Влияние введения плаценто-лизата на иммунологические показатели

Препараты из тканей плаценты в последние годы чаще применяют для профилактики и лечения послеродовой патологии у коров. Препараты из плаценты влияют на скорость инволюции матки, так как в плаценте содержится множество биологически активных веществ, которые ускоряют пролиферативные процессы в эндометрии и повышают тонус мускулатуры матки коровы [1,2,6,7].

Целью наших исследований явилось получение плацентолизата и определение иммунологических изменений в крови лошадей на его введение. Плацентолизат получали путем фильтрации частиц карункулов и котиледонов коров, которые предварительно растирали в фарфоровой чашке пестиком и растворяли в 20 мл физиологического раствора натрия хлорида (0,9%).

Антиплацентарную кровь (АПК) получали после двукратного введения плаценто-лизата лошадям с интервалом 14 суток. Пла-центолизат из частиц карункулов и котиледонов, попадая в организм лошадей, воспринимался их иммунной системой как иммуностимулятор, и вырабатывались антитела.

Материалы и методы исследования. Исследования проводились на кафедре хирургии, акушерства и патологии мелких животных ФГБОУ ВО Казанская Государственная академия ветеринарной медицины, в ООО АФ «Колос» Тетюшского района Республики Татарстан и ФГБНУ «Федеральный центр токсикологической, радиационной и биологической безопасности».

Полученный путем фильтрации пла-центолизат вводили лошадям опытной группы (n=3) подкожно в области шеи двукратно с интервалом 14 дней в дозе по 20 мл и сравнивали с состоянием животных контрольной группы (n=3), которым подкожно в области шеи двукратно с интервалом 14 дней вводили физиологический раствор в дозе по 20 мл.

У животных контрольной и опытной групп до и после введения плацентолизата и физиологического раствора определяли динамику иммунологических показателей.

Для иммунологических исследований кровь (18 проб) брали рано утром до кормления в вакуумные пробирки с ЭДТА-К-3: 6 проб – перед первым введением плацентоли-зата (до введения), 6 проб – перед вторым его введением (14-й день) и 6 проб – через 14 дней после второго введения плацентолизата (28-й день).

Для определения титра антител в сыворотке крови брали 10 мл крови из яремной вены лошадей в стерильные пробирки с активатором и оставляли в теплом помещении. Для определения Т- и В-лимфоцитов брали 10 мл крови из яремной вены лошадей в стерильные пробирки с ЭДТА-К-3. Нумерованные пробирки отправляли в лабораторию для исследований.

Определение Т- и В-лимфоцитов проводили методом розеткообразования, лизо-цимную активность сыворотки крови – с использованием культуры M. Lysodeikticus; бактерицидную активность – нефелометрическим методом по О.В. Смирновой, Т.А. Кузминой; фагоцитарную активность – по Кост и Стенко [3].

Для определения титра антител исследуемые сыворотки разводили в чистых сухих пробирках. Для каждой сыворотки использовали отдельную пипетку. Согласно инструкции, готовили соответствующие степени разведения сывороток. Сыворотки разводили 1:20, 1:40, 1:80, 1:160, 1:320, 1:640. В отдельной пробирке готовили основное разведение сыворотки – 1:20, смешивая 0,1 мл исследуемой сыворотки с 0,9 мл 0,9% физиологического раствора натрия хлорида. В опытные пробирки (2, 3, 4, 5, 6) наливали по 0,5 мл 0,9% физиологического раствора натрий хлорида. Затем из пробирки с основным разведением сыворотки 0,5 мл ее переносили в вторую пробирку, смешивали с физиологиче- ским раствором (1:40) и 0,5 мл переносили в третью пробирку (1:80), из третьего – в четвертую 0,5 мл (1:160), из четвертой – в пятую пробирки 0,5 мл (1:320) и из пятой – в шестую 0,5 мл (1:640), из шестой пробирки 0,5 мл выливали в сливную чашку, чтобы в каждой пробирке осталось по 0,5 мл разведенной сыворотки. Во все пробирки добавляли по 0,5 мл контрольного антигена (плацентолизата), смешивали, встряхивали и выдерживали в термостате 4-6 ч (370), затем при комнатной температуре 14-16 ч [4,5].

Результаты          исследований.

Результаты иммунологических исследований у лошадей перед первым введением плацен-толизата (до введения), перед вторым его введением (14-й день) и через 14 дней после второго введения плацентолизата (28-й день) указаны в таблице 1.

Таблица 1- Иммунологические показатели лошадей опытной группы на введение плацентолизата (n=3)

Показатели	Опытная группа (введение плацентолизата)
	до введения	14-й день	28-й день
В-лимфоциты, (%)	11,00±0,71	12,33±1,47	12,67±1,08
Т-лимфоциты, (%)	51,00±1,41	52,00±3,74	53,00±2,55
Лизоцимная активность, (%, лизиса)	8,83±0,89	10,17±1,08	11,83±1,14
Бактерицидная активность (%, лизиса E. coli)	50,33±2,48	63,67±5,35 *	70,67±4,97
Фагоцитарная активность нейтрофилов в крови, (%)
Фагоцитарный индекс	0,91±0,11	1,29±0,24 *	1,46±0,17
Фагоцитарная активность	43,33±3,56	43,33±3,49	52,33±4,71
Фагоцитарное число	1,73±0,25	1,77±0,29	2,13±0,40

Примечание: * - P<0,05

Из данных таблицы 1 видно, что у лошадей опытной группы после первого введения плацентолизата (14-й день) количество В-лимфоцитов повысилось на 12% (с 11,00±0,71 до 12,33±1,47), а на 28-й день увеличилось на 15,2% (с 11,00±0,71 до 12,67±1,08) по сравнению с начальным показателем (до введения). Количество Т-лимфоцитов на 14-й день увеличилось на 2% (с 51,00±1,41 до 52,00±3,74), а на 28-й день этот показатель повысился на 4% (с 51,00±1,41 до 53,00±2,55) по сравнению с начальным показателем (до введения). Показатель лизоцимной активности на 14-й день вырос на 15,2% (с 8,83±0,89 до 10,17±1,08), а на 28-й день на 34% (с 8,83±0,89 до 11,83±1,14) по сравнению с начальным показателем (до введения).

