Взаимосвязь эндогенного потенциала тромбина и содержания тромбоцитов в тромбоцитарной плазме

Материал и методы.После получения информированного согласия доноров на обследование перед предстоящей кровосдачей венозную кровь, полученную путем пункции периферической вены без наложения жгута, стабилизировали 3,8 %-ным раствором цитрата натрия в соотношении 9:1. Стабилизированную цитратную кровь при температуре 20–22оС центрифугировали минут при 200g, после чего богатую тромбоцитами плазму переносили в пластиковую посуду. Оставшуюся часть крови центрифугировали при 2000g в течение 20 минут. Обедненную тромбоцитами плазму собирали в отдельную пластиковую посуду и использовали для приготовления серии разведений тромбоцитарной плазмы. Готовили разведения тромбоцитарной плазмы с содержанием тромбоцитов ,0·109/л, 10,0·109/л, 20,0·109/л, 30,0·109/л, 40,0·109/л, 0,0·109/л, 60,0·109/л, 70,0·109/л, 100,0·109/л, 200,0·109/л. Подсчет тромбоцитов для каждого образца в серии осуществляли на гематологическом анализаторе XN-3000 (производства SysmexGmbH, Japan) им- педансным методом, используя оригинальные реагенты (SysmexGmbH). Параллельно осуществляли контроль содержания тромбоцитов, используя микроскоп с фазовоконтрастной приставкой методом G. Brecheretal (19 3). Эндогенный потенциал тромбина определяли методом Hemker на флюороскане Fluoroskanascent производства Thermo Electron сorporation (Maastricht, Netherlands), с использованием наборов реагентов фирмы ThrombinoscopeBV. На 96 луночном планшете ThrombinoscopeBV (Maastricht, Netherlands) в каждые 4 лунки вносили по 80 мкл исследуемой, содержащей тромбоциты, плазмы. В первые 2 лунки добавляли 20 мкл реагента РRР (кат № TS42.00) содержащего смесь 0, рМ раствора тканевого фактора и фосфолипидов. Во вторые 2 лунки добавляли калибратор тромбина (кат № TS20.00). Реакцию инициировали после автоматического добавления на борту Fluoroskanascent 20 мкл смеси 2, мМ флуосубстрата в 0,1 М растворе кальция хлорида (Набор FluCa, кат № TS 0.00). Для каждой серии разведений выполнено по 10 исследований. Результат представлен как медиана (2 -й и 7 -й процентили)

Результаты. Наименьшая способность к генерации тромбина 14 ,0 (130,0–178,0) нМ/ л·мин зарегистрирована в плазме,содержа-щей тромбоциты в концентрации ,0·109/л. Наибольшая способность разведенной тромбоцитарной плазмы генерировать тромбин в количестве 13 7,0 (10 4,0–1 20,0) нМ/л·мин зарегистрирована при содержании тромбоцитов 200,0·109/л, что было меньше (р = 0,04; T-test), чем 142 (1080,0–1820,0) нМ/л·мин в обогащенной не разведенной тромбоцитарной плазме с содержанием тромбоцитов 46,0(376,0– 70,0)·109/л. Минимальная величина ЭПТ 289,0 (178,0–4 4,0) нМ/л·мин, превышающая пороговое значение 2 0 нМ/л·мин была зарегистрирована при числе тромбоцитов в пределах 20,0·109/л. В диапазоне от (20,0– 100,0)·109/л между содержанием тромбоцитов и величиной эндогенного потенциала тромбина (ЭПТ)тромбоцитарной плазмы выявлена линейная зависимость.Наличие линейной зависимости подтверждал коэффициент отношения величины ЭПТ к содержанию тромбоцитов для каждой из серий разведения тромбоцитов в тромбоцитарной плазме.При содержании тромбоцитов более 100,0·109/л, генерируемый тромбоцитами, ЭПТ не прирастал параллельно увеличению содержания тромбоцитов в исследуемой плазме.Снижение величины ЭПТ параллельно снижению содержания тромбоцитов в диапазоне (100,0–20,0)·109/л сопровождается торможением генерации тромбина в тромбоцитарной плазме пропорционально степени тромбоцитопении. Данное обстоятельство указывает на необходимость, в случае проведения противотромботического лечения, уменьшения терапевтической дозы низкомолекулярных гепаринов пропорционально степени тромбоцитопении при снижении содержания тромбоцитов в крови менее 100,0·109/л.Сни-жение содержания тромбоцитов в крови менее 20,0·109/л приводит к снижению ЭПТ менее 2 0 нМ/л·мин,что повышает риск кровотечения, связанного с тромбоцитопенией.

Выводы. Снижение величины ЭПТ параллельно снижению содержания тромбоцитов в диапазоне (20,0–100,0)·10⁹/л сопровождается торможением генерации тромбина в тромбоцитарной плазме пропорционально степени тромбоцитопении, что определяет необходимость пропорционального снижения дозы антикоагулянта у пациентов с тромбозом.