Mon *109/L	0,6±0,097	0,5±0,101	0,5±0,477	0,6±0,687
Gran *109/L	7,4±0,727	4,5±0,627	7,9±0,727	4,4±0,427
Lymph%	53,1±3,17	59,7±2,14	56,2±2,87	68,7±2,27
Mon%	3,1±0,237	2,9±0,317	2,9±0,279	3,6±0,244
Gran%	38,9±3,93	25,7±3,18	40,9±4,01	27,7±3,24
RBC *1012/L	6,9±0,347	7,2±0,478	6,8±0,384	7,7±0,377*
HGB, г/л	126±5,67	127±4,98	123±3,77	137±4,17
PLT * 109/L	788±157	766±135	794±169	738±129

* – Здесь и далее знак статистически значимой разницы относительно контрольной группы

Т аблица 2 – Биохимические показатели сыворотки крови лабораторных животных

Показатель	Начло эксперимента		Конец эксперимента
	контрольная группа	опытная группа	контрольная группа	опытная группа
Общий белок, г/л	74,5±4,69	76,4±3,77	75,1±3,89	80,7±3,15*
Альбумин, г/л	38,3±1,52	37,2±1,39	38,9±1,99	41,1±1,47
Мочевина, ммоль/мл	4,26±0,597	4,15±0,497	4,05±0,617	3,91±0,421
Общий холестерин, ммоль/л	3,17±0,237	3,05±0,359	3,38±0,355	3,51±0,473
Глюкоза, ммоль/л	12,5±1,57	12,9±1,71	13,7±2,01	13,2±1,61

В начале эксперимента уровень общего белка крови у лабораторных крыс находился в пределах 74,5±4,69 –76,4± 3,77 г/л. В конце научного эксперимента установлено повышение концентрации общего белка в сыворотке крови лабораторных крыс опытной группы на 7,4 % относительно значений в группе контрольных животных. Аналогичная тенденция отмечена при анализе уровня альбумина в сыворотке крови, концентрация которого у животных опытной группы составила 41,1±1,47 г/л, что на 5,65 % выше, по сравнению с контрольной группой.

Заключение. В результате оценки физиолого-биохимического профиля лабораторных животных можно сделать заключение о том, что включение в рацион кормления лабораторных животных сухого гомогената дождевых червей способствует повышению концентрации гемоглобина и эритроцитов в крови, что свидетельствует об активации окислительновосстановительных процессов в организме животных. Установленная тенденция снижения числа тромбоцитов в крови лабораторных крыс опытной группы дает возможность предположить о наличии в гомогенате дождевых червей веществ, обладающих тромболитическим действием.

При исследовании биохимических показателей крови установлено повышение концентрации общего белка и альбумина в сыворотке крови опытных животных, в связи с данным фактом можно предположить, что применение в кормлении лабораторных крыс сухого гомогената дождевых червей способствует увеличению доступности белка, что в свою очередь активирует внутренний синтез белка в организме животных.

Резюме

В статье представлены результаты применения сухого гомогената дождевых червей в качестве кормовой добавки к рациону белых крыс линии Вистар (Wistar). Полученный экспериментальный материал позволяет утверждать, что введение в рацион самцов сухого гомогената дождевых червей в количестве 0,3 % к рациону, достоверно повышает массу животных в ходе эксперимента с их 100 % сохранностью. Живая масса опытных животных к концу эксперимента снизилась в среднем по группе с 257 до 210 г, в опытной группе она увеличилась с 236 до 310 г. Абсолютный прирост живой массы от применения гомогената в течение 30 дней из расчета 100 мг/100 г массы тела в опытной группе самцов был достоверно выше, чем у контрольных крыс и составил 48,8±0,15 г, а у самцов контрольной группы всего 34,6±0,01 г. Гематологические показатели свидетельствуют о повышении уровня гемоглобина в крови лабораторных крыс опытной группы на 7,87 % относительно животных контрольной группы; увеличении числа эритроцитов на 13,2 %; уменьшении числа тромбоцитов на 3,65%. Установлена тенденция снижения числа тромбоцитов в крови лабораторных крыс опытной группы. Биохимические показатели сыворотки крови говорят о повышении концентрации общего белка на 7,4 % относительно значений в группе контрольных животных. Уровень альбумина увеличился на 5,65 %.