На 14-й день у животных опытной группы наблюдалось достоверное увеличение бактерицидной активности сыворотки крови на 26,5% по сравнению с начальным показателем (до введения) (с 50,33±2,48 до 63,67±5,35, P<0,05), а на 28-й день – на 40,4% (с 50,33±2,48 до 70,67±4,97). Фагоцитарная активность сыворотки крови после первого введения плацентолизата оставалась без изменения (43,33±3,56 и 43,33±3,49), а после повторного введения плацентолизата повысилась на 21% (с 43,33±3,56 до 52,33±4,71).

Таблица 2- Иммунологические показатели контрольной группы на введение 0,9% физиологического раствора (n=3)

Показатели	Контрольная группа (введение физраствора)
	до введения	14-й день	28-й день
В-лимфоциты, (%)	10,00±0,71	10,33±0,41	9,33±0,41
Т-лимфоциты, (%)	49,33±1,08	50,00±12,73 **	42,00±0,71
Лизоцимная активность, (% лизиса)	9,00±2,12	9,5±0,57	9,5±0,64
Бактерицидная активность (% лизиса E. coli)	51,00±9,90	60,00±8,49	68,00±10,61
Фагоцитарная активность нейтрофилов в крови, (%)
Фагоцитарный индекс	0,85±0,17	1,20±0,17	1,30±0,28
Фагоцитарная активность	43,00±11,31	44,00±12,02	46,00±4,96
Фагоцитарное число	1,5±0,42	1,40±0,35	1,60±0,36

Примечание: ** - P<0,005

Из данных таблицы 2 видно, что у лошадей контрольной группы после первого введения (14-й день) физиологического раствора количество В-лимфоцитов повысилось на 3,3% (с 10,00±0,71 до 10,33±0,41), а на 28й день снизилось на 7% (с 10,00±0,71 до 9,33±0,41) по сравнению с начальным показателем (до введения); Т- лимфоцитов на 14й день увеличилось на 1,3% (с 49,33±1,08 до 50,00±12,73), а на 28-й день снизилось на 14,8% (с 49,33±1,08 до 42,00±0,71); показатель лизоцимной активности на 14-й день после введения физиологического раствора увеличился на 5,5% (с 9,00±2,12 до 9,5±0,57)

и оставался без изменений на 28-й день (с 9,00±2,12 до 9,5±0,64) по сравнению с начальным показателем (до введения). На 14-й день у животных контрольной группы наблюдалось увеличение бактерицидной активности сыворотки крови на 17,6% (с 51,00±9,90 до 60,00±8,49), а на 28-й день на 33,3% (с 51,00±9,90 до 68,00±10,61), фагоцитарная активность сыворотки крови на 14-й день повысилась на 2,3% (с 43,00±11,31 до 44,00±12,02), а на 28-й день повысилась на 7% (с 43,00±11,31 до 46,00±4,96) по сравнению с начальным показателем (до введения).

Рисунок 1 - Динамика титра антител лошадей в опытной и контрольной группах

Из данных рисунка 1 видно, что введение плацентолизата вызывает ответную реакцию иммунной системы организма лошади и вырабатывает защитные антитела, обеспечивая формирование гуморального иммунитета. А при повторном введении плацентоли-зата иммунная система реагирует еще сильнее, чем при первом введении. Таким образом, при обнаружении антигена плацентоли-зата лимфоциты лошади начинают вырабатывать специальные белки – антитела, способные обезвредить эти антигены.

Заключение. Двукратное введение плацентолизата лошадям опытной группы приводит к значительному увеличению титра антител в сыворотке крови, количества Т- и В-лимфоцитов, а также бактерицидной, ли-зоцимной и фагоцитарной активности, что позволяет рекомендовать применение такой антиплацентарной крови (АПК) для ускорения регенерации карункулов и инволюции матки при лечении и профилактике послеродовых акушерско-гинекологических заболе- ваниях коров.

В результате двукратного введения плацентолизата лошадям опытной группы наблюдалось значительное увеличение титра антител в сыворотке крови, количества Т- и В-лимфоцитов, а также повышение бактерицидной, лизоцимной и фагоцитарной активности, что позволяет рекомендовать применение такой антиплацентарной крови (АПК) для ускорения регенерации карункулов и инволюции матки при лечении и профилактике послеродовых акушерско-гинекологических заболеваниях коров.

Darmenova A. G., Yusupov S. R., Zukhrabov M.G. Summary

As a result of double introduction of the platsentolizat to horses of experienced group significant increase in an antiserum capacity in blood serum, the number of T - and V-lymphocytes and also rising of bactericidal, lizotsimny and fagotsitarny activity was observed that allows to recommend use of such antiplacental blood (agrarian and industrial complex) for acceleration of ontogenesis of caruncles and an involution of a uterus at treatment and prevention puerperal obstetric and gynecologic diseases of cows.