Возрастная динамика АТФазной активности молока коров черно-пестрой и симментальской пород

В настоящее время накоплено достаточно доказательств того, что оболочка жировых шариков молока построена по типу биологической мембраны, поэтому активность ее транспортных АТФаз может характеризовать уровень метаболических процессов в молочной железе [2]. Активность ферментных систем животных зависит от степени воздействия различных факторов внешней и внутренней среды клетки: возраст, физиологическое состояние, гормональный и иммунный статус, стресс и др., в связи, с чем изучение их функциональных активностей в молоке является актуальной задачей [5,6].

Материалы и методы. Исследования проводили на крупном рогатом скоте симментальской и черно-пестрой пород (n=20) возрастом 24, 36 и 48 месяцев. Условия содержания и кормления животных соответствовали действующим нормативам. Пробы молока отбирали пропорционально суточному удою, выделение оболочек жировых шариков из молока проводили по методике, описанной в работе В.Н.Кириленко [2].

АТФазную активность оболочек жировых шариков молока определяли методом Keeton, K.S. (1972), при этом активность Na+,К+ -АТФазы рассчитывали по разности между общей АТФазой и уабаиннечувствительной АТФазой. При определении общей АТФазной активности смешивали 0,05 мл суспензии эритроцитов или гомогената тканей с 1,4 мл стандартной среды (150 мМ NaCl; 5,0 мМ KCl; 25 мМ трис-HCl; рН – 8,0). Затем к полученной суспензии добавляли 0,2 мл субстратной среды (3 мМ Na2АТФ, 3 мМ MgCl2) и пробы инкубировали в течение 45 мин при температуре 370С. Реакцию прекращали путем добавления 1,8 мл 6%-ного раствора трихлоруксусной кислоты. Пробы центрифугировали при 00С и в надосадочной жидкости определяли содержание неорганического фосфора. При определении Mg2+-АТФазы, т.е. уабаиннечувствительной АТФазы в субстратную среду вводили 10-4 М уабаина (строфантина G), который подавлял активность Na+,K+-АТФазы [7].

Неорганический фосфат определяли спектрофотометрическим методом [3], концентрацию белка в гомогенате - методом Варбурга и Кристиана [1]. Полученные данные подвергались биометрической обработке [4].

Результаты исследований. Исследованиями установлена зависимость активности транспортных АТФазных ферментных систем молока животных от их физиологического состояния, обусловленного генетическим потенциалом (породой) и возрастом (рис.1,2).

О Mg,Na,K-АТФаза      — ■— Mg-АТФаза      — * - Na,K-АТФаза

Рис.1- Возрастная динамика АТФазной активности молока коров черно-пестрой породы

о Mg,Na,K-АТФаза      — ■— Mg-АТФаза      — > - Na,K-АТФаза

Рис.2- Возрастная динамика АТФазной активности молока коров симментальской породы

С возрастом происходит достоверное увеличение активности всех исследованных АТФаз молока коров черно-пестрой и симментальской пород, что можно объяснить повышением уровня метаболизма в молочной железе. Так, в возрасте 24 месяцев активность общей АТФазы молока составила в группе черно-пестрых коров -22,08 нмоль Фн/мг белка в мин, в группе симментальских - 23,09 нмоль Фн/мг белка в мин; активность Na⁺,K⁺ " АТФазы составила, соответственно, 7,32 и 7,48 нмоль Фн/мг белка в мин. Уровень активности вышеназванных АТФаз молока в возрасте 48 месяцев составил в группе черно-пестрых коров- 26,90497 и 11,18633 нмоль Фн/мг белка в мин; в группе симментальских коров- 28,01669 и 11,33788 нмоль Фн/мг белка в мин, соответственно.

С целью выяснения силы влияния возраста и породы на активность общей, Mg2+-, и Na+, K+-АТФаз оболочек жировых шариков молока коров был проведен двухфакторный дисперсионный анализ. В качестве независимых переменных были определены: А - возраст коров и Б -порода.

