Выделение липосом из яичного лецитина

Липосомы находят все большее применение в мире как перспективные носители лекарственных веществ, поскольку согласно результатам многочисленных клинических испытаний лекарства, вводимые в составе липосом, более эффективны и менее токсичны, чем применяемые в свободном виде.

Важное свойство липосом – это универсальность. Благодаря полусинтетической природе можно широко варьировать их размеры, и состав поверхности. Это позволяет липосомам переносить широкий круг фармакологически активных веществ: противоопухолевые и противомикробные препараты, гормоны, ферменты, вакцины, а также дополнительные источники энергии для клетки, генетический материал.

Липосомы сравнительно легко разрушаются в организме, высвобождая доставленные вещества, но по пути следования липосомы, сами лишенные свойств антигена, надежно укрывают свой груз от контакта с иммунной системой и, стало быть, не вызывают защитных и аллергических реакций организма [1].

Поэтому разработка способа выделения и применения липосом для этих целей актуальна и для ветеринарной медицины.

Целью исследований явилось выделение яичного лецитина и изготовление липосом.

Материалы и методы. Работа была выполнена на кафедре микробиологии Казанской государственной академии ветеринарной медицины и в отделе вирусологии Федерального центра токсикологической, радиационной и биологической безопасности. Для роторного испарителя объемом 100см3 .

Включаемый материал растворили в 0,01 М фосфатном буфере (рН 7,5) и добавили к раствору фосфолипидов. Затем обработали ультразвуком 22 кГц, мощностью 200 Вт в течении нескольких минут до тех пор пока не образовалась эмульсия. Колбу с эмульсией присоединили к роторному испарителю, постоянно понижая давление, чтобы эмульсия не вскипела. Об окончании получения липосом использовались липиды. Липосомы выделили «инжекционным» методом и методом «выпаривания и обращения фаз».

Для выделения липосом был использован яичный лецитин. Лецитин выделен следующим образом: в пробирку поместили 0,5 г сухого измельченного яичного желтка и добавили к нему 3 мл этилового спирта. Затем жидкость отфильтровали в сухую пробирку и добавили к нему несколько капель ацетона. Появившаяся муть свидетельствовала об осаждении лецитина [2]. Образовавшуюся суспензию перелили в центрифужные пробирки и центрифугировали при 2000 об/мин в течение 3-4 минут. Надосадочную жидкость слили, а осадок подвергли лиофильному высушиванию.

Липосомы выделяли следующими методами:

• 1.    Инжекционный метод. 50 мг яичного лецитина растворили в 1,0 мл 96%

• 2.    Метод « выпаривания и обращения фаз». 30 мг фосфолипидов растворили в 3 мл эфира и влили в круглодонную колбу

2006.- №3.-С.36-38. 2. Алимов А.М., Хазипов Н.З., Якупов Т.Р., Логинов Г.П. Практикум по биохимии с основами физколлоидной химии.-Казань, 2012.- С.170-171. 3. Nordilung I.R. Transbilayer distribution of phosphatidylethanolamine in Large and small unilamellar versicles/ I.R Nordilung, C.F.Schmidt, S.N. Dicken//Biochemistry.-1981/-Vol.20.-P.3237-3241. 4. Ротов К.А. Получение и характеристика липосом, содержащих антибиотики /К.А.Ротов, В.П.Васильев, Ю.В. Антонов// Микробиол.журн.-1989.-№6.-С.79-83.

этанола, и впрыснули при помощи шприца (игла 0,4×30,0 мм) в 15 мл 0,01М фосфатного буфера (рН 7,5), в котором предварительно растворили включаемый в липосомы материал. При этом важно постоянно перемешивать раствор на магнитной мешалке [3].

ЛИТЕРАТУРА: 1. Бабицкая С.В., Жукова

выпаривания судят по исчезновению запаха органического растворителя. К гелю добавили 5 мл 0,01 М фосфатного буфера (рН 7,5) и встряхивали до образования гомогенной структуры липосом [4].

Результаты исследований. По результатам проведенных научных исследований установлено, что липосомы, полученные разными методами, были гетерогенны по размеру.При выделении липосом методом «инжекции» выделены большие моноламмелярные везикулы, при методе «выпаривания и обращения фаз» образовались как моноламмелярные так и мультиламмелярные везикулы, в примерном соотношении 80:20. Наиболее крупные везикулы 150-950 нм получены с помощью метода «выпаривания и обращения фаз», при этом данный метод обеспечивает максимальный процент включения лекарственного препарата 78,5±0,5% . При выделении липосом методом «инжекции» размер липосомальной везикулы 100-800

нм, а уровень включения лекарственного препарата 8,8±0,2%

Заключение. Таким образом, исследованы два метода получения липосом из яичного лецитина. Показано, что метод «выпаривания и обращения фаз» обеспечивает максимальное включение водной фазы в структуру липидных везикул.

М.В., Кисель М.А. и др.// Химико-фарм. журнал,

ВЫДЕЛЕНИЕ ЛИПОСОМ ИЗ ЯИЧНОГО ЛЕЦИТИНА

Магдеева Э.А Резюме

Исследованы два метода получения липосом из яичного лецитина. Показано, что метод «выпаривания и обращения фаз» обеспечивает максимальное включение водной фазы в структуру липидных везикул.

ISOLATION OF EGG LECITHIN LIPOSOMES

Magdeeva E.A Summary

Studied two methods of preparation of liposomes from egg lecithin. It is shown that the method of "phase inversion and evaporation" maximizes the inclusion in the aqueous phase structure of lipid vesicles.