Выделение и идентификация y-пироновых соединений горечавника бородатого Gentianopsis barbata (Froel.) Ма.

Николаева И. Г., Николаева Г. Г., Кириллина Т. Ц. Выделение и идентификация γ-пироновых соединений горечавника бородатого Gentianopsis Barbata (Froel.) ма. // Вестник Бурятского государственного университета. Медицина и фармация. 2019. Вып. 4. С. 37‒40.

Виды семейства горечавковые (Gentianaceae) характеризуются способностью к биосинтезу и накоплению γ–пироновых соединений. Горечавник бородатый — Gentianopsis barbata (Froel.) Ма — это однолетнее травянистое растение высотой 10-60 см, произрастает на лесных лугах, луговых склонах, по лесным опушкам, солонцеватым берегам рек в европейской части России, Западной Сибири, Восточной Сибири, Дальнем Востоке, на субальпийских и альпийских лугах Средней Азии [4]. В народной медицине настой травы горечавника бородато- го применяется в качестве средства, возбуждающего аппетит и улучшающего пищеварение, а также при расстройствах желудочно-кишечного тракта. В тибетской медицине горечавник бородатый применяется под названием «тиг-да» [2].

Из данных литературы известно, что трава в составе горечавника бородатого содержит γ-пироновые соединения, алкалоиды (0,17%), из которых идентифицирован генцианин, а также обнаружены дубильные вещества (следы) и горечи [1].

Фармакологические исследовании показали выраженное желчегонное и умеренное противовоспалительное действие извлечений из горечавника бородатого [5, 6, 7].

Для выделения индивидуальных веществ горечавника бородатого использовали прием последовательной экстракции травы растворителями с изменением их полярности. Около 1,00 кг измельченного воздушно-сухого сырья травы горе-чавника бородатого экстрагировали 70%-ным спиртом в соотношении сырья и экстрагента 1:10. Объединенные экстракты концентрировали в вакууме до водного остатка, который последовательно обрабатывали в делительной воронке гексаном, хлороформом, этилацетатом и н-бутанолом.

Хлороформное извлечение горечавника бородатого упаривали на ротационном испарителе. Сухой остаток растворяли в минимальном количестве хлороформа, смешивали с силикагелем и наносили на колонку, заполненную силикагелем. Элюирование проводили хлороформом, а затем смесью хлороформа и спирта этилового и далее с постепенным увеличением концентрации последнего. Первые фракции содержали ксантоновый агликон — соединение 1 (1,8-диокси-3,7-диметоксиксантон — сверциаперенин). Из последующих фракций было выделено соединение — 2 (1-окси-3,7,8-триметоксиксантон — декуссатин), соединение 3 (1,7,8-триокси-3-метоксиксантон — гентиакохианин) и 4 (1,7-диокси-3,8-диметоксиксантон — гентикаулеин).

Упаренное этилацетатное извлечение смешивали с силикагелем и наносили на колонку, заполненную силикагелем. Элюирование проводили хлороформом и смесью хлороформа и метанола. При элюировании 5 %-ным раствором метанола в хлороформе было выделено вещество 5 (1-О-β-D-гликозид 3,7,8-триметоксиксантон) и вещество 6 (1-О-β-D-гликозид 3-метокси-7,8-диметоксиксантон ). Увеличением концентрации метанола в элюирующей смеси до 10%, после отгонки растворителя и перекристаллизации, получено соединение 7 ( 5,7,4*-триоксифлавон — апигенин); соединение 8 (5,7,3*,4*-тетраоксифлавон — лютеолин), и соединение 9 (5,7,4* -триокси-3*-метоксифлавон — хризоериол). 15 %-ной смесью метанола в хлороформе элюированием получены фракции, из которых после отгонки растворителя из небольшого объема выпадали желтые кристаллы вещества 10 (5,4*-диокси-7-метоксифлавон — генкванин). После отделения осадка и дальнейшей очистки на колонке силикагеля элюированием 20 %-ным метанолом в хлороформе получили соединение 11 (7-О-в-D-глюкопиранозил-5-,3*,4* триоксифлавон — цинарозид).

Бутанольное извлечение упаривали на ротационном испарителе до минимального объема смешивали с полиамидом и высушивали. Полученную смесь наносили на колонку, заполненную полиамидом. Водно-спиртовые фракции объединяли, упаривали до минимального объема и рехроматографировали. Элюирование проводили смесью хлороформ — этанол с возрастающей концентрацией последнего. выделено соединение 12 (7-О-β-D–глюкопиранозил–5-,3*,* триоксифлавон — цинарозид; соединение 11 (7-О-β-D-глюкопиранозил-5-4*-диметоксифлавон — тилианин). Увеличением концентрации этанола в элюирующей смеси были получены фракции, содержащие смесь веществ, которые после рехроматографирования содержали вещество 13 (7-О-β-D-глюкопиранозил -5 -, 4* диоксифлавон — космосиин) и соединение 14 (7-О-в-D-глюкопиранозил-5,3*-диокси-4*-метоксифлавон — диосметин — 7-О-гликозид).

Выделенные вещества горечавника бородатого по качественным реакциям и характеру поведения на хроматограммах отнесены к у-пиронам (ксантонам и флавонам). Отнесение веществ к конкретной группе проводили на основании результатов УФ-спектроскопии.

Кроме у-пироновых соединений из надземной части горечавника бородатого выделены тритерпеноиды — олеаноловая кислота, оксикоричные кислоты и се-коиридоидные гликозиды — свертиамарин и гентиопикрозид [3]. Химическое строение ксантонов и флавонов устанавливали с помощью качественных реакций, температуры плавления, элементного анализа, получения производных, УФ-, ПМР-, ЯМР- и 13С- и масс-спектров. Выделенные флавоны и мангиферин (который выделен методом препаративной хроматографии) непосредственно сравнивали с аутотентичными образцами. В гликозидированных соединениях углеводные фрагменты определяли после кислотного и ферментативного гидролиза методом хроматографии на бумаге в системах н-бутанол — пиридин-вода (6:4:3) в сравнении со стандартными образцами. О конфигурации гликозидной связи и величине окисленного цикла сахаров исследуемых гликозидов судили по данным кислотного и ферментного гидролиза, ПМР- и ЯМР 13С-спектроскопии. Положение углеводных заместителей определяли УФ- с добавками, ПМР- и ЯМР 13С-спектроскопией.

Таким образом, выделены и идентифицированы у-пироновые соединения — ксантоны, флавоноиды; тритерпеноиды; оксикоричные кислоты и секоиридоид-ные гликозиды горечавника бородатого.