Взаимосвязь клеточного звена иммунитета и цитокинового профиля при хроническом вирусном гепатите в у детей и подростков

На современном этапе в структуре заболеваемости детей по медико-социальной значимости первое место занимают хронические инфекции с высоким риском возможных осложнений. К таким заболеваниям относятся хронические вирусные гепатиты (ХВГ) – медленно прогрессирующие хронические инфекции, протекающие, как правило, с фиброзированием ткани [1]. В настоящее время особенно остро стоит вопрос заболеваемости хроническим вирусным гепатитом В (ХВГВ) у детей и подростков, так как происходит омоложение HBV-инфекции, что может привести к увеличению числа хронических форм поражения печени в ближайшие десятилетия.

Несомненно, важная роль в развитии хронического течения вирусных гепатитов принадлежит иммунной системе. В патогенезе, течении и исходах парентеральных гепатитов ведущая роль отводится иммунным механизмам [2]. В развитии и исходах ХВГ решающее значение имеет состояние организма ребенка, в частности, его иммунной системы. Особенности взаимоотношений с иммунной системой предопределяют как разнообразие клинических форм заболевания, так и исходов ХВГ. Иммунодиагностика при всех процессах имеет значение для изучения этиопатогенеза заболевания, прогнозирования обострения, для выбора метода лечения и оценки его эффективности

[3]. Считается, что иммуноопосредованные механизмы играют главнейшую патогенетическую роль в развитии хронических вирусных гепатитов В. При этом центральная роль в регуляции развития как местного иммунного ответа в месте локализации возбудителя, так и общей реакции организма на патоген принадлежит цитокинам [4]. Высокое содержание цитокинов может быть обусловлено нарушением процесса их инактивации в печени при ХВГ [57]. В соответствии с поставленными задачами и учитывая данные, полученные при клиникобиохимическом обследовании детей и подростков, нами проведено исследование состояния иммунной системы у больных с ХВГВ. Была выявлена зависимость уровня цитокинов от состояния системы иммунитета при хроническом вирусном гепатите В у детей и подростков.

Цель работы: изучить иммунологические особенности ХВГВ у детей и подростков в зависимости от фазы заболевания и оценить взаимосвязь цитокинового профиля и клеточного звена иммунитета.

Материалы и методы исследования. Мы исследовали состояние клеточного звена иммунитета и цитокиновый профиль у 87 детей и подростков с ХВГВ. Больные были в возрасте от 7 месяцев до 18 лет. В соответствии с поставленным диагнозом больные ХВГВ были разделены на 2 фазы: репликативную и интегративную. Из обследованных детей у 34,5% с ХВГВ наблюдалась фаза репликации, у остальных больных была фаза интеграции.

Диагноз ставился в соответствии с современными требованиями, с учетом классификации хронических гепатитов (Лос-Анжелес, 1994) и МКБ 10 пересмотр (Международная статистическая классификация, 1995г.). Были проведены клинические наблюдения и исследования с применением общеклинических, биохимических, инструментальных, иммунологических методов, позволяющих получить наиболее полную и объективную информацию о наблюдаемых детях, больных ХВГ. Верификация диагноза проводилась методом ПЦР и ИФА. Иммунологические исследования проводились на базе Института экспериментальной медицины и биотехнологий Самарского государственного медицинского университета. Идентификацию лимфоцитов и их субпопуляций осуществляли стандартным методом непрямой иммунофлюоресценции с использованием моноклональных антител (ИКО-86 и ИКО-31), выпускаемых Нижегородским НПК «Препарат», к их поверхностным антигенам (СD). Цитокины в сыворотке крови определяли методом иммуно-ферментного анализа с применением наборов реагентов, выпускаемых ООО «Протеиновый контур» (г. Санкт-Петербург, 2004), по прилагаемым инструкциям, результаты выражали в пг/мл. Полученные в ходе работы данные регистрировались в индивидуальных картах с одновременным кодированием для последующей компьютерной обработки. Для оформления результатов исследований применялись пакеты из системы Microsoft Office-2010 и CorelDraw-13.

Результаты исследования и их обсуждение: Этиологическое единство острых и хронических форм вирусных гепатитов позволяет рассматривать их как фазы единого инфекционного процесса, в котором реакции иммунной системы играют решающую роль в развитии той или иной формы повреждения печени [8,9]. По литературным данным в настоящее время ведется активное изучение патологии ХВГ с клинико-иммунологических позиций. В основе патогенеза хронических вирусных гепатитов лежат глубокие нарушения иммунного ответа с дисбалансом количественного и качественного состава иммунокомпетентных клеток, с нарушением их функциональной активности и клеточной кооперации. Результаты определения показателей общего иммунного статуса в сыворотке крови детей и подростков, больных ХВГВ представлены в таблице 1.

Таблица 1. Иммунологические показатели крови у детей и подростков, больных ХВГВ, в репликативной и интегративной фазе

Примечание: здесь и далее уровни достоверности различия с контролем: * - р<0,05; ** - р<0,01; *** р<0,001.

При анализе иммунограммы мы определили дисбаланс хелперного и супрессорного звеньев иммунитета. Недостаток супрессоров усиливает выработку антител и образование иммунных комплексов, что вызывает аутоиммунные поражения. В наших исследованиях выявлено снижение показателя CD3+ маркера Т-лимфоцитов как в репликативной (44,19±1,26%), так в интегративной фазе (51,72±0,93%). Отмечалось также снижение показателя CD4+ (21,56±0,75% и 27,95±1,28%) CD8+ (20,91±1,15% и 22,73±0,27%) как в репликативной, так и в интегративной фазе соответственно. Наблюдалось снижение показателя CD8+ в обе фазы: в репликативной – 20,91±1,15%, в интегративной – 22,73±0,27%.

