Воспроизводительные качества свиноматок с разными генотипами по гену пролактинового рецептора

ДНК из крови выделяли комбинированным щелочным способом.

Генотипирование животных по гену PRLR проводили методом ПЦР-ПДРФ. ПЦР проводили на программируемом термоциклере «Терцик» (Россия) в объеме 20 мкл, содержащей буфер (60 мМ трис-HCl (рН 8,5), 1,5 мМ MgCl 2 , 25 мМ KCl, 10 мМ меркаптоэталол; 0,1 мМ тритон Х-100), 0,25 мМ dNTP, 1 ед. Taq ДНК полимеразы, по 0,5 мкМ праймеров PRL1 и PRL2 и свиней и 1 мкл ДНК-пробы.

Для амплификации фрагментов гена PRLR использовали следующие праймеры:

PRL1: 5/- СGG-CCG-CAG-AAT-CCT-GCT-GC-3/,

PRL2: 5/- ACC-CCA-CCT-TGT-AAC-CCA-TCA-TCC-3/ (R.C. Linville et al., 2001).

Амплификаты гена PRLR расщепляли эндонуклеазай AluI .

Для визуализации фрагментов ДНК пробы вносили в лунки 4% агарозного геля с содержанием этидия бромида (0,5 мкг/мл) и проводили горизонтальный электрофорез при 15 В/см в течение 40 мин в 1×ТВЕ буфере.

Частоту встречаемости генотипов пролактинового рецептора определяли по формуле:

p = n/N , где р – частота определения генотипа, n – количество особей, имеющих определенный генотип, N – число особей.

Частоту отдельных аллелей определяли по формуле:

Р А = (2nAA+nAB) : 2N и q B = (2nBB+nAB) : 2N , где P А – частота аллеля А , q B – частота аллеля В , N – общее число аллелей.

По закону Харди-Вайнберга [1] рассчитывали ожидаемую частоту генотипов в исследуемой популяции.

Оценка свиноматок с разными генотипами PRLR по воспроизводительным качествам проводилась по первому опоросу и включала следующие показатели: количество живых и мертворожденных поросят.

Полученные результаты в ходе научных исследований обработаны биометрическим методом [3]. Уровень достоверности полученных результатов определяли по критерию Стьюдента.

Результаты собственных исследований. Нами проведено исследование свиноматок чистопородной крупной белой породы на наличие в их геноме аллельных вариантов А и В гена PRLR , связанных с воспроизводительными качествами животных.

После обработки амплификата рестриктазой AluI выявляли три генотипа животных по гену PRLR : генотипу АА соответствовал продукт 127 п.н., генотипу АВ – 127, 92 и 35 п.н. и генотипу ВВ – 92 и 35 п.н.

Оценка результатов ПЦР-ПДРФ-анализа показала, что распределение свиноматок по генотипам локуса гена PRLR было следующим: 61 (61,0%) свиноматка имела гомозиготный генотип АА, 32 (32,0%)– гетерозиготный генотип АВ и всего 7 (7,0%) свиноматок – гомозиготный генотип ВВ. Частота аллеля А достигла 0,77, аллеля В – 0,32 (табл. 1).

Далее нами были проанализированы воспроизводительные свойства свиноматок с разными генотипами по локусу гена PRLR (табл. 2).

Проведенные исследования показали, что свиноматки с генотипом ВВ гена PRLR превосходили свиноматок с другими генотипами как по общему количеству рожденных поросят (на 1,16-1,32 поросенка), так и по количеству рожденных живых поросят (на 1,31-1,76 поросят) в среднем на одну свиноматку.

• 1.    Полиморфизм гена PRLR у свиноматок чистопородной крупной белой породы

• 2.    Количество поросят по первому опросу у свиноматок чистопородной крупной белой породы с разными генотипами по гену PRLR

Хозяйство		n	Генотипы						Частота аллелей		χ2
			АА		АВ		ВВ
			n	%	n	%	n	%	А	В
«Новая	Н	100	61	61,0	32	32,0	7	7,0	0,77	0,23	0,32
Тура»	О		59	59,0	35	35,0	5	5,0

Н – наблюдаемое распределение генотипов, О – ожидаемое распределение генотипов

Наименьшие показатели воспроизводительных качеств отмечены у животных с генотипом АВ (11,25 и 10,53 – рожденных и живых поросят соответственно). Достоверная разница выявлена между свиноматками с генотипами АВ и ВВ по количеству рожденных живых поросят – 1,76 поросенка (Р<0,05). При этом различия по другим показателям и генотипам PRLR были статистически недостоверными.