В результате анализа было выявлено, что возраст коров оказывал достоверное ^(P < ^0,001) влияние на активность общей и Na⁺,K⁺-АТФазы молока, коэффициенты детерминации составили 56,5% и 41,6 % соответственно. Достоверного влияния возраста на активность Mg²⁺-АТФазы не было установлено. Кроме того, в группе черно-пестрых коров степень влияния возраста на активность общей и Na⁺,K⁺-АТФазы молока выше, чем в группе симментальских коров. Так, коэффициенты детерминации общей АТФазы составили 60,8 % и 56,3%, Na⁺,K⁺-АТФазы -49,7 % и 35,8 %, соответственно.

Активность общей и Mg2+-АТФазы достоверно (P<0,01) детерминирована породной принадлежностью животных на 3,19 % и 8,8 % соответственно. Достоверного влияния породы на активность Na+, K+-АТФазы не было установлено. Совместного достоверного влияния факторов (возраста и породы) на активность всех исследованных АТФаз не выявлено.

Заключение. Таким образом, установлено, что более высокий уровень АТФазной активности мембранных компонентов молока коров черно-пестрой и симментальской пород характерен для возраста 48 мес., низкий - для возраста 24 мес. Результаты дисперсионного анализа показали, что активность общей и Na⁺, K⁺-АТФазы молока достоверно детерминирована возрастом в большей степени в группе черно -пестрых коров.

ЛИТЕРАТУРА: 1. Досон Р. Справочник биохимика / Р. Досон, Д. Элиот, У. Эллиот. - М.: Мир, 1991. - 565 с. 2. Кириленко В.Н. Липиды мембран жировых глобул молозива и молока коров и их использование для получения липосом: дис. канд. биол. наук. - Киев., 1989. - 156 с. 3. Кондрашова М.Н. Метод определения неорганического фосфата по спектрам поглощения молибдатных комплексов в ультрафиолете / М.Н. Кондрашова, М.Н Лесогорова, С.Э. Шноль // Биохимия. – 1965. – Т.30, вып.3. – С. 567-562. 4. Макарова Н. В. Статистика в Excel / Макарова Н. В., Трофимец В. Я. // Учеб. пособие. — М.: Финансы и статистика, 2002. -368с. 5. Мосягин В.В.Влияние возраста и физиологического состояния на активность ферментных систем клеток, тканей и органов животных [Текст] : автореф. дис. … докт. биолог. наук / В.В.Мосягин – Москва, 2011. – 38 с. 6. Федорова Е.Ю. Породные особенности функционирования АТФазных ферментных систем эритроцитов и молока коров/ Федорова Е.Ю.,    Максимов    В.И.    //Вестник    Российской    академии сельскохозяйственных наук. 2012. - № 4. - С. 77-78. 7. Keeton, K.S. Characterization of adenosinetriphosphatase in erythrocyte membrane of the cow [Text] / K.S. Keeton, I.I. Kaneko // Proc. soc. ekp. biol. and med. – 1972. – N 1. – P. 140.

ВОЗРАСТНАЯ ДИНАМИКА АТФАЗНОЙ АКТИВНОСТИ МОЛОКА КОРОВ ЧЕРНОПЕСТРОЙ И СИММЕНТАЛЬСКОЙ ПОРОД

Федорова Е.Ю., Василевич Ф.И., Максимов В.И.

Резюме

Установлено, что более высокий уровень АТФазной активности мембранных компонентов молока коров черно-пестрой и симментальской пород характерен для возраста 48 мес., низкий – для возраста 24 мес. Результаты дисперсионного анализа показали, что активность общей и Na+, K+-АТФазы молока достоверно детерминирована возрастом в большей степени в группе черно-пестрых коров.

AGE DYNAMICS OF THE ATPASE ACTIVITY OF MILK COWS OF BLACK-AND-WHITE AND SIMMENTAL

Fedorovа E.Y., Vasilevich F.I., Maksimov V.I.