Концентрация CD8+-лимфоцитов имела небольшую тенденцию к снижению по сравнению с контрольной группой. Соотношение CD4+/CD8+ значительно снижено 1,03±0,08 в репликативной фазе по отношению к контрольной группе .

Проведенные исследования показали, что у этих больных в фазе репликации с выраженной биохимической активностью достоверно снижается количество CD3+, CD4+, отмечается гипосупрессия CD 8+, соотношение CD 4+/CD8+ значительно снижено. Выявлено снижение показателя СD16+ в обе фазы по сравнению с контрольной группой: в репликативной – 6,8±1,13%, в интегративной – 7,53±1,12%. Наиболее выражен показатель

CD95+ в репликативной фазе 46,18±0,94% по сравнению с интегративной – 53,25±1,72%. Это говорит о наибольшей выраженности апоптоза молекулы CD95+ в интегративной фазе, что говорит об ослаблении иммунной системы.

Также нами было проведено исследование сыворотки крови детей, больных ХВГВ в репликативной и интегративной фазах на соотношение уровня цитокинов (табл. 2).

Таблица 2. Соотношение уровня цитокинов при ХВГВ у детей и подростков

Из представленной таблицы видно, что наибольшие значения ИЛ-1 мы наблюдали в репликативной фазе ХВГВ (13,75±1,01 пг/мл). ИЛ-4 – противоспалительный цитокин – в обе фазы остается в пределах нормы, но несколько выше в фазе репликации по сравнению с фазой интеграции (3,19±0,16 пг/мл и 2,0±0,11 пг/мл). Более повышенные показатели ИЛ-6 в интегративной фазе ХВГВ – 41,85±1,64 пг/мл, чем в репликативной – 16,85±1,24 пг/мл, соответственно. ИЛ-8 усиливает повреждение и фиброзирование печени. Более повышенные показатели цитокинов в интегративной фазе ХВГВ ИЛ-8 – 78,88±2,21 пг/мл, чем в репликативной – 58,1±2,21 пг/мл, соответственно. Показатели ИЛ-10 в обе фазы ХВГВ находятся в пределах нормы – 14,95±0,66 пг/мл и 4,42±0,12 пг/мл в репликативной и интегративной фазе соответственно. При ХВГВ у детей в репликативной фазе показатель ИФН-γ ниже, чем в интегративной, и составил 2,88±0,15 пг/мл и 22,91±1,43 пг/мл, соответственно. Уровень ФНО-α в сыворотке крови у обследуемых детей был наиболее повышен в интегративной фазе – 69,1±4,53 пг/мл.

Рассмотрим взаимосвязь клеточного звена иммунитета и цитокинового профиля при ХВГВ у детей и подростков. Т-клетки СD4+ играют важную роль в индукции цитотоксических Т-лимфоцитов. Активация Th1, продуцирующих интерферон-γ, ФНО-α ведет к стимуляции функций Т-лимфоцитов и макрофагов и развитию иммунного ответа по клеточному типу, который играет решающую роль в защите от внутриклеточных возбудителей, включая вирусы. В нашем случае ИФН-γ повышен в интегративной фазе и ФНО-α повышен в обе фазы, что привело к снижению показателя СD4+. ИЛ-8 продуцирует Т-лимфоциты. Так как вышеуказанный интерлейкин повышен, а показатель CD3+ по сравнению с контрольной группой в обе фазы снижен, это говорит о снижении данного показателя иммунитета в обе фазы.

Т-клетки СD8+могут подавлять репликацию вируса в пораженных клетках, секретируя ИФН-γ и ряд других цитокинов. В нашем случае ИФН-γ повышен только в интегративной фазе. По литературным данным цитотоксические СD8+-клетки связаны с мембранноассоциированными молекулами ФНО-α, которые у нас повышены в обе фазы. Соответственно показатель СD8+ в обе фазы снижен. Снижение показателей CD4+, CD8+ у детей и подростков с ХВГВ свидетельствует о том, что Т-клеточный пролиферативный ответ на антигены вирусов гепатита В является достаточно слабым.

СD16+ – это рецептор, экспрессируемый на мембранах NК-клеток (естественных киллеров). Он является важным эффекторным механизмом противовирусной резистентности. NК-клетки, также как и Т-лимфоциты, служат источником образования ИФН-γ. Показатели СD16+ в обе фазы снижены. Стойкое угнетение Т-клеточного звена, резкий дисбаланс им-мунорегуляторных клеток в сочетании с толерантностью к вирусу гепатита В определяют прогрессирование патологических процессов в печени, высокую репликативную активность [10].

Выводы:

• 1.    При ХВГВ показатель ИЛ-1 в интегративной фазе снизился, поэтому, несмотря на то, что хронизация процесса идет, в прогностическом отношении прогноз более благоприятный. Данный показатель свидетельствует о том, что у ХВГВ более благоприятное течение.

• 2.    Особенностями ХВГВ являются диссоциации между уровнем провоспалительных цитокинов ИЛ-1, ИЛ-6, ФНО-α и противоспа-лительных ИЛ-4, ИЛ-10. Это свидетельствует о дезинтеграции воспалительного процесса с переходом в хроническое течение.

• 3.    При ХВГВ у детей и подростков при возрастании ИЛ-4, ИЛ-8, ФНО-α, ИФН-γ происходит снижение показателей СD4+, СD3+, СD8+, СD16+, которые участвуют в Т-клеточном звене иммунитета.