Процент мертворожденных поросят от свиноматок с разными генотипами по гену PRLR уменьшался в ряду АВ > АА > ВВ , что в количественном выражение составляло 6,4>3,8>2,2.

Генотип свиноматок по гену PRLR	Количество свиноматок	Количество поросят в среднем на одну свиноматку		Процент мертворожденных поросят
		всего	живых
АА	61	11,41±0,29	10,98±0,29	3,8
АВ	32	11,25±0,40	10,53±0,38	6,4
ВВ	7	12,57±0,65	12,29±0,71*	2,2

* – Р<0,05, разница между животными с генотипами АВ и ВВ

Выводы. 1. Свиноматки крупной белой породы являются полиморфными по локусу гена пролактинового рецептора. Доля животных с генотипом АА – 61,0%, АВ – 32,0%, ВВ – 7,0%, при этом частота встречаемости аллеля А составила 0,77, аллеля В – 0,23; 2. Наилучшие показатели по многоплодию имели свиноматки с генотипом ВВ гена пролактинового рецептора. У гетерозигот ( АВ ) наблюдались наихудшие показатели по многоплодию и проценту мертворожденных поросят – 6,4, что в 1,7-2,9 раза выше, чем у гомозигот ( АА и ВВ ).

ЛИТЕРАТУРА: 1. Жигачев, А.И. Ветеринарная генетика / А.И. Жигачев, В.Л. Петухов, Г.А. Назарова. – М.: Колос, 1985. – 369 с. 2. Лаломова, Е.В. Полиморфизм свиней по генам эстрогенового, пролактинового и рианодинового рецепторов : автореф. дисс. канд. биол. наук: 06.02.01 / Лаломова Елена Владимировна. – Лесные Поляны. – 2007. – 23 с. 3. Меркурьева, Е.К. Биометрия в селекции и генетике сельскохозяйственных животных / Е.К. Меркурьева. – М.: Колос, 1970. – 424 с. 4. Isler, B.J. Examination of the relationship between the prolactin receptor gene and reproductive tract components in swine / B.J. Isler, K.M. Irvin, M.F. Rothschild, G.J. Evans // The Ohio State University Department of Animal Sciences. Research and Reviews. – 2001. – P. 83-86. 5. Linville, R.C. Candidate gene analysis for loci affecting litter size and ovulation rate in swine / R.C. Linville, D. Pomp, R.K. Johnson, M.F. Rothschild // J. Anim. Sci. – 2001. – V. 79. – P. 60-67. 6. Vincent, A.L. The prolactin receptor gene is associated with increased litter size in pigs / A.L. Vincent, C.K. Tuggle, M.F. Rothschild // Iowa State Univ. Coop. Extens. Serv. – 1998. - № 638. – P. 30-31.

ВОСПРОИЗВОДИТЕЛЬНЫЕ КАЧЕСТВА СВИНОМАТОК С РАЗНЫМИ ГЕНОТИПАМИ ПО ГЕНУ ПРОЛАКТИНОВОГО РЕЦЕПТОРА

Нургалиев Ф.М.

Резюме

В данной работе представлены результаты влияния полиморфизма гена пролактинового рецептора ( PRLR ) на воспроизводительные качества свиноматок крупной белой породы. Исследования показали, что свиноматки с генотипом ВВ по сравнению со сверстницами с другими генотипами имели наибольшее количество рожденных поросят и наименьший процент мертворожденных поросят.

REPRODUCTIVE QUALITIES OF SOWS WITH DIFFERENT GENOTYPES OF THE PROLACTIN RECEPTOR GENE

Nurgaliev F.М.